血管生成相關分子標記物與急性腦梗死患者頸動脈顱外段狹窄相關性研究*

費云瀚,劉 斌,董亞楠,崔 穎,鄧春穎

華北理工大學附屬醫院神經內一科(唐山063000)

腦梗死(Cerebral infarction ,CI)是神經內科中常見的急性病癥，其發病率、致殘率、病死率和復發率均較高，嚴重影響著人們的健康[1]。頸動脈顱外段狹窄是急性腦梗死發生及病情進展的重要原因之一[2]，動脈粥樣硬化是頸動脈顱外段狹窄形成的主要因素[3]。動脈粥樣硬化斑塊的形成伴隨著許多血管生成因子參與，這些因子作用于血管內皮細胞，對內皮細胞的生長起到調節作用，相關因子可以使得微血管通透性增加，并誘導血管生成。血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)作為體內重要的促血管生成分子[4]，在促進血管內皮細胞增殖的基礎上，增加了動脈斑塊生成的可能。成纖維細胞生長因子(Fibroblast growth factor,FGF)被證實不僅與血管新生有關，同時參與頸動脈硬化進程[5]。胎盤生長因子(Placental growth factor,PLGF)具有較強的促斑塊生成作用[6]，同時對血管狹窄有重要影響。血管生成素(Angiogenin,Ang)是一種新發現的血管生成蛋白分子[7]，主要作用于血管成熟，影響血管穩定性。近年來，關于VEGF、FGF、PLGF和Ang與冠狀動脈狹窄相關性研究較多[8-10]，但對于血清VEGF、FGF、PLGF和Ang與頸動脈顱外段狹窄及程度的相關性文獻報道較少。本研究通過檢測急性腦梗死患者血清VEGF，FGF，PLGF和Ang水平，探討急性腦梗死患者VEGF，FGF，PLGF和Ang水平與頸動脈顱外狹窄的關系，為急性腦梗死患者的治療和預防提供依據。

資料與方法

1 一般資料 選取2017年1-12月在華北理工大學附屬醫院神經內科住院的急性腦梗死患者225例(腦梗死組)，腦梗死診斷符合中國急性缺血性卒中診治指南2014的急性腦梗死診斷標準[11]，并經頭顱MRI或頭顱CT確診。均為首次發病的急性腦梗死者。入選標準：①腦梗死為首次發病，病程在3 d之內；②入院后3 d內進行頸動脈超聲檢查。排除標準：①心源性、腫瘤性卒中；②顱腦出血、顱內感染及腫瘤；③合并煙霧病、淀粉樣血管病或其他腦血管異常疾病；④伴有嚴重心、肺、腎、肝等其他臟器疾病；⑤不能配合頸動脈超聲檢查者。⑥臨床資料不完整者。本研究經醫院倫理委員會同意批準，患者自愿參加，均簽署知情同意書。225例急性腦梗死患者中，男性108例，女性117例，年齡50～86，平均(64.0±6.2)歲。根據頸動脈超聲檢查結果有無頸動脈顱外段狹窄分為無狹窄組(61例)和狹窄組(164例)。無狹窄組患者61例，男性21例，女性40例，年齡51～76，平均(61.8±4.5)歲；狹窄組患者164例，男性87例，女性77例，年齡50～86，平均(64.8±6.5)歲。根據頸動脈顱外段狹窄程度，將狹窄組分為：輕度狹窄組71例，中度狹窄組46例和重度狹窄組47例。選取同期健康體檢者145例作為對照組，其中男性59例，女性86例，年齡46～72，平均(60.3±5.8)歲，并經顱腦CT或MRI證實無異常，頸部血管超聲結果無狹窄。腦梗死組與對照組之間在年齡和性別方面比較，差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。

2 檢查方法

2.1 頸動脈彩超檢查：所有患者在入院3 d內使用美國SIEMENSA ACUSON X150彩色多普勒超聲檢查儀進行頸動脈超聲檢查。將超聲探頭頻率設置為7.5～13 MHz。檢查前，囑患者取平臥位，在頸下置一軟墊，使其頭枕舒適、頸部放松，并將頭部稍傾向對側，暴露頸部，自下而上連續觀察，右側自無名動脈自主動脈弓起始段始；左側頸總動脈始于主動脈弓；雙側椎動脈自雙側鎖骨下動脈始。記錄頸動脈顱外段內中膜厚度、斑塊的形態及位置、頸動脈顱外段狹窄程度。頸動脈顱外段狹窄程度分級根據北美癥狀性頸動脈內膜剝脫術(NASCET)標準評定[12]：①輕度狹窄：狹窄率為1%～49%；②中度狹窄：狹窄率為50%～69%；③重度狹窄：狹窄率為70%～99%。

2.2 血清VEGF、FGF、PLGF、Ang水平測定： 在入院后第二天早晨于患者肘正中靜脈采集3 ml血液，血液標本于采血后30 min內置于離心機低溫離心完畢，快速分離血清1～2 ml，轉數4500 r/min，離心時間設定5 min，血清保存于-70℃冰箱待測。采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血清VEGF、FGF、PLGF、Ang水平，試劑盒購自灝洋生物制品科技有限公司(天津) ，并嚴格按照操作說明進行檢測。

結果

1 腦梗死組與對照組血清VEGF、FGF、PLGF、Ang檢測結果比較 急性腦梗死患者血清VEGF、FGF、PLGF、Ang水平均明顯高于對照組，差異有統計學意義(均P<0.01)，見表1。

表1 腦梗死組與對照組血清VEGF、FGF、PLGF、Ang檢測結果比較(ng/L)

2 腦梗死頸動脈狹窄組與無狹窄組血清VEGF、FGF、PLGF、Ang檢測結果比較 腦梗死患者頸動脈顱外段狹窄組患者血清VEGF、FGF、PLGF、Ang水平均明顯高于無狹窄組，差異有統計學意義(均P<0.01)，見表2。

表2 腦梗死頸動脈狹窄組與無狹窄組血清VEGF、FGF、PLGF、Ang檢測結果比較(ng/L)

3 腦梗死患者不同頸動脈顱外段狹窄程度組血清VEGF、FGF、PLGF、Ang檢測結果比較 中、重度狹窄組血清VEGF、FGF、PLGF、Ang水平明顯高于輕度狹窄組，且重度狹窄組上述指標要高于中度狹窄組，且各組之間差異均有統計學意義(均P<0.01)，見表3。

表3 腦梗死患者不同頸動脈顱外段狹窄程度組血清VEGF、FGF、PLGF、Ang水平比較(ng/L)

4 VEGF、FGF、PLGF、Ang水平與腦梗死患者頸動脈顱外段狹窄程度相關性分析 對VEGF、FGF、PLGF、Ang與腦梗死患者頸動脈顱外段狹窄程度進行Pearson相關分析，狹窄程度用狹窄率表示，結果提示VEGF、FGF、PLGF、Ang與頸動脈顱外段狹窄程度呈顯著正相關(r值分別為0.653、0.612、0.663、0.578，均P<0.01)，見圖1～4。

討論

頸動脈狹窄是急性腦梗死發生、發展的重要危險因素[13-14]，而頸動脈狹窄與頸動脈粥樣硬化和動脈斑塊的形成密切相關。血管內皮生長因子VEGF是一類高度特異性促血管內皮生長的細胞因子，與腦梗死關系密切，參與動脈粥樣硬化、血管生成及腦梗死后血管修復[15]。VEGF可直接作用于血管內皮細胞并促進內膜增生，導致動脈粥樣硬化斑塊生成[16]，還可與血管內皮的相應蛋白受體相結合，刺激增殖的內皮細胞進行遷移[17]，使硬化斑塊進一步生長。Ulas等[18]認為，VEGF的上調，能導致血管局部能量代謝異常，主要為血糖、血脂高代謝，成為促動脈硬化的因素。

成纖維細胞生長因子(FGF)作為一種多肽性成纖維細胞絲裂原，可促進血管內皮細胞增殖、分化和凋亡，也可增強內皮細胞的黏附、識別和遷移，以促進新血管形成。FGF不僅能直接作用于血管內皮細胞而引起血管狹窄，還參與高血壓和血管生成過程[19-20]。Chow等[21]評估了670例受試者的頸動脈內膜厚度與血清FGF之間的關系，結果表明FGF水平與頸動脈粥樣硬化有關。

胎盤生長因子(PLGF)是一種能促進血管生成和動脈生成的糖蛋白，屬于VEGF家族中一員，參與了腦梗死的病理生理過程。目前對胎盤生長因子和頸動脈狹窄關系的研究十分有限。PLGF在動脈粥樣硬化斑塊形成的早期階段起著重要作用，PlGF可在病理環境中刺激新生血管生成，內皮細胞增殖，并且通過上調NO水平引起血管痙攣。PLGF可促進炎癥細胞的趨化作用，并介導局部炎性反應，作用于巨噬細胞，促進其產生蛋白溶解酶，纖維帽破裂風險增加，導致動脈斑塊不穩定。

血管生成素(Ang)和VEGF一樣，是一類促進血管形成和分化的重要調節因子，與血管的形成和生長密切相關。可以通過多種途徑在缺血性腦血管疾病中發揮作用。Hakanpaa等[22]發現，Ang主要存在于血管內皮細胞中，通過與相關受體結合誘發內皮細胞凋亡，增加血管內皮不穩定性并激活血小板活化因子，促進血小板聚集致使斑塊形成。同時，Ang能與其他生物活性因子共同調控血管內皮病理變化，使血管狹窄進一步發展。

本研究結果顯示，急性腦梗死患者血清VEGF、FGF、PLGF和Ang水平顯著高于健康人群，進一步比較急性腦梗死患者頸動脈顱外段狹窄不同狹窄程度患者的血清VEGF、FGF、PLGF和Ang水平，頸動脈顱外段狹窄患者的上述四種因子水平明顯高于無頸動脈顱外段狹窄患者，且VEGF、FGF、PLGF和Ang增高與急性腦梗死患者頸動脈顱外段狹窄及狹窄程度密切相關。結果表明，VEGF、FGF、PLGF和Ang在急性腦梗死頸動脈顱外段狹窄患者血清中呈高表達．其表達水平隨著頸動脈狹窄程度的增加而升高，并且與頸動脈顱外段狹窄程度呈正相關。因此，推測血清VEGF、FGF、PLGF和Ang高水平可能是頸動脈顱外段狹窄發生和發展的危險因素之一，VEGF、FGF、PLGF和Ang在頸動脈顱外段狹窄的發生和發展過程中起著重要的作用。這為急性腦梗死患者頸動脈顱外段狹窄的治療和病情監測提供了參考依據。