間隙連接蛋白與卵泡成熟的研究

須文馳 陳卓

【摘要】目的：間隙連接蛋白從卵泡形成開始就存在并表達于卵巢組織中，隨著卵泡的發育和成熟，顆粒細胞持續表達，當間隙連接蛋白43缺失時卵泡停止于腔前卵泡階段。而間隙連接蛋白37主要起到介導卵母細胞與其周圍顆粒細胞之間細胞通訊的作用。盡管成熟卵泡中存在著不同的問隙連接蛋白，間隙連接蛋白43是仍然是被發現的存在于小鼠早期腔前卵泡中的唯一間隙連接蛋白。因此，間隙連接蛋白的缺乏可導致卵泡發育停滯。

【關鍵詞】間隙鏈接;卵泡發育;卵丘細胞;卵泡

【中圖分類號】R249【文獻標識碼】B【文章編號】2095-6851（2019）02-058-02

不孕癥為發生在育齡期，未采取任何避孕措施有正常性生活，同居1年為妊娠的患者。根據世界衛生組織評估，約每7對夫婦中有1對夫婦存在生殖障礙。在我國的流行調查中，國內不孕癥患者比率已高達已婚夫婦的10%，增長超過上世紀80年代調查結果一倍[1]。而40年前興起的治療不孕不育的新方法-人類輔助生殖技術，在不斷的進步中為數以萬計的患病夫婦帶來福音。

輔助生殖技術是以受孕為目的技術，方法包括對胚子、合子、胚胎進行醫學技術等操作，其發展主體為體外受精-胚胎移植及其繁衍技術。上世紀60年代人類首次開展針對試管嬰兒的研究，至1978年人類首例試管嬰兒于英國誕生，僅十年后在張麗珠教授的帶領下我國首例試管嬰兒也成功誕生[2]。多項流行病學調查顯示，不孕的原因復雜，女方因素占45-55%，男方因素占35%，男女雙方共同因素占10%-20%，不明原因不孕約占10%[3、4]。其中女性不孕的病因主要有排卵異常、輸卵管因素、子宮內膜異位癥、子宮因素、宮頸因素[5]等;男方因素則分為睪丸前性因素，包括內分泌疾病等因素引起;睪丸性因素：染色體異常、引起睪丸損傷的其他病因;睪丸后性因素：精子運輸障礙和精子功能障礙

基金項目：本論文是貴陽市科技局2015年科研項目課題研究成果 《定量檢測間隙鏈接蛋白并預測卵泡成熟和IVF-ET妊娠結局的相關性研究》（項目編號【20051001】社21號）

作者簡介：須文馳，女，漢族 1990年生，貴州貴陽人，初級，碩士。生殖內分泌。

通訊作者：陳卓，女，生殖內分泌。

等[5，6]。根據患者不孕不育的病因，可選擇的輔助生殖包括人工授精（AI）、體外受精-胚胎移植技術（IVF-ET）、卵母細胞質內單精子注射（ICSI）[7]及胚胎移植前診斷（PDG）等技術。而這些技術能夠成功的基礎之一則是擁有正常健康的卵子。在輔助生育治療的促排卵過程超出生理水平的促性腺激素使得多個卵子發育，其中可能存在一些內在缺陷的卵子也獲得繼續發育成熟的機會，而這些卵子與正常的卵子混雜在一起進行了受精，也可能被移植，導致妊娠率下降，流產率升高，所以移植前評估卵子的質量變得至關重要。

卵泡是女性生殖系統的基本功能單位，由膜細胞、顆粒細胞、卵母細胞組成，其中透明帶分隔卵母細胞和顆粒細胞。目前評價卵母細胞和胚胎質量主要依賴于相應的形態學參數：卵冠丘復合物（OCCC）：卵丘顆粒細胞與卵母細胞之間的對話起關鍵作用，放射冠顆粒細胞凸入胞漿，穿過透明帶，卵母細胞膜存在間隙連接細胞間分泌足量透明質酸，從而形成放射狀，胞漿成熟與放射冠有重要的關系。成熟卵母細胞的形態評估方法包括MII卵母細胞的紡錘體、透明帶、極體、透明帶下間隙、卵細胞折光內容物等。卵子的無創非形態學評估：代謝評估指標包括卵泡液中氧、ATP、VEGF、培養系統的氧消耗量、抗苗勒管激素水平等。

在卵泡發育過程中卵母細胞與顆粒細胞，以及膜細胞之間的細胞連接可傳遞信號交流卵母細胞所需營養及。卵泡種數量較多的通訊蛋白為間隙連接蛋白（Cx）43，其缺失可直接影響卵泡成熟及早期胚胎的發育。子宮平滑肌和心肌細胞中均有間隙連接蛋白特異性表達;臨產后子宮肌細胞間隙連接蛋白的大量形成，為子宮宮縮發動和同步收縮提供了必要的條件。其表達經過雌二醇、催產素等甾體激素調節后形成的刺激信號，致使mRNA和蛋白的表達上調，最終誘發宮縮。而孕酮可對間隙連接通道形成抑制作用機制為阻止間隙連接蛋白從高爾基體裝配至肌肉細胞膜上。同時，因為編碼間隙連接蛋白的基因的變異導致其他器官發生疾病的研究也在逐漸增多。Martin CS等人的研究及Barbara T等人的實驗中分別印證了當編碼Cx26及Cx30的基因變異時，實驗組小鼠出現耳聾的癥狀。而在近20年里有大量的研究表明因編碼Cx40及Cx43的基因變異致使小鼠出現心律失常。另外，在骨科相關的研究中，Flenniken及 Dobrowolski等人的研究中確認Cx43的變異與多種退行性變相關。在神經內科研究方向，既往同樣有研究間隙連接蛋白的報道，其中Cx32的變異可致周圍神經病變。

間隙連接的基礎是間隙連接蛋白通道，它由六聚體蛋白-間隙連接蛋白組成。各項研究均證實Cx43在人卵丘細胞的間隙連接中扮演了重要角色，是卵泡能發育成熟的關鍵。卵丘卵母復合體中Cx43表達降低使得間隙連接通訊中斷，從而恢復減數分裂。其他間隙連接蛋白如Cx37、Cx40在采用基因芯片的新技術下檢測到存在，其在卵泡成熟的過程中在卵丘細胞上所扮演的角色仍有待進一步認知。大量研究表明，卵子發生與卵泡形成依賴于卵母細胞與卵泡液中細胞的相互影響。而部分研究發現卵丘細胞和顆粒細胞的轉錄組學中沒有發現已知的標記物能同時評估該兩種細胞。

由于卵泡處于無血管的微環境中，細胞間間隙連接對于卵泡成熟的重要性不言而喻。然而仍有許多表達在卵母細胞-顆粒細胞復合體上的未知連接蛋白也可能起到作用。未來需進一步深入研究間隙連接對卵巢卵泡發育的影響。

參考文獻：

[1]羅麗蘭.不孕與不育[M]. 2版. 北京：人民大學出版社， 2009：99-846.

[2]喬杰.人類輔助生殖技術的新進展[J].中國實用婦科及產科雜志.2008.1（24）：33-34.

[3]楊一華.李蓉.生殖醫學專業英語教程[M].人民衛生出版社，2018：12-13.

[4]法爾科恩.赫德.臨床生殖醫學與手術[M].北京大學醫學出版社. 2009，p550-557.