莪術油抑制hela細胞血管生成VEGF相關因子的研究

周俊

【摘要】目的：探討莪術揮發(fā)油對人宮頸癌Hela細胞的可能作用機制。方法：采用RT-PCR法，檢測在不同劑量組下VEGF-C和VEGFR-2的mRNA的表達。結果：RT-PCR結果顯示：莪術油高、中劑量組VEGF-CmRNA較陰性對照組顯著降低;莪術油高、中、低劑量組VEGFR-2mRNA較陰性對照組顯著增加。結論：莪術油能抑制宮頸癌hela的增殖，可能與其降低VEGF-C和VEGFR-2的mRNA的表達有關。

【關鍵詞】 莪術油;? hela細胞;?? 血管生成

【中圖分類號】R715【文獻標識碼】B【文章編號】2095-6851（2019）02-248-01

腫瘤微生態(tài)系統(tǒng)理論認為， 腫瘤細胞的生物學行為是腫瘤微生態(tài)系統(tǒng)重建其系統(tǒng)內營養(yǎng)聯(lián)系的結果， 而腫瘤的血管化是其重建營養(yǎng)聯(lián)系的一種表現。因此， 干擾腫瘤的血管化過程是抑制腫瘤的有效途徑。而開發(fā)血管生成抑制劑治療腫瘤已經成為當前抗腫瘤研究領域的一大熱點 。莪術油可誘導細胞凋亡、抑制腫瘤血管生成，促進機體對腫瘤的免疫反應等，可較好地直接干預或輔助治療惡性腫瘤 [1]。本課題通過體外培養(yǎng)人宮頸癌 Hela 細胞，初步探討莪術油有效提取物體外抗腫瘤血管生成的可能性機制。

1材料與方法

1.1實驗細胞株、動物及藥物：人宮頸癌Hela細胞株，購自武漢大學保藏中心。溫莪術藥材購于四川雙流縣溫郁金基地，經鑒定為姜科植物溫郁金的干燥根莖。采取壓榨粗油經水蒸汽精制法制備莪術揮發(fā)油。超純RNA提取試劑盒、HiFi-MMLV cDNA第一鏈合成試劑盒，購于CWbio.Co.Ltd。

1.2實驗方法

1.2.1Real Time PCR法檢測VEGF-C、VEGFR-2mRNA的表達將Hela細胞給予藥物干預，分組如下：陰性對照組、莪術油組：根據IC50的計算結果，設計出高、中、低劑量，繼續(xù)分別培養(yǎng) 72 小時。提取組織樣本中總RNA并進行反轉錄。采用2-△△CT法進行數據的相對定量分析，其中△△CT=（Ct目的基因-Ct內參基因）-（Ct陰性對照基因-Ct內參基因）。

1.3數據統(tǒng)計采用SPSS17.0軟件系統(tǒng)對相關數據資料進行分析，計量資料用表示，各組間兩兩比較采用獨立樣本T檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，P<0.05時認為有統(tǒng)計學意義。

3結果

3.1VEGF-C mRNA表達結果莪術油高、中劑量組 VEGF-C mRNA與陰性對照組比較顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義;莪術油低劑量組VEGF-C mRNA與陰性對照組比較略微下降，差異無統(tǒng)計學意義。（表1）。

3.2VEGFR-2 mRNA表達結果莪術油高、中、低劑量組VEGFR-2mRNA與陰性對照組比較顯著降低，且呈一定的計量依賴關系，差異有統(tǒng)計學意義。（表2）。

4討論

腫瘤血管生成、切斷腫瘤組織獲得營養(yǎng)途徑已經成為新的抗腫瘤治療靶點，而且也成為抗腫瘤治療中熱門的研究內容[2]。腫瘤新生血管與正常組織器官的血管相比，其血管少或無平滑肌成分，對神經調控、血管活性物質的反應明顯下降，血管組織內缺乏控制血管生成的調控機制等不足的表現[3]。宮頸癌組織中發(fā)現有VEGF-C 及其受體VEGFR-2（ KDR） 的表達。VEGF-C作用于腫瘤細胞上的VEGFR-2（ KDR），可能直接影響腫瘤細胞的生物學行為。宮頸癌復發(fā)者中VEGF/VEGFR-2途徑通過新生血管的形成增加腫瘤的轉移[4]。本次研究中，莪術油高、中劑量組 VEGF-C mRNA與陰性對照組比較顯著降低，同時，高、中、低劑量組VEGFR-2mRNA與陰性對照組比較顯著降低。兩者的結果呈正相關性，表明莪術油可能通過下調VEGF這條信號通路，達到抗腫瘤血管生成的目的。抗腫瘤血管生成藥物的優(yōu)勢在于針對新生血管，具有特異性， 其作用于運動的及增殖的毛細血管內皮細胞， 一般不造成骨髓抑制、胃腸道反應或脫發(fā)等副作用。因此對抗腫瘤血管生成藥物方向的研究具有重要的臨床意義。

參考文獻：

[1]宋愛莉，許振國.莪術油對大鼠乳腺癌癌前病變組織中VEGF mRNA 表達的影響[J].中華中醫(yī)藥學刊，2012，30（4）：679-681.

[2]陳錫強，侯海榮，劉可春等.天然產物抗血管生成的研究進展[J].山東科學，2010，23（6）：34-38.

[3]杜雪，糜若然.VEGF-C 對宮頸癌細胞增殖和凋亡信號傳導通路的影響[J].現代婦產科進展，2011，20（11）：877-855.

[4]趙淑萍，王澤華.宮頸癌中VEGF—C及其受體mRNA的表達及其臨床意義[J].中國癌癥雜志，2006，16（4）：290-294.