ARMS法檢測肺腺癌EGFR基因突變分析

吳海喬

（廈門大學附屬成功醫院病理科 福建 廈門 361001）

一直以來，尋找早期篩查肺癌的方法是學者目前的熱門研究問題。表皮生長因子（EGFR）是一種受體型酪氨酸激酶，在細胞的生長、生殖以及分化過程中發揮著重要的調節作用。經過諸多研究發現EGFR在多種腫瘤中會存在突變表達，對腫瘤的生長、侵襲以及轉移發揮調節作用。尤其是在肺腺癌中具有較高的突變率[2]。臨床實踐研究中，分析肺腺癌患者的EGFR基因突變對于患者的靶向治療療效具有全面性評價，評價EGFR基因突變檢測，對于選擇合適的患者進行靶向治療十分必要。本文則探討采用ARMS法檢測肺腺癌患者的EGFR基因突變并分析。

1.臨床資料

收集我院病理科的148例肺腺癌患者標本作為研究對象，包括82例肺活檢標本、24例手術切除標本以及42例胸腔積液細胞塊標本。所選患者中男性86例，女性62例，年齡在34-78歲之間，所選患者均未進行放化療及其他抗癌治療。

2.研究方法

2.1 標本采集與DNA提取

根據經驗切取不同類型的腫瘤標本，制作石蠟標本，采用廈門艾德公司的石蠟包埋組織樣品 DNA 提取試劑盒，進行DNA提取。調整DNA質量濃度至2ng/μl。

2.2 EGFR檢測

檢測EGFR基因突變，具體為19del，L858R以及T790M突變。

采用ARMS法檢測EGFR基因突變，儀器為ABI 7500熒光PCR儀，試劑盒購自廈門艾德生物公司的人類 EGFR 基因突變檢測試劑盒。具體實驗操作按照試劑盒說明書進行：取上述DNA標本23.5μl，加入1.5μlTaq酶，進行混勻后取出5μl加入8聯管。然后進行程序擴增，95℃ 5min，95℃ 25s，64℃ 20s，72℃ 20s，15個循環；93℃ 25s，60℃ 35s，72℃ 20s，31 個循環。60℃時收集熒光信號。

2.3 統計學分析

采用SPSS19.0統計學軟件進行數據分析，計數資料進行卡方檢驗，結果均以P＜0.05為差異有統計學意義。

3.結果

3.1 EGFR基因在肺腺癌標本中的突變

本文所選148例肺腺癌患者標本，共檢測出EGFR基因突變60例（40.5%）。具體基因突變類型，包括19del突變23例(15.5%)，L858R突變34例(23.0%)，19del和L858R雙突變2例(1.35%)。本文未檢測到T790M突變。

3.2 EGFR 基因突變與肺腺癌臨床病理特征的關系

根據是否存在EGFR基因突變，進行分組為EGFR基因突變陽性組和陰性組，比較不同臨床資料患者間的差異，結果提示在性別、吸煙史上，EGFR基因突變情況存在差異（P＜0.05）；在年齡及腫瘤家族史上，EGFR基因突變情況不存在差異（P＞0.05）。提示EGFR基因突變與患者的性別及吸煙是存在顯著關系。

表1 EGFR基因突變與肺腺癌患者相關因素分析 [n（%）]

4.討論

在NCCN指南推薦中，對于晚期肺腺癌患者的一線治療可根據是否存在EGFR等驅動基因事件進行指導，其中EGFR基因突變的類型不同，其靶向治療效果亦存在一定的差異。因此，臨床上準確檢測肺腺癌患者的EGFR基因突變，對于指導患者的個體化靶向治療具有重要意義。EGFR基因突變，與諸多因素有關，如患者因素、檢測方法以及標本因素等。

本文在總結既往諸多文獻基礎上，采用以熒光定量PCR技術為基礎的ARMS法，根據不同位點設計的特異性探針，特異性識別并擴增 EGFR 突變序列，盡量減少非腫瘤組織的干擾。通過ARMS檢測法，最大限度地縮短擴增產物的目標長度，避免DNA提取出現片段化。結合RT-PCR平臺在擴增時采用了一個閉管操作，簡單，不需要產物的后處理，較大避免了擴增產物的污染，使得結果更為準確。

本文研究結果提示所選148例肺腺癌患者標本，共檢測出EGFR基因突變60例（40.5%），檢出率較高，與宿杰·阿克蘇相關報道一致[1]。進一步研究EGFR基因突變的臨床資料，提示不同性別、吸煙史患者其EGFR基因突變發生率存在差異，女性、不吸煙患者EGFT突變率更高為53.2%、50.5%，提示吸煙會影響患者的EGFR基因突變。而腫瘤家族史以及患者年齡方面因素，不會影響患者的EGFR發生突變。因此，臨床上對于女性、不吸煙的肺腺癌患者建議進行 EGFR基因突變檢測，進一步指導臨床治療。