薄層色譜法（TLC）對益氣健脾口服液中太子參成分的快速鑒別

梁鳳蘭，馬德運(yùn)，李敏釵

（肇慶學(xué)院 a.生命科學(xué)學(xué)院；b.食品與制藥工程學(xué)院，廣東 肇慶 526061)）

近年來，通過對太子參活性成分的分析、鑒定以及臨床研究表明，太子參在抗氧化、增強(qiáng)抵抗力、抗衰老、降血糖、抗炎等方面有一定效果，目前廣泛應(yīng)用于食品、藥品、化妝品、保健品.益氣健脾口服液是由太子參、山藥、南山楂、桑葉等11味中草藥通過煎煮、濃縮、提純、靜置、過濾等步驟制作而成，具備健脾、和胃、增強(qiáng)自身抵抗力等功效，臨床可作為脾胃虛弱的輔佐治療，改善食欲不振、四肢乏力、盜汗、腹脹、腹痛、畏寒等癥狀[1-3].《中國藥典2015版（第一部）》對太子參藥材成分的鑒定方法[4]采用薄層色譜法，硅膠G薄層板，以甲醇為溶劑溶解，正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1）為展開劑，再以0.2%茚三酮乙醇溶液顯色，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上對照，顯相同顏色的斑點(diǎn)來判斷，該方法鑒定結(jié)果易受到其他藥材成分的干擾.為協(xié)助一品紅藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的益氣健脾口服液建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保益氣健脾口服液中太子參成分的含量，保證其藥效與作用[5]，基于薄層色譜法，嘗試建立一種具有高度特異性、簡單便捷且陰性溶液不會(huì)造成干擾的快速鑒別方法.

薄層色譜法是一種根據(jù)各種成分對同一種吸附劑吸附能力不同，使其在移動(dòng)相(溶劑)流過固定相(吸附劑)過程中，不斷重復(fù)產(chǎn)生吸附和解吸附，以完成各種成分互相分離和定性分析少量物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，在醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、生化、衛(wèi)生、環(huán)境、食品、化工等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用.

研究基于薄層色譜法，通過探討益氣健脾口服液中太子參成分的提取方法、展開劑選擇、顯色劑選擇、觀察方法選擇、薄層色譜板類型、溫度和濕度環(huán)境等，最終得出最優(yōu)方法，可快速鑒別益氣健脾口服液中太子參成分，且專屬性良好.為建立快速鑒定益氣健脾口服液中太子參成分的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，利于加強(qiáng)對該類口服液的質(zhì)量控制.

1 儀器與藥品

1.1 儀器

DF-101S集熱式恒溫磁力加熱攪拌器（常州市瑞華儀器制造有限公司），WFH-201B紫外透射反射儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公司），定量毛細(xì)管（1和2 μL），SP-Ⅲ型薄層條帶點(diǎn)樣器（上海科哲生化科技有限公司），微量進(jìn)樣器（25 μL，寧波市鎮(zhèn)海玻璃儀器廠），電子天平BSA223S（德國賽多利斯公司）.

1.2 樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

太子參標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所，批號：1004-200203），益氣健脾口服液（一品紅藥業(yè)股份有限公司，批號：160213、160422和160514）.

1.3 試劑和藥品

大孔吸附樹脂（D-101凈品型，天津浩聚樹脂科技有限公司）；氯仿、甲醇、正丁醇、冰醋酸、環(huán)己烷、丙酮、三氯甲烷、乙酸乙酯、濃硫酸等為分析純，廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)；二次蒸餾水.

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

填裝D-101型非極性大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑1.5 cm，柱高10 cm），使之均勻且沒有氣泡.取本品20 mL，緩緩地通過D-101型大孔吸附樹脂柱，調(diào)節(jié)流速，控制流速約為1滴/秒.通過后沿著壁緩緩倒入200 mL水進(jìn)行洗脫，棄去洗脫液，接著倒入100 mL乙醇溶液，收集乙醇洗脫液，置于水浴鍋上蒸干，吸取1 mL甲醇到所得殘?jiān)校怪芙猓米鞴┰嚻?

2.2 對照品溶液的制備

稱取約2 g太子參藥材，裝入圓底燒瓶中，量取20 mL水置于燒瓶中，蒸發(fā)回流2 h，放冷后過濾，得到濾液.將濾液緩慢導(dǎo)入D-101型大孔吸附樹脂柱，根據(jù)上述方法，得到對照品溶液.

2.3 陰性對照品溶液的制備

根據(jù)制備口服液的方法制備不含有太子參的口服液，以獲得太子參陰性溶液.抽取太子參陰性溶液20 mL，緩慢導(dǎo)入D-101型大孔吸附樹脂柱，按照上述方法操作，得到陰性對照品溶液.

2.4 薄層實(shí)驗(yàn)方法

提取方法采用水提取法、正丁醇萃取法、C18小柱吸附法和大孔吸附樹脂法，薄層板為手鋪硅膠G板和青島G板，溫度選擇10℃和25℃，濕度選擇32%和88%.

用微量進(jìn)樣器準(zhǔn)確取以上制備的3種溶液各20 μL，在同一塊已經(jīng)活化完成的硅膠G板上，分別點(diǎn)上以上3種溶液，配制甲苯-乙酸乙酯(4∶1)作為展開劑，置于展開缸中進(jìn)行展開，待展開完成后取出，放入通風(fēng)櫥干燥，然后均勻噴上5%香草醛硫酸溶液，置于105℃加熱，直到斑點(diǎn)顯色清晰后取出，在陽光下觀察.

2.5 展開劑和顯色劑的選擇

目前，通過皂苷類的分離提取，按照極性的配合，常用的幾種展開劑有氯仿-甲醇-氨試液（4∶4∶2)，正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1），環(huán)己烷-丙酮（10∶0.4），正丁醇-甲醇-水-冰醋酸（3∶1∶1∶1），三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）收集10 ℃以下放置的下層溶液，甲苯-乙酸乙酯(4∶1)等.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明以甲苯-乙酸乙酯(4∶1)的展開效果為佳，特征斑點(diǎn)清晰，出現(xiàn)了2個(gè)分離度較好的斑點(diǎn)，并且沒有拖尾現(xiàn)象.

顯色劑主要對比了2種，分別是10%硫酸乙醇溶液和5%香草醛硫酸溶液.根據(jù)得到的結(jié)果對比，5%香草醛硫酸溶液能夠得到更加清晰可見的斑點(diǎn)，因此選取5%香草醛硫酸溶液作為此次試驗(yàn)的顯色劑.

上述方法應(yīng)用于平行測試3批次口服液樣品.

2.6 薄層鑒別方法的建立

2.6.1 提取方法的選擇

基于文獻(xiàn)檢索，提取太子參皂苷類成分的方法較多，如水浸提法、超聲提取法、酸解法、水提醇沉法、正丁醇萃取法、C18小柱吸附法、大孔吸附樹脂法等[6-11].益氣健脾口服液為中成藥，成份復(fù)雜，提取皂苷類成分時(shí)會(huì)受到許多干擾，故如何避免其他藥物成分的干擾是關(guān)鍵.起初采用水浸提法，超聲提取法，經(jīng)過展開、顯色后，得到許多雜亂的成分，并且陰性對照品造成干擾（圖1a）；后用正丁醇進(jìn)行多次萃取，得到的斑點(diǎn)清楚可見，而且分離度好，但是仍然存在著陰性對照品的干擾（圖1b）；于是嘗試采用C18小柱進(jìn)行吸附，再用甲醇和水進(jìn)行洗脫，展開顯色后雜質(zhì)得到較大減少，而且成分分離度好，但是陰性對照品仍然存在干擾（圖1c）；最后采用D-101型大孔吸附樹脂進(jìn)行除雜，再用水進(jìn)行洗脫，然后收集乙醇的洗脫液，通過揮干后用甲醇溶解得到樣品，通過展開和顯色后，獲得的點(diǎn)清晰，并且其他成分不會(huì)造成干擾（圖1d）.

圖1 不同提取方法對比

2.6.2 不同薄層板對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

根據(jù)上述“2.4”項(xiàng)下的測定方法，分別對人工硅膠G板和市售青島G板進(jìn)行了測試，結(jié)果如圖2所示，兩種G板得到的結(jié)果沒有太大差別.

圖2 不同薄層板情況對比

2.6.3 不同溫度對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

取2塊青島產(chǎn)預(yù)制薄層板，分別在10℃和25℃展開，顯色，檢視.如圖3所示，在10～25℃范圍內(nèi)試驗(yàn)，對鑒別無明顯影響.

圖3 不同溫度情況對比

2.6.4 不同濕度對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

用硫酸調(diào)節(jié)濕度為32%和88%的2個(gè)環(huán)境，（濕度為32%的調(diào)節(jié)方法，配制一定濃度的硫酸，倒入雙側(cè)展開缸的一側(cè)，進(jìn)行預(yù)飽和.而另一側(cè)則倒入配制好的展開劑)，分別把2塊點(diǎn)板完成的板放入展開缸中進(jìn)行展開.如圖4所示，改變相對濕度環(huán)境對結(jié)果無影響.

圖4 不同相對濕度情況對比

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法，通過探討益氣健脾口服液中太子參成分的不同提取方法、展開劑的選擇、顯色劑的選擇、觀察方法的選擇、不同類型薄層色譜板、工作環(huán)境的溫度和濕度對結(jié)果的影響，最終確定以大孔吸附樹脂法提取太子參成分，甲苯-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑，5%香草醛硫酸溶液為顯色劑的最優(yōu)鑒定方法.本法操作簡單，具有快速，分離效果和重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)，可用于益氣健脾口服液中太子參(Radix Pseudostellariae)成分的快速定性鑒別，可為加強(qiáng)對益氣健脾口服液的質(zhì)量控制及市場監(jiān)管提供有效手段.