外周血microRNA-146a水平與冠狀動脈病變嚴重程度的相關性

朱秀蘭　于長青　閆慶凱　謝鳳

【摘要】目的探究冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者外周血微小核糖核酸-146a（microRNA-146a）表達水平與其冠狀動脈病變嚴重程度的相關性。方法將120例住院治療的冠心病患者作為觀察組，按病情嚴重程度分為輕度組（Gensini評分<25，n=48）和中重度組（Gensini評分>25，n=72），另選取同期門診體檢的60例健康人作為對照組。測定所有研究對象血漿microRNA-146a表達水平，以及促炎介質腫瘤壞死因子-a（tumornecrosisfactor-a，TNF-a）和干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ），抗炎因子白介素-10（interleukin-10，IL-10）的表達水平。分析血漿microRNA-146a表達水平與患者病情的相關性。結果觀察組血漿microRNA-146a表達水平明顯高于對照組，且中重度組microRNA-146a表達水平明顯高于輕度組，差異均具有統計學意義（均P<0.05）;血漿microRNA-146a表達水平與TNF-a、IFN-γ和Gensini評分呈正相關（r=0.56～0.71，P<0.01），與IL-10呈負相關（r=-0.49，P=0.02）。結論冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者外周血microRNA-146a表達水平與其冠狀動脈病變嚴重程度有較好的相關性，值得在臨床推廣應用。

【關鍵詞】微小核糖核酸-146a;冠狀動脈粥樣硬化性心臟病;Gensini評分

中圖分類號：R54

文獻標識碼：A

文章編號：1009-816X（2019）06-0504-03

doi：10.3969/j.issn.1009-816x.2019.06.005

The Correlation Study between Plasma MicroRNA-146a Level and the Severity of Coronary Artery Lesion. ZHU Xiu-lan ， YU Chang-qing， YAN Qing-kai， et al. Department of Cardiovascular Medicine， People ' s Hospital of Bishan District ， Chongqing 401320， China

[Abstract] Objective To explore the corelation between plasma micoRNA-146a level and severity of coronay artery lesion . Meth ods 120 cases of hospitalized patients with coronary heart disease were obtained as observation group . According to the severity of le sion ， the patients were divided into mild group （ Gensini score < 25 ， n = 48 ） and moderate-severe group （ Gensini score > 25 ， n = 72 ） 60 cases of healthy people taking a physical examination were seleted as onol oup . Determination of plasma microRNA-146a lev el ， tumor necrosis factor-a （ TNF-a ） interferon-（ IFN-y ） and anti-in ammatory factor interleukin-10 （ IL-10 ） expression levels were executed . Analyzed thecorrelation between plasma microRNA-14a evel and severityof oronaryar erylesion . Results The plasma mi croRNA-146a of observation group was higher than control roup ， the plasma microRNA-146a of moderate-severe group was higher han mild group ， the differences were statistically significant （ all P < 0 . 05 ） ; The plasma microRNA-146a expression level was posi tively correlated with TNF-a ， IFN-y and Gensini score （ r = 0 . 56-0 . 71 ， P < 0 . 01 ） ， was negatively correlated with IL-10 （ r = 0 49 ， P = 0 . 49 ） . Conclusions The plasma microRNA-146a expression level of coronary heart disease patients has good correlation with severity of coronary artery lesion ， is worth popularizing in clinical application/

[Key words ] MicroRNA-146a ; Coronary heart disease ; Gensini score

動脈粥樣硬化在本質上屬于一種慢性炎癥性疾病，是導致心血管疾病的發病率和死亡二率大幅度升高的主要原因[1]，動脈粥樣硬化的病理過程包括內皮功能障礙、白細胞的浸潤、脂蛋白沉積和泡沫細胞的出現。白細胞的積累，細胞因子和生長因子的分泌，氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）的細胞毒性效應進一步加速炎癥，導致動脈粥樣硬化患者病情進展及預后不良[2]。在不同細胞類型中表達的外周血微小核糖核酸（microRNA參與了血管系統的炎癥反應已經被廣泛的報道[3，4]。本文通過檢測120例冠心病患者Gensini評分、血漿microRNA-146a表達水平以及炎癥介質水平，來探討microRNA-146a水平與冠狀動脈病變嚴重程度的相關性。報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料：選取2017年1月至2019年1月在我院心內科就診的120例冠心病患者作為觀察組，冠心病的診斷參照《中國心血管病預防指南（2017）》[5]中的標準。排除標準：合并嚴重心瓣膜病、急性肺栓塞、心肌炎，或有嚴重的免疫性疾病、感染性疾病，于半年內服用過免疫抑制劑或近一周服用過糖皮質激素及抗生素的患者。按病情嚴重程度分為輕度組（Gensini評分≤25，n=48）和中重度組（Gensini評分>25，n=72）。另選取同期門診體檢的60例健康人作為對照組。觀察組與對照組在性別、年齡、心率、BMI及糖尿.病史等方面比較差異無統計學意義（P>0.05），見表1。所有受試者均簽署知情同意書，本研究獲得醫院倫理委員會批準。

1.2方法：

1.2.1冠心病病情評估：采用Gensini評分[6]對冠心病患者進行病情嚴重程度評估。根據冠狀動脈造影（CAG）顯示的冠狀動脈狹窄面積，無狹窄計0分，25%以下計1分，介于26%～50%之間計2分，介于51%～75%之間計4分，介于76%～90%之間計8分，介于91%～99%之間計16分，完全閉塞計32分。根據病變支所在部位乘以相應的系數，左冠狀動脈主干計系數5，左前降支和左回旋支近端計系數2.5，中段計系數1.5，遠端計系數1，右冠狀動脈計系數1，第一、第二對角支計系數1，其他血管計系數0.5。Gensini評分等于各冠狀動脈分支狹窄面積計分*系數的總和。

1.2.2血漿microRNA-146a表達水平及炎癥因子測定：患者于清晨抽取空腹狀態下肘部靜脈血5mL ，離心吸取上清。加入1mL trizol溶液（美國invitrogen公司后按步驟提取總microRNA，然后加入microRNA-146.上下游引物逆轉錄成雙鏈cDNA，進行聚合酶鏈反應，讀取Ct值。采用酶聯免疫反應試劑盒（美國abcam公司）按步驟說明書檢測患者血漿TNF-a，IFN-γ和IL-10的含量，在450nm處測得吸光度值并計算相應濃度。

1.3統計學處理：數據均采用SPSS24.0版進行分析，計量資料采用（x±s）來表示，兩組間比較采用t檢驗，三組數據比較采用one-wayANOVA分析，其中組間兩兩分析采用student一t檢驗，計數資料采用率（%）的形式來表示，組間比較采用卡方檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1三組血漿microRNA-146a、炎癥因子水平和Gensini評分比較：輕度組和中重度亞組的血漿mi-CroRNA-146a表達水平、血漿TNF-a、IFN-y表達水平和Gensini評分明顯高于對照組，血漿IL-10表達水平明顯低于對照組，差異有統計學意義（P<0.01）。中重度組的血漿microRNA-146a表達水平、血漿TNF-a、IFN_γ表達水平和Gensini評分明顯高于輕度組，血漿.IL-10表達水平明顯低于病情輕度患者，差異有統計學意義（P<0.01），見表2。

2.2血漿microRNA-146a表達水平與病情相關性分析：血漿microRNA-146a表達水平與TNF-a（r=0.56，P=0.01）、IFN-γ（r=0.64，P<0.05）、Gensini評分（r=0.71，P<0.01）呈正相關，與IL-10呈負相關（r=-0.49，P<0.05）。

3討論

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病是導致我國人口死亡的主要原因之一，其重要的病理生理基礎是動脈粥.樣硬化。動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，包括內皮完整性的破壞、平滑肌的異常增殖和遷移、炎癥介質的釋放和脂質的內膜下沉積等[7]。microRNA通過靶向結合相應的基因位點，抑制靶基因的轉錄，從而實現對各生理病理過程的調控[8]。在不同細胞類型中表達的microRNA參與了血管系統的炎癥反應已經被廣泛的報道。細胞實驗證明microRNA-146a可以通過直接作用于靶基因TLR-4，增加促炎因子IL-6局部分泌量，對ox-LDL誘導的氧化應激有促進作用[9]。另外，microRNA-146a還可以通過作用于腫瘤壞死因子受體相關因子6（tumornecrosisfactorreceptor-associ-atedfactor-6，TRAF6）發揮促炎作用[10]。給予小鼠敲除microRNA-146a，可以促進Treg細胞對效應性T細胞的抑制功能[11]。這些研究都提示microRNA-146a與動脈粥樣硬化的發生發展密切相關。本文研究結果顯示，血漿microRNA-146a表達水平隨冠心病病情發展而逐漸升高，抑制患者microRNA-146a表達水平可能成為臨床新的治療靶點。

TNF-a和IFN-γ是常見的一類促炎因子，在免疫炎癥反應中起重要的介導作用，已有基礎研究證明TNF-a和IFN-γ在動脈粥樣硬化動物模型的外周血和局部病變血管組織中大量表達，兩者可以一方面可以促進自身表達增加，另一方面還能增加其他炎癥因子和黏附分子等表達水平，導致內皮細胞功能障礙，血管平滑肌異常增生，血管張力異常，從而促進動脈粥樣硬化斑塊的形成[12～14]。IL-10是一種常見的免疫抑制因子，已有研究證明IL-10可以抑制巨噬細胞等的激活，發揮抗炎穩定斑塊的作用[15]。臨床研究顯示，冠心病患者血漿中炎癥因子的表達水平和患者的預后密切相關[16]，[17]。本文研究結果顯示，血漿microRNA-146a表達水平不僅可以反映冠心病患者的病情嚴重程度，可能與患者預后也有一定關系，需要進一步長期隨訪驗證。

綜上，冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者外周血microRNA-146a表達水平與其冠狀動脈病變嚴重程度有較好的相關性，值得在臨床推廣應用。

參考文獻

【1】孔博，程詩堯，費洪文.冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者動脈粥樣硬化性狹窄的臨床特點分析【J】.嶺南心血管病雜志，2018，24（6）：617-620.

【2】徐莉，王勇，馬麗.冠心病患者外周血炎癥標志物與冠狀動脈狹窄程度的關系【J】.臨床內科雜志，2017，34（9）：634-635.

【3】Raitoharju E，Oksala N，Lehtimaki T.MicroRNAs in the atheroscleroticplaque【J】.Clin Chem，2013，59（12）：1708-1721.

【4】Bai X，Zhang J，Cao M，et al.MicroRNA-146a protects against LPS-induced organ damage by inhibiting Notch1 in macrophage【J】.Int Im-munopharmacol ，2018，63（4）：220-226.

【5】中華心血管病雜志編輯委員會.中國心血管病預防指南（2017）【J】.中華心血管病雜志，2018，46（1）：10-25.

【6】中華醫學會心血管病學會介入心臟學學組.中國經皮冠狀動脈介入治療指南（2016）【J】.中華心血管病雜志，2016，44（5）：382-400.

【7】鐘巧青，朱凌燕，張國剛，等.動脈粥樣硬化性心血管疾病合并糖尿病患者發病機制與臨床特點及治療對策【J】.中國心血管病研究，2018，16（12）：1069-1072.

【8】陳笑梅，牟雅琳，呂鵬，等.miRNAs調控動脈粥樣硬化相關細胞功能研究進展【J】.廈門大學學報（自然科學版），2018，57（5）：593-601

【9】林新，徐禮裕，李小華，等.微RNA-146a對機械通氣大鼠肺損傷TLR4炎癥信號通路的影響及機制【J】.中華醫學雜志，2018，98（34）：2749-2753.

【10】楊開雯，強鄭，靳貝芳，等.MicroRNA-146在糖尿病心肌病中的調控作用【J】.中國病理生理雜志，2018，34（11）：1947-1952.

【11】Huang W，Tian ss，Hang PZ，et al.Combination of microRNA-21 andmicroRNA-146a attenuates cardiac dysfunction and apoptosis during acutemyocardial infarction in mice【J】.Mol Ther Nucleic Acids，2016，5（12）：e296.

【12】JMehta NN，Teague H，Swindell WR，et al.IFN-gamma and TNF-alphasynergism may provide a link between psoriasis and inflammatory atherogen-esis【J】.Sci Rep，2017，7（1）：13831.

【13】Tavakoli S，Downs K，Short JD，et al.Characterization of macrophagepolarization states using combined measurement of 2-Deoxyglucose and glu-tamine accumulation：implications for imaging of atherosclerosis【J】.Arte-rioscler Thromb Vasc Biol，2017，37（10）：1840-1848.

【14】Dinh QN，Chrissobolis S，Diep H，et al.Advanced atherosclerosis is as-sociated with inflammation，vascular dysfunction and oxidative stress，butnot hypertension【J】.Pharmacol Res，2017，116（2）：70-76.

【15】楊天睿，苗云波.血液化驗與老年動脈粥樣硬化斑塊穩定性的相關性【J】.中國老年學雜志，2019，39（1）：27-29.

【16】胡文，匡雪.吡格列酮改善非糖尿病冠心病患者臨床預后的研究進展【J】.心血管病學進展，2018，39（3）：375-378.

【17】沈正軍.冠心病合并高脂血癥患者血脂水平與主要炎癥因子的相關性【J】.心血管康復醫學雜志，2017，26（4）：388-390.

（收稿日期：2019-4-25）