鳥苷酸結合蛋白5基因在老年肺結核患者外周血單個核細胞中的表達

曹楊榮 郭陽

(金華廣福腫瘤醫院，浙江 金華 321000)

在世界范圍內，每年有大量人群感染結核病，結核病成為具有挑戰性的健康問題之一。老年人免疫功能衰退，肺結核的發病率在老年人群中呈逐漸升高趨勢；老年人作為一個特殊群體，成為社會上結核病的重要感染源〔1〕。老年肺結核的臨床癥狀及影像學表現不典型，并且老年患者多合并其他呼吸系統疾病，因此老年肺結核的早期診斷比較困難，尤其當存在機體免疫缺陷時，誤診率比較高，且老年肺結核患者對抗結核藥物的敏感性較年輕人差〔2,3〕。因此尋找用于老年肺結核診斷和評價藥物治療效果的生物學標記物具有重要意義。鳥苷酸結合蛋白(GBP)5為鳥苷三磷酸酶家族成員，由γ-干擾素誘導，在炎性反應和宿主防御中發揮重要作用〔4〕。本文對GBP5在老年肺結核患者外周血單個核細胞中的表達及臨床意義進行研究。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇浙江金華廣福腫瘤醫院2015年1月至2016年12月老年初治肺結核患者80例作為肺結核組，健康體檢者80例作為對照組。肺結核組年齡(76.25±15.63)歲，男57例，女23例；對照組年齡(75.57±14.73)歲，男53例，女27例。對照組和肺結核組年齡和性別比較差異無統計學意義(P>0.05)。納入標準：肺結核組均為初治患者，均進行正規抗結核治療；對照組均身體健康；兩組均簽署知情同意書。排除標準：血液病者、其他呼吸系統疾病者、近期手術史者、急性和慢性感染性疾病者、免疫系統疾病者、近期服用抗菌藥物者、近期不用免疫制劑者、資料不全者。

1.2肺結核治療 肺結核組均給予標準化抗結核方案(2HRZE/4HR)治療。6個月后觀察各指標。

1.3外周血單個核細胞中GBP5表達量測定 采集肺結核患者抗結核治療前后及對照組體檢當天外周靜脈血5 ml，加入等體積淋巴細胞分離液，離心(2 000 r/min)25 min，吸出乳白色混濁帶，加入磷酸鹽緩沖液洗滌，離心(2 000 r/min)10 min，棄去上清液，沉淀中加入紅細胞裂解液，吹打均勻后離心(2 000 r/min)5 min，棄去上清液得到外周血單個核細胞。提取的單個核細胞中加入Trizol裂解液裂解外周血單個核細胞，提取總RNA，測定RNA純度和濃度。采用反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)測定外周血單個核細胞中GBP5表達量，GBP5上游引物：5′-CCACTCACCCTTGTTCTTCC-3′，下游引物：5′-GCTTTGGAGATCCTGTCTGC-3′。PCR反應條件：95℃ 30 s，95℃ 5 s，56℃ 30 s，共42個循環，外周血單個核細胞中GBP5表達量以2-ΔΔCt表示。RT-PCR儀器及試劑盒購自美國賽默飛世爾科技公司。

1.4血清腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-6水平測定 采集肺結核患者抗結核治療前及對照組體檢當天外周靜脈血4 ml，離心(3 000 r/min)10 min，取血清，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定血清TNF-α、IL-6水平。ELISA試劑盒購自深圳欣博盛科技公司。

1.5統計學方法 采用SPSS20.0軟件進行t檢驗，GBP5對老年肺結核的診斷價值采用受試者工作特征(ROC)曲線分析，GBP5與血清TNF-α、IL-6水平的相關性采用Pearson相關分析。

2 結 果

2.1兩組外周血單個核細胞中GBP5表達量比較 肺結核組外周血單個核細胞中GBP5表達量(1.47±0.18)顯著高于對照組(1.00±0.03，t=23.037,P=0.000)。

2.2兩組血清TNF-α、IL-6水平比較 肺結核組血清TNF-α、IL-6水平顯著高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組血清TNF-α、IL-6水平比較

2.3外周血單個核細胞中GBP5表達量對老年肺結核的診斷價值 外周血單個核細胞中GBP5表達量診斷老年肺結核的ROC曲線下面積(AUC)為0.886(95%CI：0.778～0.964，P=0.000)，靈敏性為67.83%，特異性為92.75%。

2.4老年肺結核患者外周血單個核細胞中GBP5表達量與血清TNF-α、IL-6水平的相關性 老年肺結核患者外周血單個核細胞中GBP5表達量與血清TNF-α、IL-6水平均呈正相關(r=0.562,P=0.000;r=0.587,P=0.000)。

2.5老年肺結核患者治療前后外周血單個核細胞中GBP5表達量比較 老年肺結核患者治療后外周血單個核細胞中GBP5表達量(1.13±0.16)顯著低于治療前(1.47±0.18，t=27.646，P=0.000)。

3 討 論

隨著我國對結核病防控力度的加強，近年來我國結核病的疫情呈下降趨勢，但由于我國人口基數比較大，目前結核病形勢不太樂觀。隨著人口的不斷老齡化，由于老年人群的抵抗力比較差，使老年肺結核的發病率仍處于較高水平，且農村人口中肺結核的發病率明顯高于城鎮人口，無癥狀肺結核患者的比例增加，因此我國的結核病防治工作尚需要進一步加強。機體感染結核分枝桿菌后是否發病與宿主的免疫力關系密切，宿主免疫力低下及免疫缺陷者容易結核病〔5〕。大部分人群感染結核分枝桿菌后沒有典型的發熱、咳嗽、咯痰、乏力、盜汗等臨床表現，結核分枝桿菌在機體內潛伏，痰液中檢測不到結核分枝桿菌，沒有相應的影像學改變，沒有傳染性，為潛伏結核感染〔6,7〕。從潛伏結核感染發展到結核病需要一段時間，有些快有些慢，有些患者可終身不發病〔8〕。結核病的常見篩查方法有結核菌素實驗和γ-干擾素釋放實驗兩種，這兩種篩查方法應用比較廣泛，在結核病的診斷方面各有優點。結核菌素實驗操作方便、價格低廉，是結核病的主要篩查手段，但結核菌素實驗陽性只能說明患者感染結核分枝桿菌，接種過卡介苗的患者也呈陽性，不一定診斷結核病〔9〕。γ-干擾素釋放實驗陽性表示機體感染結核分枝桿菌，其特異性和靈敏性均高于結核菌素實驗，但γ-干擾素釋放實驗在活動性結核病診斷中的價值有限〔10〕。隨著醫學水平的不斷進步，基因研究不斷深入，γ-干擾素基因、IL-10等多種基因和結核病的發病有關。GBP5基因屬于γ-干擾素誘導基因，位于1p22.2，在炎癥反應和宿主防御中具有重要作用〔11,12〕，如Shenoy等〔13〕研究發現GBP5可促進哺乳動物NLRP3炎性體組裝和免疫；Meunier等〔14〕研究發現GBP5可以在感染新弗朗西斯菌期間促進AIM2炎性體的活化及IL-1β和IL-18等炎性細胞因子的釋放。本研究結果表明外周血單個核細胞中GBP5的表達量在老年肺結核的診斷和療效評價中具有重要意義，并且和老年肺結核患者血清炎性細胞因子水平關系密切。TNF-α和IL-6是常用的感染性疾病診斷、隨訪的常用指標，在肺結核患者中，TNF-α和IL-6可用于反映結核分枝桿菌所造成的組織損傷和炎癥反應情況〔15,16〕。GBP5與血清TNF-α、IL-6水平呈正相關，表明GBP5也可用于反映肺結核的炎癥嚴重程度。