邯鄲地區(qū)10 306例婦科門診女性患者HPV基因分型及感染特征分析

王 蕾，董志玲，張利賓，王志剛，石紅燕

(邯鄲市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 邯鄲 056000)

人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)屬乳頭瘤病毒科，是一種雙鏈小DNA病毒，有病毒蛋白外殼和核心DNA物質(zhì)構(gòu)成[1]，具有嗜黏膜和皮膚上皮性，廣泛分布于人和動物的上皮細(xì)胞，具有高度特異性，易引發(fā)感染部位的良惡性病變。宮頸癌是目前嚴(yán)重威脅女性生命健康的惡性腫瘤之一，而我國又是宮頸癌高發(fā)國家之一，每年新增病例超過13萬人次，從高危型HPV的持續(xù)感染到一般的宮頸癌前病變并最終發(fā)展為宮頸癌大約需要15年[2]。歐洲生殖器官感染和腫瘤研究組織提出HPV分型檢測臨床應(yīng)用的重要性，并以提出高危型HPV檢測作為宮頸癌篩查的初篩手段，目前已發(fā)現(xiàn)的HPV亞型有200余種，其中約40種可感染生殖道，根據(jù)其致病力大小分為高危型和低危型；每一型又包含多種HPV亞型，其中高危型HPV(HPV16、18、58、56等)主要引起外生殖器癌、宮頸癌及高度外陰、宮頸上皮內(nèi)瘤變及其他部位惡性病變等；低危型HPV(HPV6、11、42等)主要誘發(fā)外生殖器和皮膚尖銳濕疣以及低度外陰、宮頸上皮內(nèi)瘤及其他部位的疣類病變和低度上皮內(nèi)瘤等，且其感染具有地域、民族和年齡差異[3]。本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)體外擴(kuò)增技術(shù)及DNA反向點(diǎn)雜交相結(jié)合的HPV基因分型技術(shù)對10 306例婦科門診女性患者HPV不同基因型的檢測結(jié)果進(jìn)行分析研究，為邯鄲地區(qū)女性宮頸癌的防治提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2016年3月至2017年11月在邯鄲市中心醫(yī)院婦科門診就診以及進(jìn)行健康體檢的10 306例女性患者為研究對象，進(jìn)行HPV基因分型檢測，年齡15～85歲,平均(40±10)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①無子宮切除手術(shù)史或?qū)m頸手術(shù)，采樣前72 h避免進(jìn)行陰道沖洗和使用藥物治療。②有性生活史，并愿意在采樣前24 h內(nèi)避免性接觸。排除標(biāo)準(zhǔn)：接受過疫苗接種、妊娠期、哺乳期。

1.2方法

1.2.1樣本采集 采樣在非月經(jīng)期，采樣前48 h無性行為，無陰道內(nèi)用藥。以專用宮頸脫落細(xì)胞采集器采集，醫(yī)護(hù)人員以窺陰器或陰道張開器暴露宮頸，用拭子將宮頸口過多的分泌物擦拭去。取出宮頸刷置于宮頸口，繞一個方向旋轉(zhuǎn)4～5周以獲得足量的上皮細(xì)胞樣本，再將宮頸刷頭部放入洗脫管中，沿刷柄折痕處將宮頸刷柄折斷，并旋緊洗脫管蓋，保持洗脫管直立放置。標(biāo)本室溫保存不超過12 h，4 ℃保存不超過7 d。

1.2.2檢測方法 采用PCR體外擴(kuò)增技術(shù)和DNA反向點(diǎn)雜交相結(jié)合的HPV基因分型檢測技術(shù)。試劑盒由深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供，采用羅氏480PCR儀進(jìn)行HPV基因分型檢測。檢測分為HPV DNA的提取、PCR擴(kuò)增、雜交、洗膜、顯色幾個步驟，嚴(yán)格按照操作規(guī)程完成。共檢測23種HPV基因型，包括17種高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82)，6種低危型(HPV6、11、42、43、81、83)。結(jié)果判斷：根據(jù)膜條上藍(lán)色斑點(diǎn)的位置，讀取相應(yīng)位置上標(biāo)注的各個基因型信息；如果僅一個基因型位點(diǎn)出現(xiàn)藍(lán)色斑點(diǎn)，則可判斷為相應(yīng)基因型的單一感染；若多個基因型位點(diǎn)出現(xiàn)了藍(lán)色斑點(diǎn)，則可判斷為相應(yīng)基因型的混合感染。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以例(%)表示，各組比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1HPV感染率以及HPV基因亞型感染分布情況 10 306例女性患者中，共檢出HPV陽性3 737例，感染例次為4 774例次，檢出亞型23種，感染陽性率為36.26%。其中檢出HPV高危3 674例次，占總感染例次的76.95%，感染的基因亞型前3位分別為HPV16、HPV52和HPV51，陽性構(gòu)成比依次為12.97%、10.45%和7.12%，17種高危型均被檢出；檢出HPV低危1 100例次，占總感染例次的23.05%，感染的基因亞型前3位分別為HPV42、HPV81、HPV6，陽性構(gòu)成比依次為5.30%、5.07%和4.80%，6種低危型也均被檢出。見表1。

2.2HPV感染情況的年齡分布情況 10 306例女性患者中26～35歲和36～45歲兩個年齡段進(jìn)行HPV篩查的人數(shù)較為集中，各年齡段HPV感染率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=603.500，P<0.001),見表2。

2.3單一與多重HPV感染分布規(guī)律 3 737例HPV感染陽性病例中，單一感染2 703例，占HPV陽性病例的72.33%；二重感染556例，占HPV陽性病例的14.87%；三重感染300例，占HPV陽性病例的8.03%；四重感染92例，占HPV陽性病例的2.46%；五重感染44例，占HPV陽性病例的1.18%；五重以上感染42例，占HPV陽性病例的1.12%。

2.4各年齡段HPV感染類型分布規(guī)律 各年齡段HPV單一感染率以46～55歲年齡段最高，多重感染率以15～25年齡段最高。見表3。

3 討 論

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，在我國女性患者中發(fā)病率僅次于乳腺癌，在發(fā)達(dá)國家女性惡性腫瘤中占第7位，在發(fā)展中國家發(fā)病率居女性惡性腫瘤第2位，在我國每年宮頸癌的新發(fā)現(xiàn)病例為50萬左右，并有近27.4萬的患者死于該病[4]。宮頸癌及其癌前病變被認(rèn)為是一個多因素、多步驟的疾病，生物學(xué)因素在宮頸癌發(fā)病中的作用在近年來的研究中備受重視，HPV感染已被公認(rèn)為宮頸癌發(fā)病的確切病因。2017版HPV感染疾病相關(guān)問題專家共識[5]中提到，推薦HPV-DNA檢查作為宮頸癌篩查的主要檢查手段，尤其對于已婚女性人群結(jié)合宮頸細(xì)胞學(xué)檢查可以提高宮頸癌變的診斷效果并降低漏診率。《中國癌癥篩查及早診早治指南(試行)》[6]對于宮頸癌的篩查，根據(jù)不同地區(qū)以及經(jīng)濟(jì)水平高低推薦不同篩查方案：①最佳首選篩查方案，宮頸取材HPV-DNA檢測結(jié)合宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查，適用于我國目前經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)及或經(jīng)濟(jì)條件比較好的家庭婦女宮頸癌篩查；②一般篩查方案，宮頸取材HPV-DNA檢測和傳統(tǒng)巴氏涂片相組合，適用于目前經(jīng)濟(jì)中等發(fā)達(dá)地區(qū)；③僅用醋酸染色后肉眼觀察/聯(lián)合復(fù)方碘染色后肉眼觀察篩查，適用于經(jīng)濟(jì)不發(fā)達(dá)、貧窮落后以及衛(wèi)生資源較缺乏地區(qū)[7]。目前來我院體檢的人群大多采用方案①進(jìn)行篩查，方案①中兩者結(jié)合應(yīng)用可以同時了解患者病變的程度并明確HPV感染亞型，以一步提高確診率并預(yù)判病情。HPV感染疾病的研究正逐步從婦產(chǎn)科走向多學(xué)科[8]，因此隨著HPV篩查的普及，了解其感染的地域、民族及年齡組之間的差別，以及HPV亞型感染的分布規(guī)律，對于宮頸癌的篩查與預(yù)防以及由HPV感染引起的其他相關(guān)疾病的研究起重要作用。

表1 HPV基因亞型感染分布

HPV：人乳頭瘤病毒

表2 HPV感染陽性率與年齡分布的關(guān)系

HPV：人乳頭瘤病毒

表3 各年齡段HPV感染亞型分布規(guī)律

HPV：人乳頭瘤病毒

本研究結(jié)果顯示，邯鄲地區(qū)HPV感染陽性率為36.26%，同其他報道有所差異，如重慶地區(qū)為30.8%[9]，四川東北地區(qū)為49.12%[10]，茂名地區(qū)為26%[11]，南京地區(qū)為10.79%[12]，深圳地區(qū)為20.76%[12]，長沙地區(qū)為14.8%[1]，北京地區(qū)為23.96%[13]，新疆地區(qū)維吾爾族婦女為20.2%[14]；如上所示，HPV感染率存在地域差異，另外與研究群體是否為門診患者或體檢患者有關(guān)，四川東北地區(qū)的高感染率可能與其研究群體為泌尿系感染患者有關(guān)。有報道顯示，中國女性HPV感染率為15.71%[15]，宮頸病變患者感染率為82.43%，感染率和高危型分布均存在顯著地區(qū)差異，北方地區(qū)感染率高于南方地區(qū)[9]。地區(qū)性感染差異有可能源于北方氣候溫度差異較大，造成女性易患疾病引起抵抗力降低，同時也不能排除飲食習(xí)慣及遺傳差異因素。本研究中，高危HPV感染的基因亞型前3位分別為HPV16、HPV52和HPV51，陽性構(gòu)成比依次為12.97%、10.45%和7.12%。也有研究表明[11]，高位HPV感染的基因型前3位為HPV16、HPV58和HPV33，而鮑彥平[16]報道中提到HPV16、58、52亞型在亞洲(尤其是中國高發(fā)地區(qū))人群中具有重要意義。

邯鄲地區(qū)HPV感染年齡段根據(jù)本研究顯示以36～45歲年齡段感染率最高，感染率為53.33%；其次為26～35年齡段，感染率為27.62%，有關(guān)HPV感染與年齡段相關(guān)性研究結(jié)果國內(nèi)外文獻(xiàn)報道存在差異，李晨等[4]調(diào)查福建醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院5 869例女性患者，發(fā)現(xiàn)≤25年齡組感染率最高，感染率為32.5%；鄧健康和郭曉蘭[10]對四川東北地區(qū)的女性患者篩查發(fā)現(xiàn)≥50歲女性患者HPV感染率最高，高達(dá)為79.77%。不同地區(qū)各年齡段HPV感染率差異的原因可能與就診患者類型以及參與篩查人數(shù)有關(guān)。本研究顯示不同年齡段HPV感染以單重感染為主，其中多重感染以15～25歲年齡段最高，分析其原因可能與青春期和更年期的激素水平和免疫力變化有關(guān)。因此，在進(jìn)行女性HPV的篩查時應(yīng)關(guān)注這兩個年齡段人群。

綜上所述，邯鄲地區(qū)女性HPV感染率較高，應(yīng)加強(qiáng)和普及篩查工作，提高人群對于HPV的認(rèn)識，對于預(yù)防和早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌，以及疾病的防治、患者生存期延長、生命質(zhì)量的改善有重要意義。HPV疫苗接種是預(yù)防宮頸癌發(fā)病、降低死亡率的有效辦法。特別是在衛(wèi)生資源缺乏、細(xì)胞學(xué)早期篩查不可及和篩查效果不明顯的地區(qū)，HPV疫苗接種就顯得更加重要[17]。然而目前在中國，除了醫(yī)務(wù)工作者，普通大眾對HPV和HPV疫苗的認(rèn)知度較低，對HPV疫苗的接受度也不高[18]。WHO優(yōu)先推薦9～13歲女孩接種HPV疫苗，因此需要以學(xué)校為單位開展HPV相關(guān)知識宣傳和教育，提高青少年對HPV感染和疫苗的認(rèn)知程度，以提高疫苗接種率，從而真正達(dá)到對HPV感染的預(yù)防性效果。