邯鄲地區10 306例婦科門診女性患者HPV基因分型及感染特征分析

王 蕾，董志玲，張利賓，王志剛，石紅燕

(邯鄲市中心醫院檢驗科，河北 邯鄲 056000)

人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)屬乳頭瘤病毒科，是一種雙鏈小DNA病毒，有病毒蛋白外殼和核心DNA物質構成[1]，具有嗜黏膜和皮膚上皮性，廣泛分布于人和動物的上皮細胞，具有高度特異性，易引發感染部位的良惡性病變。宮頸癌是目前嚴重威脅女性生命健康的惡性腫瘤之一，而我國又是宮頸癌高發國家之一，每年新增病例超過13萬人次，從高危型HPV的持續感染到一般的宮頸癌前病變并最終發展為宮頸癌大約需要15年[2]。歐洲生殖器官感染和腫瘤研究組織提出HPV分型檢測臨床應用的重要性，并以提出高危型HPV檢測作為宮頸癌篩查的初篩手段，目前已發現的HPV亞型有200余種，其中約40種可感染生殖道，根據其致病力大小分為高危型和低危型；每一型又包含多種HPV亞型，其中高危型HPV(HPV16、18、58、56等)主要引起外生殖器癌、宮頸癌及高度外陰、宮頸上皮內瘤變及其他部位惡性病變等；低危型HPV(HPV6、11、42等)主要誘發外生殖器和皮膚尖銳濕疣以及低度外陰、宮頸上皮內瘤及其他部位的疣類病變和低度上皮內瘤等，且其感染具有地域、民族和年齡差異[3]。本研究采用聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)體外擴增技術及DNA反向點雜交相結合的HPV基因分型技術對10 306例婦科門診女性患者HPV不同基因型的檢測結果進行分析研究，為邯鄲地區女性宮頸癌的防治提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2016年3月至2017年11月在邯鄲市中心醫院婦科門診就診以及進行健康體檢的10 306例女性患者為研究對象，進行HPV基因分型檢測，年齡15～85歲,平均(40±10)歲。納入標準：①無子宮切除手術史或宮頸手術，采樣前72 h避免進行陰道沖洗和使用藥物治療。②有性生活史，并愿意在采樣前24 h內避免性接觸。排除標準：接受過疫苗接種、妊娠期、哺乳期。

1.2方法

1.2.1樣本采集 采樣在非月經期，采樣前48 h無性行為，無陰道內用藥。以專用宮頸脫落細胞采集器采集，醫護人員以窺陰器或陰道張開器暴露宮頸，用拭子將宮頸口過多的分泌物擦拭去。取出宮頸刷置于宮頸口，繞一個方向旋轉4～5周以獲得足量的上皮細胞樣本，再將宮頸刷頭部放入洗脫管中，沿刷柄折痕處將宮頸刷柄折斷，并旋緊洗脫管蓋，保持洗脫管直立放置。標本室溫保存不超過12 h，4 ℃保存不超過7 d。

1.2.2檢測方法 采用PCR體外擴增技術和DNA反向點雜交相結合的HPV基因分型檢測技術。試劑盒由深圳亞能生物技術有限公司提供，采用羅氏480PCR儀進行HPV基因分型檢測。檢測分為HPV DNA的提取、PCR擴增、雜交、洗膜、顯色幾個步驟，嚴格按照操作規程完成。共檢測23種HPV基因型，包括17種高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82)，6種低危型(HPV6、11、42、43、81、83)。結果判斷：根據膜條上藍色斑點的位置，讀取相應位置上標注的各個基因型信息；如果僅一個基因型位點出現藍色斑點，則可判斷為相應基因型的單一感染；若多個基因型位點出現了藍色斑點，則可判斷為相應基因型的混合感染。

1.3統計學方法 采用SPSS 16.0統計軟件行數據分析，計數資料以例(%)表示，各組比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1HPV感染率以及HPV基因亞型感染分布情況 10 306例女性患者中，共檢出HPV陽性3 737例，感染例次為4 774例次，檢出亞型23種，感染陽性率為36.26%。其中檢出HPV高危3 674例次，占總感染例次的76.95%，感染的基因亞型前3位分別為HPV16、HPV52和HPV51，陽性構成比依次為12.97%、10.45%和7.12%，17種高危型均被檢出；檢出HPV低危1 100例次，占總感染例次的23.05%，感染的基因亞型前3位分別為HPV42、HPV81、HPV6，陽性構成比依次為5.30%、5.07%和4.80%，6種低危型也均被檢出。見表1。

2.2HPV感染情況的年齡分布情況 10 306例女性患者中26～35歲和36～45歲兩個年齡段進行HPV篩查的人數較為集中，各年齡段HPV感染率比較差異有統計學意義(χ2=603.500，P<0.001),見表2。

2.3單一與多重HPV感染分布規律 3 737例HPV感染陽性病例中，單一感染2 703例，占HPV陽性病例的72.33%；二重感染556例，占HPV陽性病例的14.87%；三重感染300例，占HPV陽性病例的8.03%；四重感染92例，占HPV陽性病例的2.46%；五重感染44例，占HPV陽性病例的1.18%；五重以上感染42例，占HPV陽性病例的1.12%。

2.4各年齡段HPV感染類型分布規律 各年齡段HPV單一感染率以46～55歲年齡段最高，多重感染率以15～25年齡段最高。見表3。

3 討 論

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，在我國女性患者中發病率僅次于乳腺癌，在發達國家女性惡性腫瘤中占第7位，在發展中國家發病率居女性惡性腫瘤第2位，在我國每年宮頸癌的新發現病例為50萬左右，并有近27.4萬的患者死于該病[4]。宮頸癌及其癌前病變被認為是一個多因素、多步驟的疾病，生物學因素在宮頸癌發病中的作用在近年來的研究中備受重視，HPV感染已被公認為宮頸癌發病的確切病因。2017版HPV感染疾病相關問題專家共識[5]中提到，推薦HPV-DNA檢查作為宮頸癌篩查的主要檢查手段，尤其對于已婚女性人群結合宮頸細胞學檢查可以提高宮頸癌變的診斷效果并降低漏診率?！吨袊┌Y篩查及早診早治指南(試行)》[6]對于宮頸癌的篩查，根據不同地區以及經濟水平高低推薦不同篩查方案：①最佳首選篩查方案，宮頸取材HPV-DNA檢測結合宮頸液基細胞學檢查，適用于我國目前經濟發達地區及或經濟條件比較好的家庭婦女宮頸癌篩查；②一般篩查方案，宮頸取材HPV-DNA檢測和傳統巴氏涂片相組合，適用于目前經濟中等發達地區；③僅用醋酸染色后肉眼觀察/聯合復方碘染色后肉眼觀察篩查，適用于經濟不發達、貧窮落后以及衛生資源較缺乏地區[7]。目前來我院體檢的人群大多采用方案①進行篩查，方案①中兩者結合應用可以同時了解患者病變的程度并明確HPV感染亞型，以一步提高確診率并預判病情。HPV感染疾病的研究正逐步從婦產科走向多學科[8]，因此隨著HPV篩查的普及，了解其感染的地域、民族及年齡組之間的差別，以及HPV亞型感染的分布規律，對于宮頸癌的篩查與預防以及由HPV感染引起的其他相關疾病的研究起重要作用。

表1 HPV基因亞型感染分布

HPV：人乳頭瘤病毒

表2 HPV感染陽性率與年齡分布的關系

HPV：人乳頭瘤病毒

表3 各年齡段HPV感染亞型分布規律

HPV：人乳頭瘤病毒

本研究結果顯示，邯鄲地區HPV感染陽性率為36.26%，同其他報道有所差異，如重慶地區為30.8%[9]，四川東北地區為49.12%[10]，茂名地區為26%[11]，南京地區為10.79%[12]，深圳地區為20.76%[12]，長沙地區為14.8%[1]，北京地區為23.96%[13]，新疆地區維吾爾族婦女為20.2%[14]；如上所示，HPV感染率存在地域差異，另外與研究群體是否為門診患者或體檢患者有關，四川東北地區的高感染率可能與其研究群體為泌尿系感染患者有關。有報道顯示，中國女性HPV感染率為15.71%[15]，宮頸病變患者感染率為82.43%，感染率和高危型分布均存在顯著地區差異，北方地區感染率高于南方地區[9]。地區性感染差異有可能源于北方氣候溫度差異較大，造成女性易患疾病引起抵抗力降低，同時也不能排除飲食習慣及遺傳差異因素。本研究中，高危HPV感染的基因亞型前3位分別為HPV16、HPV52和HPV51，陽性構成比依次為12.97%、10.45%和7.12%。也有研究表明[11]，高位HPV感染的基因型前3位為HPV16、HPV58和HPV33，而鮑彥平[16]報道中提到HPV16、58、52亞型在亞洲(尤其是中國高發地區)人群中具有重要意義。

邯鄲地區HPV感染年齡段根據本研究顯示以36～45歲年齡段感染率最高，感染率為53.33%；其次為26～35年齡段，感染率為27.62%，有關HPV感染與年齡段相關性研究結果國內外文獻報道存在差異，李晨等[4]調查福建醫科大學附屬醫院5 869例女性患者，發現≤25年齡組感染率最高，感染率為32.5%；鄧健康和郭曉蘭[10]對四川東北地區的女性患者篩查發現≥50歲女性患者HPV感染率最高，高達為79.77%。不同地區各年齡段HPV感染率差異的原因可能與就診患者類型以及參與篩查人數有關。本研究顯示不同年齡段HPV感染以單重感染為主，其中多重感染以15～25歲年齡段最高，分析其原因可能與青春期和更年期的激素水平和免疫力變化有關。因此，在進行女性HPV的篩查時應關注這兩個年齡段人群。

綜上所述，邯鄲地區女性HPV感染率較高，應加強和普及篩查工作，提高人群對于HPV的認識，對于預防和早期發現宮頸癌，以及疾病的防治、患者生存期延長、生命質量的改善有重要意義。HPV疫苗接種是預防宮頸癌發病、降低死亡率的有效辦法。特別是在衛生資源缺乏、細胞學早期篩查不可及和篩查效果不明顯的地區，HPV疫苗接種就顯得更加重要[17]。然而目前在中國，除了醫務工作者，普通大眾對HPV和HPV疫苗的認知度較低，對HPV疫苗的接受度也不高[18]。WHO優先推薦9～13歲女孩接種HPV疫苗，因此需要以學校為單位開展HPV相關知識宣傳和教育，提高青少年對HPV感染和疫苗的認知程度，以提高疫苗接種率，從而真正達到對HPV感染的預防性效果。