C反應蛋白基因單核苷酸多態性與家族遺傳性抑郁癥發病的關系研究

王士良 鐘華 陸梅娟 宋國華 章曉梅 林敏 楊勝良 錢敏才

C反應蛋白（CRP）是一種廣泛存在于脊椎動物體內的保守蛋白，其表達水平與炎癥反應有關[1]。在非炎癥情況下，人體內正常的血清CRP水平極低，很難檢測出；但是在炎癥最初的24～48h內，肝臟會大量產生CRP并分泌至血液循環中，使血清CRP水平提高2 000倍。近期研究表明，在慢性炎癥條件下，人體內CRP水平會輕微增高，并維持在3～10mg/L[2]。研究人員已發現慢性炎癥可能參與了抑郁癥的發生過程，目前關于慢性炎癥與抑郁癥關系的假說主要有2個[3]：一是慢性炎癥所導致的神經病理變化可能誘導了抑郁癥的發生，而血清CRP水平上調與抑郁癥發病并無直接因果關系；二是慢性炎癥所導致的CRP水平上調，通過不明機制，最終導致了抑郁癥的發生。盡管目前學術界投入了大量精力去試圖精確描述抑郁癥與CRP水平的關系以及相關機制，但由于抑郁癥患者個體差異過大，仍無法得出統一結論。有研究發現，CRP基因單核苷酸多態性（SNPs）變異率和家族遺傳性抑郁癥（familial inheritance depression，fDEP）的發病率都大約為40%[4]。此外，在對同卵雙胞胎的研究中發現CRP會影響抑郁癥發病的基因通路[5]。并有研究發現特定的CRP SNPs可能會影響血清CRP水平[6]。筆者通過研究fDEP患者的CRP SNPs來進一步探討CRP與抑郁癥發病的關系。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2015年7月至2016年7月我院精神科確診為抑郁癥的男性患者60例作為fDEP組，年齡（45.09 ±8.12）歲；BMI（25.31± 5.01）kg/m2。納入標準：（1）符合國際疾病分類（ICD-10）中抑郁癥的診斷標準；（2）漢密爾頓抑郁量表（HAMD-17）評分＞17分；（3）一級親屬中至少有1名家族成員有抑郁癥病史。排除標準：（1）患有慢性肝病、腎病、動脈粥樣硬化、癌癥、神經系統疾病、精神分裂癥及其它慢性炎癥性疾病。（2）長期使用胰島素、糖皮質激素或者減肥藥。另選取同期我院健康體檢男性60例作為健康對照組，年齡（47.85±7.23）歲；BMI（26.64±4.22）kg/m2。兩組間年齡、BMI等一般資料比較均無統計學差異（均P＞0.05）。所有納入者均簽署知情同意書，并經醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 實驗試劑及儀器 CRP單抗包被的聚苯乙烯珠子（日本Woko公司）；DNA分離提純試劑盒（美國QIAGEN 公司，Cat No./ID：69504）；高通量分析儀器（美國羅氏公司，LightCycler 480）；化學分析儀（美國Abbott公司，Architect c16000）。

1.2.2 標本采集 兩組受試者禁食8h，且在無大量運動12h以及無酒精攝入24h后抽取肘靜脈血40ml，分置2根試管。第1管20ml血樣用于檢測相關血清生化指標。第2管20ml冷凍后進行DNA分離提純。

1.2.3 血清生化指標水平檢測 采用化學分析儀檢測兩組受試者各項血清生化指標，檢測CRP時將CRP單抗包被在聚苯乙烯珠子上，使得CRP抗原富集并增強檢測靈敏度[7]（可以檢測0.175～1 100mg/ml的CRP）。檢測結果以對數轉化形式進行標準化。

1.2.4 DNA提取和基因多態性檢測 按照試劑盒的說明書，分離并提取冷凍血樣標本中的DNA。CRP基因定位于1號染色體上（1q21-23），包含2段外顯子。通過使用Tagger algorithm和HapMap genotype（中國）的數據庫進行分析預測，本研究選定了5個中國漢族人群常見的CRP SNPs多態性位點，包括rs3093059、rs1417938、rs1800947、rs1130864和rs1205位點，見圖1。所有受試者的標本均采用高通量分析儀器進行SNPs的基因型檢測，并采用相關軟件進行不同基因型的計數統計（LightCycler 480 software release 1.5.1.62 SP1）。

圖1 CRP蛋白的基因區域結構圖和5個SNP位點的位置

1.3 統計學處理 采用SPSS v15.0統計軟件。正態分布的計量資料以表示，組間比較采用t檢驗以及Welch校準。CRP基因多態性分布采用χ2檢驗并進行Bonferroni校準。不同CRP SNPs組間的血清CRP水平比較采用單因素方差分析以及Tukey后檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組各項生化指標的比較 fDEP組血清CRP水平明顯高于對照組（P＜0.05），其它指標均無統計學差異（均P＞0.05），見表 1。

表1 兩組間各項生化指標的比較

2.2 兩組CRP SNPs的比較 rs1417938位點的A等位基因以及rs1205的C等位基因，其出現頻率在fDEP組中較對照組明顯增高。此外，rs1800947的GG/CC比例也在fDEP組中明顯增高。另外2個常見的SNPs分布在兩組中并無統計學差異。見表2。

2.3 不同CRP基因型受檢者血清CRP水平的比較rs1205的低頻等位基因型CC（fDEP組20例，健康對照組4例）和rs1417938的低頻等位基因型AA（fDEP組26例，對照組2例），均可以顯著上調血清CRP的表達水平（均P＜0.01）。此外，rs1800947位點的低頻等位基因型CC（fDEP組4例，健康對照組16例）顯著下調了血清CRP水平。詳見表3。

3 討論

本研究檢測了fDEP患者和健康對照的人口統計學指標以及多種生理生化和炎癥指標，結果發現只有血清CRP水平發生了明顯變化，即血清CRP水平在fDEP患者中顯著增高。此外，筆者還發現了3個CRP SNPs位點的亞型分布與fDEP發病有關，且并未受到受試者年齡以及生理狀況的影響。

表2 兩組CRP SNPs的比較[例（%）]

表3 不同CRP基因型受檢者血清CRP水平的比較

目前很多關于CRP和抑郁癥的研究結論仍有爭論。Luciano等[8]通過兩組排除年齡和性別的同期群分析研究中發現，抑郁癥伴隨的情緒癥狀與CRP SNPs分布在老年人中呈正相關；rs1800947的不同等位基因表型與抑郁癥有中等程度的關聯性。Almeida等[9]在3 700多例70歲以上男性中展開的研究發現，rs1205的等位基因表型與抑郁癥發病相關。此外，還有一組研究表明CRP基因的特定單倍體多態性與血清CRP水平和抑郁癥發病呈正相關[10]。這些結果均提示，特定的CRP SNPs可能與抑郁癥發病相關。

考慮到患者高度的個體差異性可能導致了既有研究結論的不一致，目前學術界的共識停留在特定的CRP SNPs可以調節血清CRP水平[11-14]。比如，rs1205的CC等位基因被發現可以上調血清CRP水平[15]。在本研究中，筆者同樣發現rs1205的CC等位基因以及rs1417938的AA等位基因可以顯著上調血清CRP水平，這個結果與既有研究相一致。同時筆者還發現rs1800947的CC等位基因表現出了明顯下調CRP水平的趨勢。盡管詳細的機制仍然不明確，筆者推測這種調節可能與基因的表觀遺傳學條件相關，也就是說，上述幾個SNPs位點有可能發生在CRP基因的表達調節區域。

基于上述結論，并考慮到抑郁癥和CRP SNPs均有40%的可遺傳性，本研究探討了可遺傳性CRP SNPs是否可能通過上調血清CRP水平從而影響了抑郁癥的發病。本研究結果發現，rs1417938的A等位基因亞型，rs1205的C等位基因亞型以及rs1800947的G等位基因亞型均與fDEP的發病有相關性。這一結果表明特定的CRP SNPs分布可能導致fDEP發病?？紤]到在多數可遺傳的疾病中，遺傳因素要比散發性的環境致病因素占據更大的比重，本研究結果高度提示CRP SNPs可能會導致fDEP的發病。

當然，本研究的缺陷在于未能找出闡明CRP SNPs能夠調節血清CRP水平的機制直接證據，這就導致只能依靠現有文獻來推斷rs1417938和rs1205的低頻等位基因確實可以上調血清CRP水平，從而很難排除CRP SNPs可能通過其它原因導致抑郁癥發病，并繼而誘導CRP水平增高的可能。但是，本研究發現特定的可遺傳CRP SNPs的分布頻率在fDEP患者中顯著高于健康對照組，而且這些CRP SNPs都伴隨了血清CRP水平增加。這個結果高度提示CRP SNPs與抑郁癥的發病有相關性。此外，本研究結果同樣發現fDEP患者血清CRP水平明顯高于健康對照組，這個結果提示血清CRP水平升高也可能與抑郁癥發病相關?？紤]到最新的研究提示[16]，血清CRP水平上升，可以通過特定基因通路導致抑郁癥的發病，筆者推測特定的CRP SNPs很有可能導致了血清CRP水平增高并因而誘導了抑郁癥發病。總之，血清CRP水平增高很可能是fDEP的一個發病機制，并為抑郁癥的發病和診斷提供了新的思路。