檜木純露解酒護肝作用的實驗研究

廖瑟靜，翁競玉，石榆鋒，覃琦珊，張曉月，梁小潔，李麗

（廣西中醫藥大學，廣西南寧530001）

近年來隨著人民生活水平的提高和生活方式的改變，對酒類的消費也日益增多，過量飲酒已經成為全世界范圍內極受關注的社會公共問題。一次大量飲酒會引發急性酒精中毒，對機體健康產生嚴重危害，例如致心腦血管疾病、神經系統疾病、消化不良、代謝紊亂及營養失調等[1-2]。隨著急性酒精中毒發病率逐年增高，開發有效的解酒藥物、緩解酒精中毒癥狀也顯得愈發必要。檜木純露為檜木植物蒸餾精油后所得的冷凝水溶液，含有黃酮類、萜烯類、槲皮素、鞣質等多種成分，具有良好的抗氧化、清除自由基、抗炎等活性，人們在生活上已試用于解酒去宿醉、提神醒腦，發現有較好的療效[3-5]。本項目通過小鼠防醉及醒酒實驗，考察檜木純露的解酒作用；通過構建小鼠酒精性肝損傷模型，觀察檜木純露的預防保護作用，并初步探討其作用機制。為進一步深入研究檜木產品的藥用及保健價值提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

檜木純露：四川檜元素生物有限公司；海王金樽：深圳市海王健康科技發展有限公司，將海王金樽研磨后配成1g/mL 的混懸液備用；56 度二鍋頭白酒：北京紅星股份有限公司；天門冬氨酸氨基轉移酶（aspartate aminotransferase，AST）、丙氨酸氨基轉移酶（alanine aminotransferase，ALT）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒：南京建成生物工程研究所。

清潔級昆明種小鼠：雄性，體重（20±2）g，購自成都達碩實驗動物中心，動物合格證號：SCXK（川）2008-24。飼養環境溫度為（23±2）℃，濕度為40%～60%，明暗交替周期為12 h。

1.2 儀器與設備

低溫高速離心機（H1650R）：湘儀離心機儀器有限公司；高速離心機（L530）：長沙湘儀離心機儀器公司；7200 型可見分光光度計：上海龍尼柯儀器有限公司；恒溫水浴箱（HHSYZL-Ni）：北京長風儀器公司；微量加樣器：Eppendorf 公司；玻璃勻漿管：上海壘固儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 防醉實驗

取雄性小鼠50只，適應性喂養3 d 后隨機分為模型組、海王金樽陽性對照組（0.15 mL/10 g）、檜木純露高、中、低劑量組（0.2 mL/10 g、0.15 mL/10 g、0.1 mL/10 g）。禁食不禁水12 h 后，各給藥組給予相應藥物預防，模型組灌以生理鹽水（0.15 mL/10 g）。給藥30 min 后，各組小鼠灌胃給予56 度紅星二鍋頭（0.15 mL/10 g），觀察小鼠醉酒潛伏期（從灌酒到翻正反射消失的時間）、醒酒時間（從灌酒到翻正反射恢復時間）。

1.3.2 醒酒實驗

動物分組同1.3.1。各組小鼠灌胃給予56 度紅星二鍋頭0.15 mL/10 g，5 min 后，除模型組給予生理鹽水，其余組小鼠分別灌胃給予相應藥物治療。記錄小鼠醉酒潛伏期及醒酒時間。

1.3.3 對酒精性肝損傷的保護作用

取雄性小鼠60 只，適應性喂養3 d 后隨機分為空白組、模型組、海王金樽陽性對照組（0.15 mL/10 g）、檜木純露高、中、低劑量組（0.2 mL/10 g、0.15 mL/10 g、0.1 mL/10 g）。每日空白組與模型組給予等體積的生理鹽水，各給藥組每日灌胃相應劑量藥物進行保護，30 min 后除空白組外，其余各組以0.15 mL/10 g 灌胃56 度紅星二鍋頭，持續14 d。

最后一天灌胃結束30 min 后，小鼠眼球取血處死，分離血清，解剖取肝臟，用預冷的生理鹽水漂洗后稱重，計算臟器系數。

1.3.4 血清中AST、ALT 的測定

AST 及ALT 的測定方法參照試劑盒說明書。將5 μL 待測樣本加入基質液中，再依次與2.4-二硝基苯肼、0.4 mmol/L 氫氧化鈉溶液反應，后在510 nm 波長下測定各復孔A值。通過標準曲線法求得各樣本相應的AST、ALT 活力單位。

1.3.5 肝臟中氧化/抗氧化相關指標的測定

肝臟組織中SOD 的測定采用水溶性四唑鹽法，參照試劑盒說明書操作后于450 nm 處測定各復孔A值。MDA 的測定使用硫代巴比妥酸法，參照試劑盒說明書操作后于532 nm 處測定各復孔A值。

式中：A0為未添加樣品的對照組吸光度值；A1為添加樣品的實驗組吸光度值。

1.3.6 數據處理方法

數據均采用±s表示，并采用SPSS19.0 軟件進行統計分析，組間比較采用t 檢驗。

2 結果與分析

2.1 防醉實驗

實驗小鼠防醉實驗結果見表1。

表1 小鼠防醉實驗結果（±s，n=10）Table 1 Results of experiment on preventing drunkenness in mice（±s，n=10）

表1 小鼠防醉實驗結果（±s，n=10）Table 1 Results of experiment on preventing drunkenness in mice（±s，n=10）

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 醉酒潛伏期/min 醒酒時間/min模型組 3.45±1.65 292.73±39.28陽性藥組 8.69±2.31** 261.94±47.90**檜木純露高劑量組 7.29±2.73** 254.35±50.66**檜木純露中劑量組 6.57±1.44** 263.28±41.27*檜木純露低劑量組 4.12±1.92* 279.01±37.41*

由表1可見，與模型組小鼠比較，灌胃白酒前給予不同劑量的檜木純露和陽性藥的小鼠醉酒潛伏期延長（P<0.01 或P<0.05），醒酒時間縮短（P<0.01 或P<0.05）。

2.2 解酒實驗

實驗小鼠解酒實驗結果見表2。

由表2可見，與模型組比較，灌白酒后再灌胃給予不同劑量的檜木純露和陽性藥的小鼠醉酒潛伏期延長（P<0.01 或P<0.05），醒酒時間顯著縮短（P<0.01）。

2.3 對酒精性肝損傷的保護作用

2.3.1 對肝臟系數的影響

對酒精性肝損傷小鼠肝臟系數影響結果見表3。

表2 實驗小鼠解酒實驗結果（±s，n=10）Table 2 Results of experiment on relieving alcoholism in mice（±s，n=10）

表2 實驗小鼠解酒實驗結果（±s，n=10）Table 2 Results of experiment on relieving alcoholism in mice（±s，n=10）

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 醉酒潛伏期/min 醒酒時間/min模型組 3.12±1.30 276.6±44.86陽性藥組 5.67±0.91** 237±65.28**檜木純露高劑量組 6.11±1.67** 242.4±48.60**檜木純露中劑量組 5.33±1.42* 249±37.08**檜木純露低劑量組 6.02±1.22** 252±54.62**

表3 對酒精性肝損傷小鼠肝臟系數的影響（±s）Table 3 Effect on liver index in mice induced by ethanol（±s）

表3 對酒精性肝損傷小鼠肝臟系數的影響（±s）Table 3 Effect on liver index in mice induced by ethanol（±s）

注：與空白組比較，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 肝臟系數空白組 10 4.35±1.02模型組 8 6.80±0.81##陽性藥組 10 4.57±0.36**檜木純露高劑量組 10 4.67±0.61**檜木純露中劑量組 10 4.89±0.97*檜木純露低劑量組 9 5.06±0.56*

由表3可見，模型組中酒精性肝損傷小鼠的肝臟系數較空白組小鼠顯著升高（P<0.01），給予檜木純露和陽性藥保護的小鼠肝臟系數較模型組降低（P<0.01或P<0.05）。

2.3.2 對血清AST 和ALT 的影響

對小鼠血清中AST 和ALT 活性影響結果見表4。

表4 對小鼠血清中AST 和ALT 活性的影響（±s）Table 4 Effects on levels of AST and ALT in serum in mice（±s）

表4 對小鼠血清中AST 和ALT 活性的影響（±s）Table 4 Effects on levels of AST and ALT in serum in mice（±s）

注：與空白組比較，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

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由表4可見，給藥14 d 后，與空白組比較，模型組小鼠血清AST 和ALT 活性顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，陽性藥組和檜木純露高、中劑量組顯著降低（P<0.01 或P<0.05），但檜木純露低劑量組AST 和ALT活性無顯著性差異。

2.3.3 對肝臟SOD 活性和MDA 含量的影響

對小鼠肝臟SOD 活性和MDA 含量影響結果見表5。

由表5可見，與空白組比較，模型組小鼠肝臟內SOD 活性顯著降低（P<0.01），MDA 的水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，陽性藥組與檜木純露各劑量組SOD 的活性升高（P＜0.01 或P＜0.05）。MDA 水平顯著降低（P＜0.01）。

表5 對小鼠肝臟SOD 活性和MDA 含量的影響（±s）Table 5 Effects on levels of SOD and MDA in liver in mice（±s）

表5 對小鼠肝臟SOD 活性和MDA 含量的影響（±s）Table 5 Effects on levels of SOD and MDA in liver in mice（±s）

注：與空白組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 n SOD/（U/mgprot） MDA/（mmol/gprot）空白組 10 166.34±30.56 0.51±0.12模型組 8 109.11±31.24## 1.96±0.57##陽性藥組 10 143.29±25.70** 1.04±0.31**檜木純露高劑量組 10 150.62±20.16** 1.23±0.46**檜木純露中劑量組 10 134.48±32.02** 1.19±0.25**檜木純露低劑量組 9 121.65±38.69* 1.30±0.44**

3 結論與討論

近些年來，因為人們生活水平的增高，人均飲酒量的上升造成酒精性肝病的發病率也逐年上升，成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病[6]。一次大量飲酒會引發急性酒精中毒，嚴重影響身體健康，危害社會安定。急性酒精中毒可對機體產生嚴重損害，例如致心腦血管疾病、神經系統疾病、消化不良、代謝紊亂及營養失調等疾病。隨著急性酒精中毒發病率逐年增高，對其進行防治也顯得愈發重要。

乙醇進入機體后約90%～95%在肝臟內被氧化代謝，加快乙醇在體內代謝的機理包括加快肝臟中乙醇的氧化代謝、增強清除自由基的能力等。ALT 主要存在于肝細胞漿內，當肝細胞損傷時，細胞內轉氨酶可進入血中，引起血ALT 升高。AST 也存在于肝細胞漿內，AST 并分布于線粒體內，當肝細胞損害嚴重時，線粒體內AST 釋放入血，因此轉氨酶是肝細胞損害的敏感標志，也是乙醇所致肝損傷較敏感且常見的指標[7]。酒精攝入過多會導致肝組織的抗氧化物質消耗增加，SOD 水平下降。MDA 是脂質過氧化反應的終產物，能反映組織中自由基的含量和自由基引發的脂質過氧化程度[8]。

檜木是裸子植物中扁柏屬的一種植物，檜木純露為檜木植物蒸餾所得的冷凝水溶液。檜木純露中除了含有少量精油成分之外，還含有全部植物體內的水溶性物質。擁有百分之百植物水溶性物質的純露，其所含礦物養分（如單寧酸及類黃酮）是精油所缺乏的，其低濃度的特性容易被皮膚所吸收，完全無香精及酒精成份，溫和不刺激。有研究表明，檜木純露具有很好的抗氧化效果，對羥基自由基（·OH）具有一定的清除作用，對超氧自由基具有明顯的抑制作用，可發揮抗炎、護肝等作用，檜木其葉子的主要化學成分是揮發油、黃酮類、鞣質等[9-11]，而萜類和黃酮類化合物對ConA 致小鼠免疫性肝損傷均具有一定的保肝作用[12]。

實驗結果表明，在防醉實驗和解酒實驗中，檜木純露均可延長小鼠的醉酒潛伏期，且縮短醒酒時間（P＜0.01 或P＜0.05）。在酒精性肝損傷實驗中，檜木純露能緩解酒精對小鼠肝臟系數的影響（P＜0.01 或P＜0.05），降低血清中ALT、AST 水平（P＜0.01 或P＜0.05）及肝臟內MDA 含量（P＜0.01），升高SOD 活性（P＜0.01或P＜0.05），有效緩解酒精對肝臟的損傷，增強抗氧化能力，減輕過氧化損傷，為檜木作為具有抗氧化能力、護肝作用的保健食品提供了一定的理論研究依據。

檜木純露具有顯著的防醉解酒作用，可增強酒精中毒小鼠的抗氧化能力，對小鼠酒精性肝損傷具有一定的保護作用。檜木純露有望進一步開發成為解酒護肝的保健食品，其有效成分和作用機制還需更深入的研究。