老年高血壓病人外周血TLR4表達與血壓晝夜節律的關系探討

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高血壓作為全球常見的慢性病一直被認為是導致心腦血管事件甚至死亡的最主要危險因素之一[1]。近年來隨著對高血壓發病機制研究的深入，認為慢性炎癥和機體免疫功能的異常可能參與了高血壓及其靶器官損害過程[2]。Toll樣受體4(TLR4)是人類發現的第一個TOLL樣受體(toll like receptors，TLRs)家族成員，目前研究表明TLR4可在血管平滑肌細胞(VSMCs)和內皮細胞等心血管相關細胞中表達，在心血管炎癥病理發展過程中發揮了重要作用[3]。本研究旨在觀察老年高血壓病人外周血TLR4表達與血壓晝夜節律的關系，從而探討老年高血壓靶器官損傷的機制。

1 資料與方法

1.1 研究對象 納入2018年1月—2018年10月在我院門診和老年病科住院的未經正規治療的老年高血壓病人80例， 年齡≥60歲。所有入選病例均采用 1999 年世界衛生組織(WHO)/國際高血壓學會(ISH )高血壓診斷標準。同時選取血壓正常、年齡≥60歲的老年人30名作為對照組。所有入選者均排除繼發性高血壓、血液病、糖尿病、惡性腫瘤， 嚴重心、腦、肺、肝、腎疾患和近期感染者。

1.2 研究方法

1.2.1 生化檢測 所有病人于06：00～08：00采集空腹靜脈血檢測總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)等指標。所有化驗均在山西醫科大學第一醫院檢驗中心完成。

1.2.2 動態血壓監測 血壓曲線分為杓形和非杓形， 夜間收縮壓(SBP)和/或舒張壓(DBP)下降10%～20%為正常杓型動態血壓節律，否則為非杓型動態血壓節律[4]。

1.2.3 流式細胞術檢測TLR4 抽取新鮮的外周血100μL，加入紅細胞裂解液1mL室溫下孵育10min，1 500 r/min離心10～15 min后棄上清，用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)懸浮細胞調節濃度至1×106細胞/mL， 取100 μL 細胞懸液加入流式細胞管中，加入5 μL TLR4-FITC熒光抗體，同時設置陰性對照管(加入等量PBS)。充分混勻，室溫避光孵育30～40 min，每管分別加1 mL PBS重懸，1 500 r /min離心 10 min，棄上清。 再次加入1 mL PBS重懸細胞重復離心后棄上清，加入 200 μL PBS 重懸細胞用流式細胞儀上機檢測。

2 結 果

2.1 老年高血壓組與對照組基礎資料比較 兩組在性別、體質指數、TC、TG、LDL-C、HDL-C方面比較差異無統計學意義(P>0.05)；老年高血壓組24 h、白晝、夜間收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、脈壓(PP)均明顯高于對照組(P<0.05)。詳見表1、表2。

注：兩組各項比較P>0.05

表2 老年高血壓組和對照組血壓指標和TLR4表達比較(±s)

注：dSBP為白晝收縮壓；dDBP為白晝舒張壓；nSBP為夜間收縮壓；nDBP為夜間舒張壓；dPP為白晝脈壓；nPP為夜間脈壓；與對照組比較，1)P<0.05

2.2 老年高血壓組與對照組TLR4表達比較 老年高血壓組TLR4表達陽性率為(7.86±1.87)%，明顯高于對照組的(5.16±1.48)%，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表2。

2.3 非杓型高血壓組與杓型高血壓組一般資料和TLR4表達的比較 老年高血壓組根據血壓晝夜節律分為杓型高血壓組和非杓型高血壓組，兩組在性別、體質指數、TC、TG、LDL-C、HDL-C方面比較差異無統計學意義(P>0.05)； 非杓型高血壓組TLR4表達的陽性率明顯高于杓型高血壓組，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)。詳見表3。

表3 非杓型高血壓組、杓型高血壓組及對照組一般資料和TLR4表達的比較

與杓型高血壓組比較，1)P<0.05

3 討 論

全球疾病負擔研究(GBD2015)數據顯示，在全球死亡率下降速度快于預期的基礎上，心血管疾病所導致的死亡率卻是增加的[1]，其中高血壓是心血管疾病最主要的危險因素[2]，易導致心、腦、腎等靶器官損害，甚至誘發心腦血管事件的發生[5]，嚴重威脅著人類健康。原發性高血壓(EH)的發病機制尚不清楚，遺傳、體液、環境及神經生物學機制等均參與了高血壓的發生發展。新近研究認為，高血壓病是一種慢性炎癥性疾病，國內外文獻均證實高血壓的發生、發展及轉歸與炎癥密切相關，而高血壓的血流動力學異常又加重其炎癥反應[6]。血管內存在多個炎癥因子和炎癥通路，而TLRs尤其是 TLR4 介導的炎癥通路參與了高血壓的病理過程[7]，Marketou等[8]研究表明TLR4的激活與原發性高血壓密切相關。本研究顯示老年高血壓組TLR4表達的陽性率明顯高于對照組，說明TLR4信號轉導通路及炎癥機制可能參與了老年高血壓的發生發展。

有研究證實，TLRs信號通路的激活可誘發高血壓心肌重構和纖維化，導致心肌結構和功能的改變[9]。譚麗華等[10]發現高血壓大鼠出現明顯的左室肥厚時，伴有心肌TLR4、NF-κB、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)等免疫炎癥因子表達的增多，證實了免疫-炎癥反應參與了高血壓大鼠左室肥厚的發展。Bomfim等[11]通過對自發性高血壓大鼠的研究發現，抑制TLR4可以直接降低血壓，緩解血管異常收縮，認為抗TLR4藥物對于直接控制血壓有重要作用。張世魁等[12]研究表明高血壓腎損害病人外周血單核細胞TLR4表達及血清TNF-α水平均明顯升高，證實了TLR4信號通路天然免疫和炎癥反應在高血壓腎損害中的重要作用。總之，TLR4與高血壓的靶器官損害密切相關，可能是高血壓的獨立危險因子。而老年高血壓病人常伴有血壓晝夜節律的異常，血壓變異與靶器官損害、心腦血管事件及死亡率的相關性尤為密切。本研究結果顯示非杓型老年高血壓病人TLR4表達的陽性率明顯高于杓型老年高血壓病人，說明TLR4信號通路的過度激活和TLR4表達的增多可能是老年高血壓病人血壓節律異常導致靶器官損害明顯的機制之一。

總之，TLR4 及其介導的炎癥免疫反應與老年高血壓病的發生發展密切相關[13]。TLR4可以通過炎癥機制引起內皮功能紊亂及組織損傷，造成血管重構、心肌纖維化等，最終導致靶器官損害[14]。而干預TLR4的表達對于改善血壓及相應的并發癥可能有一定的療效[15]。因此，研究TLR4在高血壓發生發展及靶器官損害中的作用，可為高血壓的治療提供思路，以減少和預防心腦血管并發癥的發生，從而達到長期改善高血壓病人生活質量的最終目的。