EZH2基因在膀胱尿路上皮癌組織中的表達及與臨床病理參數的關系

蔡永健 張顯軍 柯莽 洪濤

[摘要] 目的 探討EZH2基因在膀胱尿路上皮癌組織中的表達及與臨床病理參數的關系。 方法 選取2011年1月～2017年8月我院手術切除并病理證實的膀胱尿路上皮癌患者共60例，采用En Vision二步法免疫組化檢測EZH2基因的表達，并分析其與臨床病理參數的關系。另取前列腺TURP手術時切取的正常膀胱組織10例作為對照。 結果 膀胱尿路上皮癌中EZH2基因陽性率75.00%（45/60），正常膀胱組織EZH2基因陽性率10.00%（1/10）。膀胱尿路上皮癌標本中EZH2基因陽性率顯著高于正常膀胱組織（χ2=13.32，P<0.01）。膀胱尿路上皮癌組織中EZH2基因的表達程度與性別和年齡等特征無明顯相關性（P>0.05），與浸潤深度和病理分級等密切相關（P<0.05）。結論 EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中高表達，其表達增加可能在膀胱尿路上皮癌的形成、發(fā)展中扮演極其重要的角色。膀胱尿路上皮癌中EZH2基因表達與其惡性程度、浸潤深度密切相關，參與其浸潤轉移過程，促使腫瘤的發(fā)展，有望成為膀胱尿路上皮癌早期診斷以及預后評估的靶分子。

[關鍵詞] 膀胱尿路上皮癌;免疫組化;EZH2基因;臨床病理參數

膀胱癌是尿路系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其中超過92%為尿路移行上皮癌，其發(fā)病機制較復雜，受多種基因與多重因素的影響與調控，尤其與癌基因的激活密切相關[1，2]。EZH2（ehancer of zeste homolog 2）基因是一種新發(fā)現(xiàn)的癌基因，位于人染色體7q35位置，其主要作用是促進癌細胞的分化、生長及增殖，在腫瘤細胞局部浸潤、轉移的過程中起重要作用，在多種癌細胞中高表達，但EZH2基因在膀胱尿路移行上皮癌中的表達情況國內外報道較少[3-7]。本文旨在探討EZH2基因在膀胱尿路上皮癌組織中的表達及與臨床病理參數的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月～2017年8月在我院手術切除并病理證實的膀胱尿路上皮癌患者共60例。納入標準[4]：所有患者均經手術切除，且術后病理證實為膀胱尿路上皮癌;排除標準[5]：術前接受放療、化療或免疫治療。其中男42例，女18例;年齡39～87歲，平均（67.5±5.3）歲;浸潤性19例，非浸潤性41例。另取前列腺TURP手術時切取的正常膀胱組織10例作為對照，其中男7例，女3例;年齡40～86歲，平均（68.1±5.6）歲。兩組性別和年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 檢測方法

采用免疫組化二步法（En Vision）測定，標本常規(guī)10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，標本連續(xù)4 μm厚切片，先予5%羊血清37℃封閉2 h，抗原修復采用EDTA，加入一抗工作液4 ℃孵育過夜，用PBS沖洗后滴加二抗En Vision試劑孵育1 h（室溫），PBS沖洗后再滴加DAB顯色，蘇木精復染、脫水透明、封片鏡檢。分別用已知陽性切片和PBS代替一抗作陽性和陰性對照。

1.3 觀察指標

分析膀胱癌及正常膀胱組織中EZH2基因表達的差異，并分析膀胱尿路上皮癌組織中EZH2基因表達與臨床病理參數的關系。

1.3.1 結果判斷? EZH2陽性信號以細胞核著色，呈棕黃色或棕褐色顆粒。染色結果評價采用半定量積分法判斷，通過對高倍鏡視野下細胞的染色強度及陽性細胞占總的細胞的百分率進行綜合性評分，其中細胞的染色強度根據其強度：如陰性、弱陽性、陽性及強陽性分別記為0分、1分、2分及3分;陽性細胞占總的細胞的百分率：如陰性、百分率≤10%、百分率11%～50%、百分率51%～80%和百分率≥81%分別記為0分、1分、2分、3分和4分。兩者乘積≥4認為EZH2基因表達陽性，否則EZH2基因表達陰性。

1.3.2 EZH2基因與臨床病理參數關系? 包括性別、年齡、浸潤深度和病理分級等。

1.4 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 19.0 軟件進行數據分析，計數資料采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 EZH2基因在膀胱尿路上皮癌及正常組織中的表達比較

EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中陽性率為75.00%（45/60），正常膀胱組織EZH2基因陽性率為10.00%（1/10）。膀胱尿路上皮癌標本中EZH2基因陽性率顯著高于正常膀胱組織，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=13.32，P<0.01）。

2.2 膀胱尿路上皮癌組織中EZH2基因的表達與臨床病理參數的相關性

EZH2基因膀胱尿路上皮癌組織中的表達程度與性別和年齡等特征無明顯相關性（P>0.05），與浸潤深度和病理分級等密切相關（P<0.05）。見表1。

3 討論

EZH2是1996年發(fā)現(xiàn)的一種新的人類基因，是果蠅zeste基因增強子的人類同源物，是PcG基因家族的核心成員，在胚胎干細胞發(fā)育、細胞增殖和凋亡及浸潤、遷移等方面扮演重要角色[8-11]。EZH2定位于人染色體7q35位置，具有組蛋白甲基轉移酶，通過催化組蛋白H3第27位賴氨酸三甲基化（H3K27m3），從而抑制基因表達，通過抑制細胞增殖和分化對腫瘤的發(fā)生發(fā)展起重要作用;EZH2作為轉錄阻遏因子，能減少轉錄因子與DNA結合，抑制靶基因的表達，并作用于pRb2/p130蛋白C-末端與組蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）相聯(lián)的區(qū)域，恢復pRb2/pB0 HDAC1復合物介導的細胞周期素A啟動子活性，促進細胞的演進和惡性變[12-14]。EZH2基因在胃癌、大腸癌、腎瘤、乳腺癌、前列腺腺瘤、腦癌等癌組織呈現(xiàn)明顯高表達狀態(tài)，較正常的人體組織中的表達顯著升高，參與了大多數惡性腫瘤的形成、發(fā)展、浸潤和轉移的整個過程[15-19]。

膀胱癌是我國泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一，其術后易出現(xiàn)腫瘤的復發(fā)和浸潤、轉移，臨床治療效果欠理想，部分患者復發(fā)后其腫瘤的惡性程度反而明顯增加。在非浸潤性尿路上皮癌中，約有10%以后發(fā)展為浸潤性癌或發(fā)生浸潤、轉移。尋找新的可用于診斷、治療、判斷預后、預測治療效果的基因，可以為膀胱尿路上皮癌的預后提供科學依據。近年來EZH2基因在膀胱癌中的表達及臨床意義受到臨床的高度重視。李海波等[4]研究發(fā)現(xiàn)膀胱尿路上皮癌中EZH2基因呈高表達，且與其病理分級、臨床分期密切相關。徐松濤等[20]研究發(fā)現(xiàn)膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展與EZH2基因表達增高密切有關，且與膀胱癌的臨床分期、復發(fā)密切相關。

本研究示膀胱尿路上皮癌標本中EZH2基因陽性率明顯高于正常膀胱組織。表明EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中高表達，其表達增加可能在膀胱尿路上皮癌的形成、發(fā)展中扮演極其重要的角色，可能是膀胱尿路上皮癌一個敏感的生物學標志。同時研究發(fā)現(xiàn)EZH2基因在膀胱尿路上皮癌組織中的表達程度與浸潤深度及病理分級有相關性。表明EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中的表達程度與其惡性程度、浸潤深度密切相關，提示EZH2基因參與其浸潤轉移過程，促使腫瘤的發(fā)展，有望成為膀胱尿路上皮癌早期診斷以及預后評估的靶分子。必要時可進一步分析研究EZH2基因與膀胱癌其他臨床病理參數及膀胱鏡檢查結果的相關性，進一步了解膀胱尿路癌發(fā)病的分子病理機制，從而指導臨床診斷及基因治療，有望成為膀胱癌早期基因診斷、治療及預后評估分析的靶分子[21，22]。

總之，EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中高表達，其表達增加可能在膀胱尿路上皮癌的形成、 發(fā)展中扮演極其重要的角色。EZH2基因在膀胱尿路上皮癌組織中表達程度與浸潤深度及病理分級有相關性，其表達程度參與其浸潤轉移過程，可促使腫瘤的發(fā)展。EZH2在膀胱尿路上皮癌的發(fā)病進展中起重要作用，進一步深入研究對膀胱尿路上皮癌的診斷和治療及判斷預后有一定的臨床意義。

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