S100A、P53對宮頸癌行順鉑新輔助化療患者療效及敏感性評估

武曉敏 楊慧芬

[摘要] 目的 探討S100A6、P53對宮頸癌行順鉑新輔助化療患者的療效及化療敏感性評估價值。 方法 選取2017年1～12月我院收治的行順鉑新輔助化療的宮頸癌患者70例，觀察不同臨床療效患者的S100A6、P53表達情況。結果 70例患者中完全緩解（CR）8例，部分緩解（PR）51例，疾病穩定（SD）6例，疾病進展（PD）5例，化療總有效率為84.29%（59/70）;化療前S100A6、P53陽性表達率為85.71%、61.43%，化療后S100A6、P53陽性表達率為45.71%、84.29%，化療后S100A6陽性表達率較化療前明顯降低（P<0.05），P53陽性表達率較化療前明顯升高（P<0.05）;高敏感組S100A6、P53陽性表達率分別為27.12%、91.53%，低敏感組S100A6、P53陽性表達率分別為90.91%、45.45%，高敏感組S100A6陽性表達率明顯低于低敏感組（P<0.05），P53陽性表達率明顯高于低敏感組（P<0.05）。結論 S100A6、P53可作為宮頸癌患者行順鉑新輔助化療效果和敏感性預測的標志物。

[關鍵詞] S100A6;P53;宮頸癌;順鉑新輔助化療;敏感性

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤，病死率位居女性惡性腫瘤第二位[1-2]。手術、放療和化療是宮頸癌的常規治療方法，能夠明顯提高患者生存率，但對于病灶體積偏大的患者，尤其是腫瘤直徑≥4 cm患者的治療效果有限[3]。對于此類患者，順鉑新輔助化療常作為前期治療的首選方式，旨在縮小腫瘤體積以創造手術條件。子宮動脈介入治療療效優于靜脈化療，常作為新輔助化療的首選方式[4-5]。但并非所有病灶均對化療敏感，因此，治療前通過敏感標記物來預測腫瘤化療敏感性對制定個體化治療方案具有指導意義。S100A6是一種生物蛋白，具有生長調控功能[6];P53是一種抑癌基因，與腫瘤細胞DNA修復和凋亡關系密切[7]。S100 A6、P53能夠反映宮頸癌病情程度，但針對療效評估和化療敏感性預測的報道較少。對此，本研究對宮頸癌患者行順鉑新輔助化療前后的S100A6和P53表達水平以及不同療效患者的S100A6、P53表達情況進行監測，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1～12月我院收治的行順鉑新輔助化療的宮頸癌患者70例，年齡30～65歲，平均（43.25±12.36）歲;臨床分期：Ⅰb2期29例，Ⅱa2期41例。納入標準：所有患者均首次經病理活檢確診為Ⅰb2、Ⅱa2期宮頸癌，且腫瘤直徑≥4 cm[8];常規行血尿常規、生化電解質等實驗室檢查無明顯異常。排除標準：既往接受過手術、放療、化療等治療患者;合并心、肝、腎功能不全者;存在化療禁忌證者。本研究經院倫理委員會審核，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

化療前接受常規婦科檢查、B超、血尿常規、肝腎功能、生化電解質等檢查，符合化療條件后接受順鉑+博來霉素（海正輝瑞制藥有限公司，國藥準字H2005 5883，規格為1.5萬博來霉素單位）新輔助動脈化療方案，采用Seldinger法穿刺右股動脈，分別引入導絲、5F導管鞘、5FCobra導管，對雙側子宮動脈進行選擇性插管，注入造影劑，明確病灶血流情況，將順鉑70 mg/m2+博來霉素30 mg注入雙側子宮動脈，使用明膠海綿條栓塞雙側子宮動脈，14 d為1療程，連續化療2個療程。

1.3 免疫組化

1.3.1 儀器與試劑? 即用型P53舒抗人單克隆抗體、免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術開發公司;S100A6單克隆抗體購自安諾倫（北京）生物科技有限公司;蘇木素、中性樹膠、多聚賴氨酸購自北京中杉生物技術有限公司。

1.3.2 檢測方法? 參照試劑盒說明書進行操作，使用PBS緩沖液做陰性對照，用已知宮頸癌組織切片做陽性對照。①將包有宮頸癌組織的石蠟切片使用二甲苯脫蠟2次，15 min/次，使用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3次，5 min/次;②將切片置于pH=6.0的檸檬酸緩沖液中，加熱煮沸15 min進行抗原修復，冷卻至室溫后使用PBS沖洗3次，5 min/次;③滴加10%正常山羊血清50 μL封閉內源性微生物;④于切片上分別滴加1滴P53單克隆抗體或S100A6單克隆抗體，37℃孵育30 min;⑤滴加新配制的DAB顯色液，置于顯微鏡下觀察顯色，3～10 min后使用清水沖洗，終止反應;⑥蘇木素復染1 min，使用乙醇脫水，用中性樹膠封片，置于顯微鏡下觀察。

1.3.3 判定標準? 以蛋白定位于細胞核或細胞質且出現棕黃色顆粒為陽性細胞，具體標準為：①染色較淡，陽性細胞數<25%為陰性（-）;②染色較強且清晰，陽性細胞數位于25%～50%為陽性（+～+++）。

1.4 臨床療效評價標準

參照WHO療效判定標準進行臨床療效評價[9]，完全緩解（CR）：可見病灶完全消失;部分緩解（PR）：可見病灶最大直徑縮小>50%;疾病穩定（SD）：可見病灶最大直徑≤25%或病灶最大直徑縮小≤50%;疾病進展（PD）：病灶最大直徑增大>25%或出現新靶病灶。總有效率=（CR+PR）/總例數×100%。

1.5 觀察指標

觀察患者治療前后S100A6、P53陽性表達率;根據化療效果將化療后CR和PR患者納入高敏感組，將SD和PD患者納入低敏感組，比較兩組患者S100A6、P53陽性表達率。

1.6 統計學方法

采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析。計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 宮頸癌患者臨床療效

70例患者中CR 8例，PR 51例，SD 6例，PD 5例，化療總有效率為84.29%（59/70）。見表1。

2.2 化療前后S100A6、P53陽性表達率比較

化療前S100A6、P53陽性表達率為85.71%、61.43%，化療后S100A6、P53陽性表達率為45.71%、84.29%，化療后S100A6陽性表達率較化療前明顯降低（P<0.05），P53陽性表達率較化療前明顯升高（P<0.05）。見表2。

2.3 不同化療敏感性患者S100A6、P53陽性表達率比較

高敏感組59例，低敏感組11例，高敏感組S100 A6、P53陽性表達率分別為27.12%、91.53%，低敏感組S100A6、P53陽性表達率分別為90.91%、45.45%，高敏感組S100A6陽性表達率明顯低于低敏感組（P<0.05），P53陽性表達率明顯高于低敏感組（P<0.05）。見表3。

3 討論

宮頸癌的治療手段包括手術治療、放射治療和化療等，對于腫瘤偏大的患者，手術和放療治療效果有限，臨床多采取先期化療的方式以縮小腫瘤體積，為創造手術機會和提高后期化療敏感性提供保障[10-12]。根據用藥途徑將化療方式分為靜脈化療和動脈化療，動脈化療以可針對性栓塞腫瘤血管而得到廣泛應用[13-14]。在新輔助化療中，順鉑聯合博來霉素是臨床治療宮頸癌的常用方案，順鉑作用于腫瘤細胞的DNA嘌呤和堿基嘧啶，能夠有效阻止腫瘤細胞DNA復制過程;博來霉素可抑制腫瘤細胞增殖分裂，二者聯合化療可明顯抑制腫瘤細胞增殖分裂[15]。本研究對宮頸癌患者進行2個療程的化療，總有效率達到84.29%，表明以順鉑為主的新輔助化療在宮頸癌患者中效果良好。但并非所有腫瘤都對化療敏感，化療前有效評估化療敏感性對制定個體化治療方案具有重要指導意義。

S100A6基因參與細胞增殖、凋亡等多種病理過程，其在不同腫瘤組織中的表達水平并不一致。研究顯示[16]，S100A6在胰腺癌、結腸癌、胃癌和黑色素瘤中表達明顯升高，而在前列腺癌中表達水平顯著下降。姚月榮等[6]發現，S100A6在宮頸癌患者中的表達高于正常女性，且表達水平與惡性程度、淋巴結轉移關系密切。本研究對宮頸癌患者治療前后的S100A6表達水平進行了觀察，發現治療前S100A6表達較低，這與姚月榮等[6]研究結果一致;經過2個療程治療后，患者S100A6表達明顯升高，說明S100A6可作為順鉑新輔助化療效果的有效評價指標。進一步對化療敏感性進行分組，將CR和PR患者納為高敏感組，將SD和PD患者納為低敏感組，發現高敏感組患者S100A6蛋白表達水平明顯低于低敏感組（P<0.05），說明S100A6水平可反映化療敏感性，S100A6表達可作為宮頸癌細胞對化療敏感性的有效預測指標。

P53是一種抑癌基因，不僅對損傷的DNA具有監視和修復作用，還可直接調控腫瘤細胞的增殖與凋亡[17-20]。許多抗癌藥物均可引起P53依賴的細胞凋亡而發揮細胞毒性作用[21]。本研究結果顯示，治療后P53陽性表達率明顯高于治療前（P<0.05），證實P53與宮頸癌發展有關，與李平等[22]研究一致。孫鋒等[23]發現，P53不僅與腫瘤細胞增殖凋亡有關，與腫瘤耐藥性的產生同樣關系密切。若P53過表達則無法有效促進細胞修復和誘導凋亡，導致腫瘤細胞產生耐藥性[24]。本研究進一步對化療敏感性不同的患者進行觀察，發現高敏感組患者P53陽性表達率明顯高于低敏感組（P<0.05），表明P53與化療敏感性關系密切，這對制定個體化治療方案具有重要指導意義。若宮頸癌患者化療前P53呈低表達，則說明順鉑新輔助化療可作為先期化療的方案;若化療前P53呈高表達，則說明腫瘤細胞對順鉑新輔助化療存在耐藥性，此時應制定其他治療方案。

綜上所述，順鉑新輔助化療在宮頸癌患者中應用效果顯著，S100A6、P53可作為化療效果評估和化療敏感性預測的有效指標，這對制定個體化治療方案具有指導意義。

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