AEG-1和Endoglin在子宮內膜癌中的表達及其意義

陳海倫 羅幸波 宏小翠

[摘要] 目的 探討星形細胞上調基因-1（Astrocyte elevated gene-1，AEG-1）和Endoglin標記的微血管密度計數（MVD）在子宮內膜癌組織中的表達及兩者與臨床病理特征間的關系。 方法 收集惠州市中心人民醫院和廣東醫科大學附屬醫院2014年1月～2018年3月20例正常子宮內膜組織、43例子宮內膜癌組織標本，應用免疫組化法檢測AEG-1和Endoglin標記的MVD表達情況。 結果 在正常子宮內膜組織、子宮內膜癌組織中，AEG-1的陽性表達率呈逐漸上升趨勢（P<0.01），AEG-1在子宮內膜癌組織中的表達水平與子宮內膜癌肌層浸潤深度、組織學分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移明顯相關（P<0.05）;在正常子宮內膜組織、子宮內膜癌組織中，Endoglin標記的MVD表達強度呈逐漸上升趨勢（P<0.01），Endoglin標記的MVD在子宮內膜癌組織中的表達強度與子宮內膜癌肌層浸潤深度、FIGO分期、淋巴結轉移明顯相關（P<0.05）。 結論 子宮內膜癌組織中AEG-1和Endoglin呈高表達，提示AEG-1和Endoglin在子宮內膜癌的發生發展中有著重要的作用，AEG-1和Endoglin表達水平的檢測可用于子宮內膜癌的輔助診斷和病情估計。

[關鍵詞] AEG-1;Endoglin;子宮內膜癌;免疫組化法

子宮內膜癌為女性生殖道三大常見惡性腫瘤之一，約占女性癌癥總數的7%，占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%，全球子宮內膜癌患者的數量逐年增加，呈年輕化趨勢，子宮內膜癌的發生是多基因、多步驟、多階段等相互作用的結果，涉及癌基因的激活與腫瘤新生血管的生成[1-4];星形細胞上調基因-1（astrocyte elevated gene-1，AEG-1）是近年來新發現的癌基因，又稱之為異黏蛋白（Metadherin，MTDH）、3D3，與多種腫瘤的發生、發展、侵襲及轉移過程密切相關[5-8];Endoglin亦命名為CD105，研究表明腫瘤組織及其轉移病灶中新生血管內皮細胞可產生Endoglin，Endoglin與腫瘤的發生、發展關系密切[9-12]。本研究采用免疫組化法檢測AEG-1及Endoglin標記的微血管密度計數（Microvessel density，MVD）在子宮內膜癌組織中的表達情況，探討AEG-1和Endoglin與子宮內膜癌發生發展的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料

收集惠州市中心人民醫院和廣東醫科大學附屬醫院2014年1月～2018年3月住院手術或門診活檢病理標本63例，其中正常子宮內膜組織共20例，子宮內膜癌組織共43例，子宮內膜癌按FIGO分期標準進行相應分期，其中Ⅰ期7例，Ⅱ期14例，Ⅲ期17例，Ⅳ期5例;低分化19例、中分化11例，高分化13例;所有子宮內膜癌病例術前均未行化療、放療或免疫治療，各組之間年齡比較差異無統計學意義（P>0.05）;兔抗人AEG-1單克隆抗體和鼠抗人Endoglin單克隆抗體購自美國Abcam公司，即用型免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 免疫組化檢測方法

石蠟包埋組織以4 μm厚度行連續切片，常規給予脫蠟至水化程度，切片浸于50 mmol/L（pH 8.0）乙二胺四乙酸溶液之中，予微波抗原修復10 min，冷卻到室溫狀態，給予充分水洗，PBS浸洗，滴加正常山羊血清封閉液之中，室溫20 min;甩去掉多余液體，不予洗滌，加入AEG-1單抗或Endoglin單抗4℃溫度過夜;給予PBS洗滌;滴加于SP 9000通用生物素標記二抗，37℃，40 min;予二氨基聯苯氨顯色30 s，給予蘇木素復染，乙醇脫水、透明及中性樹膠封固。二氨基聯苯氨顯色液配制步驟：取DAB 5 mg溶于100 mL 0.05mol/L Tris-鹽酸（pH7.6）當中，加入30%過氧化氫10 μL，攪拌混勻后給予過濾（使用前給予新配制）;采用該公司配套提供的陽性切片作為陽性對照，使用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 陽性結果判定

AEG-1以胞漿或胞核中出現棕黃色或棕色顆粒作為陽性細胞。按半定量積分法來判斷表達情況，根據染色強度及陽性細胞所占比例分別標記為0～3分。染色強度：未著色標記為0分，著色淺標記為1分，中度著色標記為2分，著色深標記為3分。陽性細胞百分率：高倍鏡（×400）下隨機選取10個視野，每個視野共計數100個細胞。計算平均陽性百分率，平均陽性細胞百分率≥5%為陽性。

Endoglin標記的MVD計數方法：首先在低倍鏡下全面仔細觀察切片以便確定腫瘤內血管密度的最高處，即為熱點處;再在高倍鏡（0.189 mm2/視野）下，以與周圍腫瘤細胞及結締組織成分可明顯區別的任何一個棕色染色的內皮細胞或細胞叢維的一個血管，只要結構不是相連接，其分支結構亦作為一個血管計數;記錄3個視野當內的微血管數，取其平均數作為患者的MVD值，雙盲分析其結果。

1.4 統計學分析

采用SPSS20.0統計分析軟件分析，計數資料各組之間差異采用χ2檢驗，計量資料以（x±s）表示，各組之間差異采用t 檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 AEG-1在正常子宮內膜及子宮內膜癌組織中的表達狀態

正常子宮內膜組織和子宮內膜癌組織中AEG-1的陽性表達率分別為25.00%（5/20）、65.12%（28/43），子宮內膜癌組織中AEG-1的陽性表達率高于正常子宮內膜組織的陽性表達率，兩組之間表達比較差異有統計學意義（χ2=8.8073，P<0.01）（表1）。

2.2 AEG-1在子宮內膜癌組織中的表達與臨床病理特征之間的關系

結果表明AEG-1表達水平與子宮內膜癌肌層浸潤深度、組織學分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移明顯相關（P<0.05）（表2）。

2.3 Endoglin標記的MVD在正常子宮內膜及子宮內膜癌組織中的表達強度

正常子宮內膜組織、子宮內膜癌組織中Endoglin標記MVD的表達強度分別為（16.5375±2.1097）、（39.4337±7.8475），子宮內膜癌組織中Endoglin標記MVD的表達強度高于正常子宮內膜組織的表達強度，兩組間表達比較差異有統計學意義（t′=17.7993，P<0.01）（表3）。

2.4 Endoglin標記的MVD在子宮內膜癌組織中的表達強度與臨床病理因素特征之間關系

結果表明Endoglin標記的MVD表達強度與子宮內膜癌肌層浸潤深度、FIGO分期、淋巴結轉移明顯相關（P<0.05）（表4）。

3討論

AEG-1基因是腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）誘導或人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus-1，HIV-1）感染人胚胎星形細胞后導致表達升高的一種基因，近年來研究證實AEG-1在多種腫瘤組織中呈過表達，并在增強細胞的致瘤能力、促進腫瘤細胞的增殖分化、增強腫瘤細胞的侵襲及轉移、促進腫瘤新生血管的生成以及介導化療耐藥等方面均發揮著十分重要的作用[13-15];Lee等[16]研究結果表明：高表達的AEG-1基因還能夠通過促進人類神經膠質瘤細胞的非錨定依賴性生成，最終可導致腫瘤細胞入侵及轉移的能力增強;孫利波等[17]比較AEG-1基因mRNA在正常腦組織和膠質瘤組織中的表達狀況，實時熒光定量PCR檢測時發現，在mRNA水平，正常腦組織中AEG-1基因的表達明顯低于膠質瘤組織，并且Ⅲ～Ⅳ級膠質瘤組織中AEG-1的陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ級，研究得出結論：在膠質瘤組織中AEG-1基因mRNA和蛋白明顯呈高表達，并且其表達水平和膠質瘤腫瘤惡性程度呈正相關，其可能是膠質瘤發病過程中的一個惡性標志物;甘梅富等[18]研究結果表明：結直腸癌組織中的AEG-1表達水平明顯高于結直腸癌癌旁組織，且在癌組織中AEG-1表達水平與結直腸癌TNM分期、組織學分級、浸潤深度及淋巴結轉移明顯相關;本研究結果表明AEG-1在正常子宮內膜組織、子宮內膜癌組織中的表達陽性率依次增高，差異具有統計學意義，隨肌層浸潤深度增大、FIGO分期增高，AEG-1表達陽性率亦增高;低分化者AEG-1表達陽性率明顯高于高、中分化者;有淋巴結轉移患者AEG-1表達陽性率明顯高于無淋巴結轉移患者;提示AEG-1在子宮內膜癌組織中的表達水平與子宮內膜癌肌層浸潤深度、組織學分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移明顯相關，AEG-1作為腫瘤癌基因，在子宮內膜癌的發生發展中起一定程度的作用。

Endoglin是一種同型二聚體的膜結合糖蛋白，位于染色體9q34，分子量為180 kD，Endoglin在多種腫瘤組織的內皮細胞當中特異性高表達，與細胞增殖指標Ki67、CyclinA的表達明顯相關，是內皮細胞增殖的關聯標記物，能夠定量性區別已存在血管和腫瘤新生血管，多因素分析結果顯示用Endoglin測定的MVD可作為惡性腫瘤一個獨立的預后指標[19-20];梁啟廉等[21]通過動物模型進行相關研究，發現抗Endoglin單抗可以顯著抑制人胰腺癌PC-3細胞株的生長，最高抑瘤率可達67.13%，抗Endoglin單抗有可能成為胰腺癌的基因工程治療方法之一;Ho等[22]研究發現，Endoglin標記的MVD表達強度越高預示肝癌侵襲程度更高，癌旁非腫瘤組織的Endoglin表達可以預測早期復發;本研究結果表明隨著正常子宮內膜組織→子宮內膜癌的過程，Endoglin標記的MVD表達強度顯示依次增加，隨肌層浸潤深度增大、FIGO分期增高，Endoglin標記的MVD表達強度亦隨之增加，有淋巴結轉移患者明顯高于無淋巴結轉移患者，提示Endoglin標記的MVD與子宮內膜癌肌層浸潤深度、FIGO分期和淋巴結轉移明顯相關;上述結果表明子宮內膜癌組織中AEG-1和Endoglin呈高表達，提示AEG-1和Endoglin在子宮內膜癌的發生、發展中有著重要的作用，AEG-1和Endoglin表達水平的檢測可用于子宮內膜癌的輔助診斷和病情評估。

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