某部隊(duì)女性HPV感染情況及流行病學(xué)分析*

歐紅玲，馬盈盈，李曉寧，白 靜，張巧云，王 巖，王欣茹

(火箭軍特色醫(yī)學(xué)中心醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，北京 100088)

人乳頭瘤病毒(HPV)是感染人表皮和黏膜鱗狀上皮細(xì)胞的常見DNA病毒。在已發(fā)現(xiàn)的HPV 200多種不同亞型中，超過40種可以感染人類的生殖器官，約30種與腫瘤有關(guān)[1]。HPV 可以通過多種途徑感染生殖道而導(dǎo)致尖銳濕疣及宮頸病變，甚至引起宮頸癌的發(fā)生[2]。本研究應(yīng)用熒光PCR方法對2012年1月至2018年4月期間660例某部隊(duì)患者的生殖道脫落細(xì)胞進(jìn)行基因分型，旨在探討 HPV基因分型檢測在部隊(duì)女性宮頸癌防治方面的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 標(biāo)本來源于2012年1月至2018年4月期間來本院篩查的某部隊(duì)660例女性患者的宮頸脫落細(xì)胞。年齡19～65歲，平均37.2歲。

1.2儀器與試劑 上海之江SLAN 96P PCR擴(kuò)增儀(上海之江生物科技股份有限公司)，高危型HPV分型核酸測定試劑盒(上海之江生物科技股份有限公司)，低危型HPV分型核酸測定試劑盒(上海之江生物科技股份有限公司)。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 使用專用配套的HPV 采樣管。采樣前拭去宮頸口過多的分泌物，再用宮頸刷于子宮頸外口處，輕壓并依順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)3～4周。采樣宮頸刷浸入盛有1 mL無菌生理鹽水的專用HPV樣本管中，充分漂洗貼壁擠干后丟棄，立即送檢。未即時(shí)檢測樣本置于2～8 ℃醫(yī)用冰箱保存，所有樣本均于當(dāng)天或次日檢測完畢。

1.3.2標(biāo)本處理 從專用HPV 采樣管中吸取混勻后液體1～1.5 mL離心管中(如分泌物較多，只取0.2 mL)13 000 r/min離心5 min。小心吸棄上清，沉淀加無菌生理鹽水1 mL混勻，13 000 r/min離心5 min，再次小心吸棄上清。沉淀直接加100 μL核酸提取液充分混勻，沸水浴10 min，然后13 000 r/mim離心5 min，取上清作為PCR反應(yīng)模板。吸棄的上清液、核酸提取后的剩余上清液及相關(guān)廢棄物均按醫(yī)療廢棄物處理。每次檢測均設(shè)置陰陽對照：取陰陽對照品各100 μL置于1.5 mL離心管中(凍存試劑融解后震蕩混勻10 s)，分別加入核酸提取液50 μL充分混勻，沸水浴10 min，然后13 000 r/min離心5 min，取上清作為PCR反應(yīng)模板。

1.3.3PCR擴(kuò)增 取4種HPV核酸熒光PCR檢測混合液n×36 μL分別與4份n×0.4 μL Taq酶，振蕩混勻數(shù)秒，3 000 r/min離心數(shù)秒。加入已提取好的待測樣本DNA 4 μL配置PCR反應(yīng)體系，然后，低速離心數(shù)秒后，按下述參數(shù)進(jìn)行PCR反應(yīng)：94 ℃×2 min；再按93 ℃×10 s →62 ℃×31 s，循環(huán)40次；單點(diǎn)熒光檢測在62 ℃。反應(yīng)體系為40 μL。儀器自動讀取實(shí)驗(yàn)結(jié)果。4種HPV核酸熒光PCR檢測混合液分別用于檢測16、56、31和內(nèi)部參照；18、52、58、68；45、82、33、35；39、51、59、66基因型。當(dāng)陽性對照品擴(kuò)增曲線為典型的S型，且FAM和VIC通道ct值 35，陰性對照為陰性時(shí)，判斷結(jié)果有效。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各年齡段的陽性率統(tǒng)計(jì)分析用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1HPV總體感染和各亞型分布情況 對570例女性患者的宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行 13種高危型HPV基因分型，包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型。570例女性患者中，后期入組的294例女性患者的宮頸脫落細(xì)胞增加了 2種高危型HPV基因分型，包括66和82型。對90例女性患者的宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行2種低危型HPV(6+11)檢測。HPV陽性者共203例，其中156例為高危型感染，47例為低危型感染。HPV高危亞型感染率前五位依次是：HPV 58(4.9%)、HPV 39(4.04%)、HPV 16(3.68%)、HPV 52(3.5%)、HPV 66(2.72%)，低危型HPV(6+11)陽性率52.2%。見表1。

2.2HPV混合感染情況 156例高危HPV感染者中，以單一感染為主，其次為雙重感染，三重感染次之。單一高危HPV感染111例，占總感染者71.15%，雙重HPV感染29例，占總感染者18.59%，三重及以上感染(同時(shí)存在3種或以上HPV亞型感染)共16例，占10.26%，見表2。

表1 檢測標(biāo)本HPV 17種基因亞型分布情況

表2 570例標(biāo)本中HPV混合感染情況[%(n/n)]

2.3各年齡段高危HPV感染情況 3個(gè)年齡段高危HPV感染檢測數(shù)、例數(shù)百分比、陽性率、檢出率和占陽性數(shù)百分比最高的年齡段均是>30～50歲，其次是≤30歲年齡段。對3個(gè)年齡段的陽性率進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，表明感染者的年齡差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.96，P<0.05)。見表3。

表3 不同年齡段HPV感染情況

3 討 論

在全球婦科腫瘤中，宮頸癌的發(fā)病率位居第二，僅次于乳腺癌，嚴(yán)重威脅女性健康。據(jù)統(tǒng)計(jì)全球每年約有46.6萬宮頸癌新發(fā)病例，中國約占世界新發(fā)病例總數(shù)的1/5[3]。近年來，大量研究表明HPV感染是引起宮頸癌變的主要因素之一，宮頸癌患者約有99.7%能檢測出HPV DNA[4]。HPV屬于乳頭瘤病毒科，目前已發(fā)現(xiàn)200多種基因亞型[5]。根據(jù)HPV亞型致病力大小或致癌危險(xiǎn)性大小不同，HPV可分為高危型和低危型。低危型致病力相對較弱，不整合于細(xì)胞基因組中，主要導(dǎo)致皮膚疣類感染、生殖道及肛門周圍皮膚等濕疣樣良性疾病(如尖銳濕疣和性傳播疾病)，而高危型致病力強(qiáng)，整合于細(xì)胞基因組中，主要導(dǎo)致宮頸癌和非典型增生。有學(xué)者認(rèn)為HPV病毒載量與宮頸癌及宮頸癌前病變呈正相關(guān)[6]，HPV DNA病毒載量越高，整合到宿主細(xì)胞的機(jī)會越多，患者宮頸病變越嚴(yán)重[7]。特別在免疫機(jī)能較弱的女性，因無法消滅進(jìn)入體內(nèi)的HPV，導(dǎo)致高危HPV持續(xù)感染，從而增加了罹患宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)，因此將HPV檢測列入宮頸癌篩查方案，用于指導(dǎo)宮頸癌的預(yù)防[8]。

本研究中，某部隊(duì)女性人群高危 HPV 感染率為23.64%，在156例高危HPV感染者中，HPV單一型別的感染率為71.15%，雙重感染率次之，為18.59%，多重感染率(>3)最低，為3.85%。與李欣榮等[9]報(bào)道的湖南HPV陽性率為26.57%，單一感染占72.52%，雙重感染率為19.74%的結(jié)果相似。另外，從本研究基因亞型分布情況可見，HPV高危亞型感染以58(4.9%)、39(4.04%)、16(3.68%)、52(3.5%)、66(2.72%)最為常見，而16和18亞型在單一感染中出現(xiàn)頗多，在混合感染中也較常出現(xiàn)，可見16和18亞型與宮頸病變之間有密切聯(lián)系。低危型(6+11)感染在臨床有癥狀病人中檢出率很高，達(dá)到了52.2%，表明其對尖銳濕疣等疾病的發(fā)生發(fā)展發(fā)揮了重要的作用。再者，本研究中HPV感染前七位亞型分別是58、39、16、52、66、18和31，與DE SANJOSé等[10]報(bào)道的東南亞地區(qū)不一致，與趙芹等[11]報(bào)道的東莞地區(qū)常見亞型不一致，也與龍馨等[12]報(bào)道的重慶地區(qū)亞型分布有差異。結(jié)果表明，在HPV基因亞型分布上，存在明顯的地區(qū)差異。本研究中，進(jìn)行HPV檢測數(shù)最多的年齡段是>30～50歲，這個(gè)年齡段的檢出率較高，可能與HPV傳播途徑有關(guān)，凡有性生活的女性，都有可能通過性接觸將HPV帶入生殖道內(nèi)，因此加強(qiáng)此年齡段女性篩查的力度及宣傳教育，對宮頸癌的早預(yù)防具有積極作用。另外，≤30歲年齡段的檢出率也不低，為19.15%，說明高危HPV感染具有年輕化的趨勢，這可能與年齡相對小的女性對HPV抵抗力弱或過早性交有關(guān)，因此應(yīng)加大部隊(duì)中青年女性HPV的普查力度。

4 結(jié) 論

綜上所述，持續(xù)的高危型HPV感染是宮頸癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素。利用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)對HPV進(jìn)行基因分型檢測，靈敏度高，重復(fù)性好，操作簡單，適合大批量樣本檢測。通過HPV篩查，可進(jìn)一步了解HPV感染及各亞型的分布情況，有助于指導(dǎo)部隊(duì)進(jìn)行女性宮頸癌的預(yù)防篩查及宮頸癌的早期診斷、早期治療，從而降低宮頸癌的發(fā)生率和病死率。