HPLC同時(shí)測(cè)定大葉冬青葉中10種多酚成分的含量及抗氧化活性研究

王存琴，陳 穎，汪 雷，崔巧玉，段名揚(yáng)，陳國(guó)軍

皖南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，蕪湖 241002

大葉冬青(IlexlatifoliaThunb.)，為冬青科(Aquifoliaceae)冬青屬(Ilex)常綠喬木，主要生長(zhǎng)在海拔900 m以下的溝谷常綠闊葉林中，在我國(guó)安徽、江蘇、浙江、江西、福建、湖南、廣西、廣東等地均有分布[1]。藥用其葉，常于秋冬二季采收。大葉冬青主要含有多酚類、三萜及其皂苷、揮發(fā)油等化學(xué)成分[2-8]。作為苦丁茶的主要來(lái)源之一，大葉冬青可用于治療口齒疼痛、熱性痢疾、目赤腫痛、熱病煩渴等癥[9,10]。現(xiàn)代研究表明，抗氧化作用是大葉冬青的主要藥理活性之一，其作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)是所含的多酚類成分[12-18]。然而，目前大葉冬青葉中多酚類成分的含量測(cè)定研究甚少，尤其缺乏同時(shí)測(cè)定大葉冬青葉中多種多酚類成分含量的方法，相關(guān)質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的缺乏，影響了大葉冬青的開(kāi)發(fā)和利用；同時(shí)，大葉冬青葉抗氧化作用與多酚類成分含量之間的相關(guān)性研究未見(jiàn)報(bào)道，影響了大葉冬青的藥用質(zhì)量和安全。本課題組擬在前期研究工作基礎(chǔ)上[2-7,11]，建立HPLC同時(shí)測(cè)定大葉冬青葉中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、對(duì)羥基肉桂酸、蘆丁、異槲皮苷、異綠原酸B、異綠原酸A和異綠原酸C 10種多酚類成分的定量分析方法，并以大葉冬青抗氧化活性為檢測(cè)指標(biāo)，初步探討不同產(chǎn)地大葉冬青葉抗氧化活性與10種多酚類成分總含量間的相關(guān)性，從藥效和含量?jī)煞矫嫒嬖u(píng)價(jià)大葉冬青藥材的質(zhì)量，以便較為全面地反映大葉冬青藥材的品質(zhì)，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立和臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀Agilent Technologies 1260 Infinity Ⅱ(配二極管陣列檢測(cè)器、四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器)(安捷倫科技有限公司)，Agilent HC-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm，安捷倫科技有限公司)，AUW220D型1/10萬(wàn)電子天平(日本島津)，RHP-400A型高速多功能粉碎機(jī)(浙江永康市榮浩工貿(mào)有限公司)，KQ5200E型超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)，GKC型數(shù)顯控溫水浴鍋(上海波絡(luò)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.2 材料

新綠原酸(批號(hào)PS13122601-1，純度大于98.00%)、綠原酸(批號(hào)PS14050901，純度大于98.50%)、隱綠原酸(批號(hào)PS14011403，純度99.06%)、咖啡酸(批號(hào)PS161221-01，純度大于98.00%)、蘆丁(批號(hào)PS160113-02，純度大于等于95.00%)、異槲皮苷(批號(hào)PS13061301，純度99.77%)、異綠原酸B(批號(hào)PS13111502，純度大于98.50%)、異綠原酸A(批號(hào)PS13111501，純度大于98.00%)和異綠原酸C(批號(hào)PS13110401，純度大于98.50%)對(duì)照品均購(gòu)自成都普思生物科技有限公司；對(duì)羥基肉桂酸(批號(hào)D-032-161216，純度大于等于98%)購(gòu)自上海喬羽生物科技有限公司。色譜乙腈(德國(guó)，默克股份有限公司)，色譜甲醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)，水為娃哈哈飲用純凈水，磷酸(天津市福晨化學(xué)試劑廠)，乙醇(無(wú)錫市蘇強(qiáng)化工有限公司)，DPPH(梯希愛(ài)(上海)化成工業(yè)發(fā)展有限公司)。

實(shí)驗(yàn)用大葉冬青藥材23批，于2017年實(shí)地采集，經(jīng)安徽中醫(yī)藥高等專科學(xué)校汪榮斌副教授鑒定為冬青科冬青屬植物大葉冬青I.latifolia的葉，見(jiàn)表1。標(biāo)本均保存于皖南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院。選擇其中來(lái)自不同產(chǎn)地的5個(gè)批次大葉冬青葉，分別是第3、7、11、13、14號(hào)進(jìn)行抗氧化活性試驗(yàn)(見(jiàn)表5)。

表123批藥材產(chǎn)地、采收時(shí)間表

Table 1 Sources of 23 batches of sample from different producing areas and harvest times

編號(hào)No.來(lái)源Source采收時(shí)間Harvest timeS1安徽南陵縣2017.10S2安徽南陵縣2017.10S3安徽南陵縣2017.10S4安徽石臺(tái)縣2017.10S5安徽石臺(tái)縣2017.10S6安徽石臺(tái)縣2017.10S7安徽石臺(tái)縣2017.10S8安徽石臺(tái)縣2017.10S9安徽石臺(tái)縣2017.10S10安徽石臺(tái)縣2017.10S11廣西南寧市2017.10S12廣西南寧市2017.10S13安徽祁門縣2017.10S14安徽蕪湖市2017.01S15安徽蕪湖市2017.03S16安徽蕪湖市2017.05S17安徽蕪湖市2017.06S18安徽蕪湖市2017.07S19安徽蕪湖市2017.08S20安徽蕪湖市2017.09S21安徽蕪湖市2017.10S22安徽蕪湖市2017.11S23安徽蕪湖市2017.12

2 方法與結(jié)果

2.1 HPLC同時(shí)測(cè)定大葉冬青葉中10種多酚類成分的含量

2.1.1 色譜條件

采用Agilent HC-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相為0.2%磷酸乙腈(A)-0.2%磷酸水(B)進(jìn)行梯度洗脫，洗脫程序：0～15 min，10% A；15～16 min，10%～16% A；16～30 min，16% A；30～31 min，16%～18% A；31～50 min，18 % A；柱溫40 ℃；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)320 nm；進(jìn)樣量為10 μL。在上述色譜條件下，供試樣品中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、對(duì)羥基肉桂酸、蘆丁、異槲皮苷、異綠原酸B、異綠原酸A和異綠原酸C色譜峰的保留時(shí)間與對(duì)照品保持一致。對(duì)照品溶液和供試樣品溶液HPLC圖(見(jiàn)圖1)。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取對(duì)照品新綠原酸10.92 mg，綠原酸18.36 mg，隱綠原酸10.92 mg，蘆丁29.80 mg，異槲皮苷5.08 mg，異綠原酸B 11.28 mg，異綠原酸A 5.82 mg，異綠原酸C 4.06 mg，咖啡酸2.08 mg，對(duì)羥基肉桂酸1.60 mg混合置于20 mL容量瓶中，用50%甲醇超聲溶解并定容至刻度，搖勻，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，即得混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。質(zhì)量溶度分別為0.546、0.918、0.546、1.490、0.254、0.564、0.291、0.20、0.104、0.08 mg/mL，4 ℃冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.3 供試品溶液的制備

精密稱取不同產(chǎn)地大葉冬青葉粗粉約2.0 g(過(guò)4號(hào)篩)，分別置250 mL具塞錐形瓶中，加50%甲醇125 mL，稱定重量，80 ℃超聲提取50 min，放冷，再稱定重量，加50%甲醇溶液補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液50 mL，水浴蒸干，用適量50%甲醇轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中并定容至刻度，搖勻，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，即得供試品溶液。

圖1 對(duì)照品(A)與樣品(B)HPLC圖Fig.1 Chromatograms of reference standards (A) and Sample (B)注：1新綠原酸、2綠原酸、3隱綠原酸、4咖啡酸、5對(duì)羥基肉桂酸、6蘆丁、7異槲皮苷、8異綠原酸B 、9異綠原酸A、10異綠原酸C。Note:1 neochlorogenic acid,2 chlorogenic acid,3 cryptochlorogenic acid,4 caffeic acid,5 p-hydroxycinnamic acid,6 rutin,7 isoquercitrin,8 isochlorogenic acid B,9 isochlorogenic acid A,10 isochlorogenic acid C.

2.1.4 線性關(guān)系考察

精密吸取混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液適量，用50%甲醇稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液，按照2.1.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、對(duì)羥基肉桂酸、蘆丁、異槲皮苷、異綠原酸B、異綠原酸A和異綠原酸C的峰面積，平行測(cè)定3次，求得峰面積平均值，以對(duì)照品濃度(mg/mL)的常用對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)(X)，色譜峰面積的常用對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 大葉冬青葉10種酚酸類成分線性關(guān)系(n=6)

續(xù)表2(Continued Tab.2)

化合物Compounds回歸方程Regression equation 相關(guān)系數(shù)r線性范圍Linear range(μg/mL) IsoquercitrinY=1343.4X-2.527 20.99987.82～254.00Isochlorogenic acid BY=2866.7X-18.8940.999917.35～564.00Isochlorogenic acid AY=3211.6X+10.690.99998.95～291.00Isochlorogenic acid CY=3384.3X-5.336 10.99996.25～203.00

2.1.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取混合對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算相對(duì)應(yīng)的RSD，得出新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、對(duì)羥基肉桂酸、蘆丁、異槲皮苷、異綠原酸B、異綠原酸A和異綠原酸C對(duì)應(yīng)峰面積的RSD分別為0.33%、0.12%、0.12%、0.11%、0.12%、0.18%、0.09%、0.22%、0.22%和0.21%，表明儀器精密度很好。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一樣品(S13)，按2.1.3項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，照2.1.1項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、對(duì)羥基肉桂酸、蘆丁、異槲皮苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C的色譜峰面積，計(jì)算平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.17%、0.75%、0.23%、0.003 7%、0.001 8%、0.50%、0.072%、0.060%、0.049%、0.068%，其RSD分別為0.91%、0.77%、1.02%、4.46%、4.54%、2.57%、1.64%、2.35%、2.58%、1.73%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱定大葉冬青藥材粉末約2.0 g，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，照2.1.1項(xiàng)色譜條件操作，分別在室溫下放置0、2、4、8、12、24 h后進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果顯示，新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、對(duì)羥基肉桂酸、蘆丁、異槲皮苷、異綠原酸B、異綠原酸A和異綠原酸C對(duì)應(yīng)峰面積的RSD分別為1.27%、1.18%、2.90 %、1.43%、1.04%、1.40%、0.97%、1.08%、1.84%、2.66%。說(shuō)明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的大葉冬青樣品(S13)6份，精密加入對(duì)照品適量，按2.1.3項(xiàng)所述的制備方法制備供試品溶液，照2.1.1項(xiàng)條件進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算10種成分的平均回收率及RSD，結(jié)果見(jiàn)表3。10種待測(cè)的成分的平均回收率在96.58%～112.03%，RSD均小于4.0%，表明方法的回收率良好。

表3 大葉冬青葉中10種成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)及對(duì)應(yīng)RSD(n=6)

續(xù)表3(Continued Tab.3)

化合物Compounds樣品中量Amount in sample(mg)加入量Amount added(mg)測(cè)的量Measured quantity(mg)回收率Recovery rate(%)平均回收率Average recovery rate(%)RSD (%)隱綠原酸4.54752.10006.6965100.7499.810.87Cryptochlorogenic acid4.46322.10006.555599.894.50602.10006.6675100.934.41762.10006.477099.384.40492.10006.441599.024.46362.10006.490598.89咖啡酸0.07100.40250.4812101.64101.571.03Caffeic acid0.07470.40250.4794100.460.07560.40250.4820100.810.07950.40250.4862100.870.07120.40250.4866102.700.07410.40250.4907102.96對(duì)羥基肉桂酸0.03820.30750.3858111.60112.033.26P-hydroxycinnamic acid0.03710.30750.3614104.870.03600.30750.3896113.390.03370.30750.3872113.490.03380.30750.3897114.170.03670.30750.3946114.64蘆丁9.92445.730015.6700100.10100.520.38Rutin9.84275.730015.6275100.359.79155.730015.5365100.109.19485.730015.0670100.959.78695.730015.6420100.819.44505.730015.2950100.79異槲皮苷1.41290.97552.4825103.85103.891.02Isoquercitrin1.45460.97552.4860102.221.43720.97552.4925103.231.36410.97552.4480104.551.40370.97552.5055105.231.39080.97552.4700104.29異綠原酸B1.22952.17003.5625104.79107.521.86Isochlorogenic acid B1.22582.17003.5785105.371.17472.17003.6115107.981.15222.17003.5925108.141.16042.17003.6355109.161.17192.17003.6655109.68異綠原酸A0.99561.12002.050596.93101.333.60Isochlorogenic acid A0.99451.12002.056597.230.95961.12002.1265102.26

續(xù)表3(Continued Tab.3)

化合物Compounds樣品中量Amount in sample(mg)加入量Amount added(mg)測(cè)的量Measured quantity(mg)回收率Recovery rate(%)平均回收率Average recovery rate(%)RSD (%)0.92911.12002.0965102.320.92551.12002.1785106.500.95881.12002.1355102.72異綠原酸C1.27600.78252.1715105.49100.483.25Isochlorogenic acid C1.26230.78252.0605100.761.42090.78252.133096.801.34260.78252.059596.921.34800.78252.1645101.601.40640.78252.2180101.32

2.1 .9 樣品含量測(cè)定

按2.1.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照2.1.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，用外標(biāo)法計(jì)算23批大葉冬青藥材中10種化合物的含量，見(jiàn)表4，圖2和圖3。

表4 23批大葉冬青葉藥材中10種成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

續(xù)表4 23批大葉冬青葉藥材中10種成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

2.2 DPPH法測(cè)定大葉冬青葉的抗氧化活性

DPPH在含有自由基的化學(xué)反應(yīng)中作為一種監(jiān)測(cè)反應(yīng)的物質(zhì)，典型的用于抗氧化成分的體外抗氧化活性評(píng)價(jià)[19]。本實(shí)驗(yàn)選擇廣泛用于定量測(cè)定生物試樣和食品抗氧化能力的DPPH法進(jìn)行大葉冬青葉的抗氧化活性測(cè)定。

2.2.1 溶液的制備

DPPH·乙醇溶液：精密稱取DPPH粉末9.85 mg至250 mL棕色容量瓶中，加200 mL無(wú)水乙醇，超聲30 min后加無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，分別制成0.10 mmol/L的DPPH·乙醇溶液。避光，備用。

大葉冬青樣品溶液:①供方法學(xué)考察，取大葉冬青粉末約0.6 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇溶液200 mL，稱定重量，80 ℃超聲提取50 min，放冷，再稱定重量，加50%甲醇溶液補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液100 mL，水浴蒸干，定容至50 mL容量瓶中，作為大葉冬青儲(chǔ)備液，質(zhì)量濃度6.0 g/L(藥材)。②供活性測(cè)定，分別取不同體積的大葉冬青儲(chǔ)備液，置10 mL量瓶中，加50%甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，制成藥材質(zhì)量濃度分別為5.40、4.80、4.20、3.60、3.00、2.40、1.80、1.20 g/L(藥材)的安徽南陵產(chǎn)大葉冬青50%甲醇提取液，藥材質(zhì)量濃度分別為1.05、0.90、0.75、0.60、0.45、0.30 g/L(藥材)的安徽蕪湖產(chǎn)大葉冬青50%甲醇提取液，藥材質(zhì)量濃度分別為1.80、1.50、1.20、0.90、0.60、0.30 g/L(藥材)的安徽石臺(tái)產(chǎn)大葉冬青50%甲醇提取液，藥材質(zhì)量濃度分別為1.80、1.50、1.20、0.90、0.60、0.30 g/L(藥材)的安徽祁門大葉冬青50%甲醇提取液和藥材質(zhì)量濃度分別為0.30、0.45、0.60、0.75、0.90、1.05 g/L(藥材)的廣西南寧大葉冬青50%甲醇提取液，備用。③空白樣品溶液，取6 mL無(wú)水乙醇與1.0 mL 50%甲醇溶液，置15 mL具塞刻度試管中，混勻，即得。

2.2.2 測(cè)定方法[20]

取0.10 mmol/L DPPH·乙醇溶液6 mL，置15 mL具塞刻度試管中，分別加入不同濃度大葉冬青樣品溶液1.0 mL，搖勻，反應(yīng)65 min后，將6 mL無(wú)水乙醇與1.0 mL 50%甲醇溶液作為空白組，6 mL DPPH·乙醇溶液與1.0 mL 50%甲醇溶液作為對(duì)照組。在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)517 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，并計(jì)算自由基清除率。自由基清除能力計(jì)算公式如下：清除率=[1-(Asample-Ablank) /Acntrol]× 100%。

2.2.3 抗氧化能力的測(cè)定

分別取不同產(chǎn)地的大葉冬青藥材，按2.2.1項(xiàng)下方法制備大葉冬青50%甲醇溶液，照2.2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)試，得到不同藥材濃度下各溶液的吸光度，并計(jì)算清除率及IC50值(見(jiàn)表5)。

表5 不同產(chǎn)地大葉冬青抗氧化能力測(cè)定

2.2.4 大葉冬青抗氧化能力與10種多酚類成分含量相關(guān)性初步分析

結(jié)合表4和表5分析，5批不同產(chǎn)地大葉冬青樣品中10種多酚成分總含量較高者，對(duì)應(yīng)IC50相應(yīng)較低，其抗氧化活性相對(duì)較好，其中安徽蕪湖一月份采集樣品中總多酚含量最高，抗氧化活性最好，IC50值最低。廣西南寧采集樣品10種多酚成分總含量比安徽石臺(tái)樣品含量略低，但其抗氧活性優(yōu)于安徽石臺(tái)樣品，通過(guò)對(duì)這兩個(gè)產(chǎn)地大葉冬青葉10種多酚類成分含量比對(duì)發(fā)現(xiàn)，廣西南寧樣品中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸三者含量均高于安徽石臺(tái)樣品。進(jìn)一步分析5批不同產(chǎn)地(3、7、11、13、14號(hào))大葉冬青葉中10種多酚類成分含量差異，結(jié)果顯示新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸三者含量高者抗氧化活性好。據(jù)此推測(cè)，大葉冬青葉抗氧化能力大小與10種多酚成分總含量有關(guān)，其中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸三者含量對(duì)大葉冬青葉抗氧化能力大小影響較大。

3 結(jié)論

本文建立了HPLC同時(shí)測(cè)定大葉冬青葉中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、對(duì)羥基肉桂酸、蘆丁、異槲皮苷、異綠原酸B、異綠原酸A和異綠原酸C 10種多酚類成分含量的方法。以10種多酚類成分總含量和浸出物含量為考察指標(biāo)，比較不同超聲時(shí)間(30、50、80 min)，不同提取溶劑(甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇、水)，不同超聲溫度(30、60、80 ℃)對(duì)提取效率的影響，最終選擇50%甲醇為提取溶劑，溫度為80 ℃，提取時(shí)間50 min作為供試品的最佳提取條件。考察YMC-ODS C18、Agilent HC-C182種型號(hào)色譜柱對(duì)各待測(cè)成分的分離效能，結(jié)果表明Agilent HC-C18色譜柱可以獲得較為平穩(wěn)的基線，且各待測(cè)成分峰形和分離度較好，保留時(shí)間較穩(wěn)定。比較了甲醇-0.2%磷酸水溶液、乙腈-0.2%磷酸水溶液、0.2%磷酸乙腈-0.2%磷酸水溶液系統(tǒng)的分離效果，結(jié)果表明，以0.2%磷酸乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，在流速1.0 mL/min的情況下，10種化學(xué)成分出峰時(shí)間在50 min以內(nèi)，并與相鄰峰的分離度良好。比較了各待測(cè)成分在280、320、328 nm處吸收情況，結(jié)果表明10種成分在320 nm處有較大吸收，且色譜圖的基線較為平穩(wěn)，故選擇320 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

通過(guò)建立的該方法對(duì)不同產(chǎn)地、不同采收期的23批大葉冬青樣品中10種多酚類成分的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，10種多酚類成分總含量主要以新綠原酸、綠原酸和隱綠原酸為主，不同產(chǎn)地、不同采收時(shí)間大葉冬青葉中10種多酚類成分的含量總和存在一定差異。同時(shí)采自10月份的5個(gè)不同產(chǎn)地樣品比較發(fā)現(xiàn)，采自安徽石臺(tái)和廣西南寧的樣品中總多酚含量較高，其次是安徽蕪湖、安徽祁門和安徽南陵。比較了采自安徽蕪湖不同采收時(shí)期的10批大葉冬青樣品，其中6批樣品(采收時(shí)間：8、9、10、11、12、1月)總多酚含量高于其他月份采集樣品，說(shuō)明大葉冬青葉適合秋冬季節(jié)采收，此時(shí)有效成分累積達(dá)到高峰。

對(duì)大葉冬青葉抗氧化活性與10種多酚類成分總含量相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，大葉冬青50%甲醇提取液抗氧化活性與10種多酚類成分總含量基本呈正相關(guān)，其中新綠原酸、綠原酸和隱綠原酸三者與抗氧化活性成正相關(guān)，可能是大葉冬青抗氧化活性的主要有效成分。

綜上所述，單獨(dú)從多酚類化合物的含量不能準(zhǔn)確評(píng)價(jià)大葉冬青藥材的質(zhì)量情況。將抗氧化活性測(cè)定與總多酚含量測(cè)定結(jié)果兩方面相結(jié)合，可更加全面反映大葉冬青藥材的質(zhì)量。此外，目前對(duì)大葉冬青藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究很少，缺乏相關(guān)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，影響到大葉冬青藥材臨床應(yīng)用的安全性和可靠性。因此，本實(shí)驗(yàn)的研究可為大葉冬青藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)。