胃癌組織中BRCA 1蛋白表達、血清TAP水平變化與鉑類化療效果的關系分析

蔣麗琳，肖南平，蔣歡

廣元市第一人民醫院消化內科，四川廣元628000

胃癌是臨床消化科常見疾病，大部分患者就診時已處于晚期，單獨手術治療無法達到根治效果，綜合治療是提高胃癌治療效果的關鍵。臨床發現，術后輔助化療可以有效減少胃癌患者的復發率，提高生存率[1]。奧沙利鉑+替吉奧是胃癌輔助化療的常用方案，作用靶點為DNA，通過與細胞DNA相結合形成鏈間DNA加合物，阻礙DNA復制過程，誘發細胞凋亡，緩解臨床癥狀[2]。文獻指出，乳腺癌易感基因1（breast cancer susceptibility gene 1，BRCA1）、腫瘤異常蛋白（tumor abnormal protein，TAP）是化療藥物所致細胞DNA損傷的修復基因，與腫瘤細胞的耐藥具有密切聯系，在胃癌疾病發展過程中具有指導意義[3-4]。本研究分析了108例晚期胃癌患者的BRCA1、TAP表達與化療療效及預后的關系，為胃癌患者的個體化治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月至2015年6月于廣元市第一人民醫院診治的胃癌患者。納入標準：①臨床診斷符合人民衛生出版社《外科學》第8版中的胃癌診斷標準[6]；②年齡為19～79歲；③接受手術治療；④術后接受化療；⑤經超聲胃鏡、病理檢查證實為胃癌；⑥TNM分期為Ⅳ期；⑦生存時間＞3個月；⑧體力狀況（performance status，PS）評分[5]≤2分；⑨臨床資料完整。排除標準：①合并其他部位惡性腫瘤；②無可測量的實體病灶。根據納入、排除標準，共納入108例胃癌患者。其中，男59例，女49例；年齡為36～79歲，平均年齡為（58.4±5.0）歲；平均體重指數為（22.7±2.9）kg/m2；腫瘤分化程度：高分化26例，中分化50例，低分化32例；病理類型：乳頭狀腺癌32例，管狀腺癌40例，黏液腺癌33例，印戒細胞癌3例。

1.2 治療及療效判定

所有患者均于術后第1天靜脈滴注奧沙利鉑130 mg/m22 h，3周重復1次；口服替吉奧，每次20 mg，每天2次，共28天。參照世界衛生組織（WHO）實體瘤評價標準[7]評估患者的療效。完全緩解（complete response，CR）：病灶完全消失，維持1個月；部分緩解（partial response，PR）：病灶最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮小≥50%，維持1個月；疾病穩定（stable disease，SD）：病灶最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮小＜50%，或增加＜25%，維持1個月；疾病進展（progressive disease，PD）：出現新病灶或病灶最大直徑及最大垂直直徑的乘積增加≥25%，維持1個月。緩解率=（CR+PR）例數/組內總例數×100%。

1.3 觀察指標及檢測方法

1.3.1 BRCA 1術后采用免疫組織化學法檢測了BRCA1蛋白表達。胃癌病灶組織經4%甲醛固定、脫水、石蠟包埋，常規切成厚度為4 μm的切片；脫蠟、水化、抗原修復，使用3%H2O2室溫孵育；采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）進行沖洗，滴入 1∶100稀釋的鼠抗人BRCA1單克隆抗體，室溫下培育，PBS沖洗，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素對比染色；梯度乙醇脫水，二甲苯透明，采用中性樹脂封片，在顯微鏡下進行鏡檢。選擇PBS代替一抗作為空白對照。BRCA1蛋白陽性表達結果判定：著色主要定位于細胞核，呈淡黃色、黃色、棕色。

1.3.2 TAP所有患者均于化療前后檢測了血清TAP水平。采集無名指末梢血25μl，并制作成2張血涂片，晾干后于每張涂片上滴入3滴TAP試劑，形成6個液斑，平放涂片；干燥后，經TAP檢測系統圖像分析儀檢測凝聚顆粒。TAP聚合物面積檢測：TAP水平正常時，無明顯凝聚物，TAP聚合物面積為0～121μm2。

1.4 隨訪

隨訪1年，主要通過患者到醫院門診接受相關檢查及電話的方式對患者的治療情況、生存情況進行調查登記。

1.5 統計學方法

采用SPSS 16.0統計軟件分析數據。計量資料以均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；生存分析采用Kaplan-Meier法，生存時間比較采用Log-rank法。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 療效統計

化療后療效評價：CR占0.93%（1/108），PR占51.85%（56/108），SD占17.59%（19/108），PD占29.63%（32/108）。

2.2 BRCA 1蛋白表達情況及血清TAP水平變化

108例患者中BRCA1蛋白陽性表達29例，陰性表達79例。化療前，108例患者的平均TAP聚合物面積為（88.4±20.0）μm2；與化療前比較，108例患者中化療后血清TAP水平升高30例，占27.78%，平均TAP聚合物面積為（104.7±16.3）μm2；與化療前比較，TAP水平降低78例，占72.22%，平均TAP聚合物面積為（52.1±10.6）μm2。

2.3 不同BRCA 1蛋白表達、化療后TAP水平變化患者的療效比較

BRCA1蛋白陽性表達患者的緩解率為34.48%（10/29），低于陰性表達患者的59.49%（47/79），差異有統計學意義（χ2=6.492，P＜0.05）（表1）。與化療前比較，化療后血清TAP水平升高患者的緩解率為10.00%（3/30），明顯低于TAP水平下降患者的69.23%（54/78），差異有統計學意義（χ2=30.499，P＜0.01）（表2）。

2.4 不同BRCA 1蛋白表達、化療后血清TAP水平變化患者的預后比較

隨訪1年，BRCA1蛋白陽性表達患者失訪0例，陰性表達患者失訪3例；TAP水平升高患者失訪0例，TAP水平降低患者失訪3例。BRCA1蛋白陽性表達患者的1年累積生存率為20.7%，低于陰性表達患者的43.0%，差異有統計學意義（χ2=4.543，P＜0.05）；BRCA1蛋白陽性表達患者的中位生存時間短于BRCA1蛋白陰性表達的患者，差異有統計學意義（P＜0.05）（圖1）。與化療前比較，化療后血清TAP水平升高的患者1年累積生存率為16.7%，明顯低于TAP水平降低患者的44.9%，差異有統計學意義（χ2=7.391，P＜0.01）；與化療前比較，化療后血清TAP水平升高患者的中位生存時間短于TAP水平降低的患者，差異有統計學意義（P＜0.05）（圖2）。

表1 不同BRCA 1蛋白表達患者的療效

表2 化療后不同血清TAP水平變化患者的療效

3 討論

圖1 BRCA 1蛋白陽性表達（n=29）與BRCA 1蛋白陰性表達（n=79）患者的 1年生存曲線

胃癌作為臨床常見的惡性腫瘤，其發病機制尚未明確，可能與抑癌基因失活相關。隨著腫瘤分子生物學的研究，學者認為基因的變化在胃癌的發生發展過程中發揮重要的作用，同時基因表達與胃癌的發病率、化療藥物敏感性、術后生存率密切相關[8]。

BRCA1是一個重要的抑癌基因，位于人染色體17a21，是由1863個氨基酸組成的蛋白質，在細胞周期DNA損傷修復過程中發揮重要的作用[9]。當BRCA1基因突變時會導致腫瘤細胞對DNA斷裂的化療藥物的敏感性增加，與鉑類的耐藥相關[10]。本研究108例晚期胃癌患者中BRCA1蛋白陽性表達29例，陰性表達79例；BRCA1蛋白陽性著色主要定位胃癌細胞的細胞核，呈淡黃色、黃色、棕色表達，提示BRCA1蛋白檢測在胃癌患者的篩查中可能具有重要的意義。

TAP是癌基因與抑癌基因突變后所表達的產物，是腫瘤細胞在新陳代謝過程中產生的異常蛋白與鈣組蛋白，在異常增生的腫瘤細胞中具有較高的表達水平[11]。當胃組織發生病理改變時，腫瘤細胞分泌大量的異常糖鏈糖蛋白，與鈣組蛋白相結合形成TAP，使TAP水平升高，因此，TAP可作為胃癌腫瘤增殖的特征[12]。化療的效果并不完全表現在腫瘤體積縮小，一般情況下影像學改變的時間晚于腫瘤活性改變。BRCA1、TAP作為敏感的腫瘤標志物，其表達水平在影像學出現變化前即可出現相關改變，可更好地為惡性腫瘤療效的判斷提供依據[13-14]。本研究發現，化療后BRCA1蛋白陽性表達患者的緩解率低于陰性表達患者（P＜0.05）；與化療前比較，血清TAP水平升高患者的緩解率明顯低于TAP水平下降的患者（P＜0.01）。BRCA1、TAP是近年來發現的新型腫瘤特異性檢測指標，與化療藥物的敏感性有一定的聯系，能夠更好地反映胃癌腫瘤細胞的數量及患者的病情，值得臨床應用。

文獻指出，臨床可根據腫瘤標志物的表達狀況判斷化療效果，病灶被控制時腫瘤標志物的表達水平降低，反之，則應盡快采取治療措施，避免延誤病情[15]。為進一步明確胃癌組織中BRCA1、TAP在化療預后評估中的作用，本研究隨訪觀察兩組患者化療后的生存率與生存時間，結果顯示，BRCA1蛋白陽性表達患者的1年累積生存率低于陰性表達患者（P＜0.05）；與化療前比較，化療后血清TAP水平升高患者的1年累積生存率明顯低于TAP水平降低的患者（P＜0.01）；BRCA1蛋白陽性表達患者的中位生存時間短于陰性表達患者（P＜0.05）；與化療前比較，化療后血清TAP水平升高患者的中位生存時間短于TAP水平降低的患者（P＜0.05），這提示BRCA1、TAP可作為胃癌輔助化療預后判斷的指標；檢測BRCA1、TAP水平，有利于胃癌患者化療方案的選擇，進而改善患者預后。

關于腫瘤標志物對胃癌診斷的報道較多，但對化療效果評價的報道較少。本研究的創新性在于通過分析BRCA1表達及TAP水平變化與療效及預后的關系，以具體的研究數據證實BRCA1、TAP在胃癌患者療效及預后評估中的作用，不僅有助于胃癌的早期診斷，還對化療療效評估均具有重要的指導意義。但因本研究樣本量有限，結論客觀性不足，仍需多樣本、多中心的研究，得出準確結論。

綜上所述，晚期胃癌患者的BACR1蛋白陽性表達情況及血清TAP水平與患者的療效及預后有關。