Th17/Treg細胞失衡與潰瘍性結腸炎患者疾病活動度及炎癥程度的關系

何智超 林楠 尹丕發

[摘要] 目的 研究Th17/Treg細胞失衡與潰瘍性結腸炎（UC）患者疾病活動度及炎癥程度的關系。 方法 選擇從2017年1月～2018年5月在云南省老年病醫院（以下簡稱“我院”）診治的UC患者93例進行研究，UC活動期者56例為活動期組，UC緩解期者37例為緩解期組。根據改良Mayo評分將活動期組劃分亞組：輕度組19例、中度組24例、重度組13例。另選取同期在我院進行健康體檢的40名志愿者作為對照組。檢測并比較各組Th17/Treg、C反應蛋白（CRP）、白細胞介素（IL）-10及IL-17水平，分析患者Th17、Treg細胞與疾病活動度及炎癥程度的關系。 結果 活動期組及緩解期組的Th17細胞比例及Th17/Treg水平較對照組高，且活動期組較緩解期組高（P < 0.05），活動期組的Treg細胞比例較對照組低（P < 0.05）。重度組的Th17/Treg水平較輕度組和中度組高，且Th17細胞比例較輕度組高（P < 0.05），Treg細胞比例較輕度組和中度組低（P < 0.05）。活動期組及緩解期組的CRP及IL-17水平較對照組高，且活動期組較緩解期組高（P < 0.05）。活動期組及緩解期組的IL-10水平較對照組低（P < 0.05）。重度組的CRP及IL-17水平較輕度組高，IL-10水平較輕度組低（P < 0.05），重度組的CRP水平較中度組高，且中度組較輕度組高（P < 0.05）。Pearson相關性分析結果，Th17細胞及Th17/Treg與疾病活動度、CRP及IL-17均呈正相關，與IL-10呈負相關（P < 0.05）。Treg細胞與疾病活動度、CRP及IL-17均呈負相關，與IL-10呈正相關（P < 0.05）。 結論 UC患者機體中Th17/Treg細胞失衡與其疾病活動度及炎癥程度之間存在密切關系，臨床上應盡可能地確保患者的Th17/Treg細胞平衡，從而有利于其病情防控。

[關鍵詞] Th17/Treg細胞失衡;潰瘍性結腸炎;疾病活動度;炎癥程度;關系

[中圖分類號] R574.6? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）02（b）-0130-04

[Abstract] Objective To study the relationship between the imbalance of Th17/Treg cells and the degree of disease activity and inflammation in patients with ulcerative colitis （UC）. Methods Ninety-three patients with UC from January 2017 to May 2018 admitted to Yunnan Geriatric Hospital （“our hospital” for short） were selected and studied. Among the patients， 56 cases in UC active period were as the active period group， 37 cases in remission period were as the remission period group. The active stage group was divided into subgroups according to the modified Mayo scoring： 19 cases in the mild group， 24 cases in the moderate group， and 13 cases in the severe group. Another 40 healthy volunteers undergoing physical examination in the same period were selected as the control group. The levels of Th17/Treg， C-reactive protein （CRP）， interleukin （IL）-10， IL-17 were detected and compared. Th17， Treg cells in each group were measured and the relationship between Th17， Treg cells and disease activity and inflammation was analyzed. Results The proportion of Th17 cells and the level of Th17/Treg in the active period group and the remission period group were significantly higher than the control group， and those in the active period group were significantly higher than the remission period group （P < 0.05）， and the proportion of Treg cells in the active period group was significantly lower than the control group （P < 0.05）. Th17/Treg level in the severe group was significantly higher than the mild group and moderate group， and the proportion of Th17 cells was significantly higher than the mild group （P < 0.05）. The proportion of Treg cells in the severe group was significantly lower than the mild group and moderate group （P < 0.05）. The CRP and IL-17 in the active period group and the remission period group were significantly higher than the control group， and the CRP and IL-17 in the active period group were significantly higher than the remission period group （P < 0.05）. The IL-10 in active period group and remission period group was significantly lower than the control group （P < 0.05）. The CRP and IL-17 in the severe group were significantly higher than the mild group （P < 0.05）. The CRP in the severe group was significantly higher than the mild group， and the CRP in the severe group was significantly higher than the mild group （P < 0.05）. According to Pearson correlation analysis method， the Th17 cells and Th17/Treg were positively correlated with disease activity and IL-17， and was negatively correlated with IL-10 （P < 0.05）. The Treg cells was negatively correlated with disease activity， CRP， IL-17 and positively correlated with IL-10 （P < 0.05）. Conclusion There is a close relationship between the imbalance of Th17/Treg cells and the degree of disease activity and inflammation in the patients with UC. The balance of Th17/Treg cells in patients with UC should be ensured as much as possible in clinic， which is beneficial to the prevention and control of the disease.

[Key words] Imbalance of Th17/Treg cells; Ulcerative colitis; Disease activity; Degree of inflammation; Relationship

潰瘍性結腸炎（UC）作為慢性遷延性的腸道炎性疾病，具有較高的復發性，患者的病灶大都局限在黏膜及黏膜下層區域，可累及直腸和乙狀結腸，造成腹瀉和黏液膿血便等癥狀，使患者產生較大的痛苦[1]。目前對于UC的發病機制仍未完全明確，臨床認為可能和免疫、感染及遺傳等諸多因素有關，其中免疫致病因素得到了較為廣泛的認可[2]。有報道指出，免疫細胞和UC的病情進展有一定關系，Th17細胞可通過分泌白細胞介素（IL）-17誘導腸道內的免疫反應，而Treg細胞的減少可能與UC發病有關，但相關研究并未作深入分析[3-4]。本研究通過探討Th17/Treg細胞失衡與UC疾病活動度以及炎癥程度之間的關系，旨在為臨床疾病的診治及防控提供參考依據，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年1月～2018年5月在云南省老年病醫院（以下簡稱“我院”）診治的UC患者93例進行研究。納入標準：①患者均符合《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見》[5]中關于UC的診斷標準;②年齡≥18歲;③患者均對本研究知情同意，并簽署了知情同意書。排除標準：①因腸道致病菌、真菌及結核分枝桿菌以及病毒等病原體引起的腸道感染者;②有其他免疫類疾病及感染性疾病者;③有血液疾病或惡性腫瘤者;④有心、肝、腎等臟器功能嚴重障礙者;⑤妊娠期或哺乳期婦女。93例患者中，處于活動期者56例，記為活動期組，根據改良Mayo評分劃分亞組：輕度組（3～5分）19例，中度組（6～10分）24例，重度組（11～12分）13例;緩解期者37例，記為緩解期組，另選同期在我院進行健康體檢的40名志愿者作為對照組。各組一般資料比較，差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性，見表1。本研究已通過醫院醫學倫理委員會的審核及批準。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器和試劑? （1）美國BD公司生產的Calibur流式細胞儀。（2）美國Thermo公司生產的酶標儀。（3）美國eBioscience公司生產的以下試劑：①抗人CD4-FITC;②CD25-APC;③Foxp3-PE;④CD3-APC;⑤CD8a-FITC;⑥IL-17A-PE抗體;⑦刺激阻斷劑;⑧固定破膜液。（4）C反應蛋白（CRP）、IL-17及IL-10的ELISA試劑盒購自深圳的晶美生物工程公司（批號：20161101）。

1.2.2 Th17細胞檢測? 為各組受試者采集其在空腹狀態下250 μL經肝素鈉抗凝的全血，添加250 μL 150 g/L胎牛血清型BPMI 1640及1 μL的刺激阻斷劑進行細胞重懸，置于5%CO2恒溫箱內培養約4 h。再取刺激后約100 μL的抗人CD8a-FITC和CD3-APC在4℃條件下行25 min的避光孵育，依次添加MEDIUM A、B液，在室溫下孵育約15 min，給予2次PBS液沖洗，再將抗人IL-17A-PE抗體在4℃條件下行25 min的避光孵育，給予PBS液沖洗后重懸待測。

1.2.3 Treg細胞檢測? 為各組受試者采集其在空腹狀態下100 μL經肝素鈉抗凝的全血，加入標記抗人CD4-FITC及CD25-APC在4℃條件下行25 min的避光孵育，再加進紅細胞裂解液，在室溫下放置10 min，以PBS液沖洗2次，再加入固定破膜液于4℃下避光放置1 h，給予2次PBS液沖洗，抗人Foxp3-PE在4℃條件下避光孵育約25 min，給予2次PBS液沖洗，通過流式細胞儀和Flowjo7.6軟件實施檢測分析。

1.2.4 CRP、IL-10及IL-17檢測? 為各組受試者采集其在空腹狀態下4 mL外周血，以12 cm的離心半徑給予10 min、3000 r/min的離心之后提取上清液，通過酶聯免疫法及相關試劑盒內的說明書描述步驟進行操作，記錄酶標儀下OD450讀數，并將OD值作為橫坐標，標準品濃度作為縱坐標，制作標準曲線，最終記錄CRP、IL-10及IL-17水平。

1.3 統計學方法

通過SPSS 21.0統計軟件對數據分析，計數資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，多組間比較選采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗。相關性分析采用Pearson法。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組Th17、Treg細胞比例比較

活動期組及緩解期組的Th17細胞比例及Th17/Treg水平較對照組高，且活動期組較緩解期組高，活動期組的Treg細胞比例較對照組低（P < 0.05）。重度組的Th17/Treg水平較輕度組和中度組高，且Th17細胞比例較輕度組高，Treg細胞比例較輕度組和中度組低（P < 0.05）。見表1。

2.2 各組CRP、IL-10及IL-17水平比較

活動期組及緩解期組的CRP及IL-17水平較對照組高，且活動期組較緩解期組高（P < 0.05）。活動期組及緩解期組的IL-10水平較對照組低（P < 0.05）。重度組的CRP及IL-17水平較輕度組高，IL-10水平較輕度組低，重度組的CRP水平較中度組高，且中度組CRP水平較輕度組高（P < 0.05）。見表2。

2.3 Th17、Treg細胞與疾病活動度及炎癥程度的關系

Pearson相關性分析結果提示，Th17細胞及Th17/Treg與疾病活動度、CRP及IL-17均呈正相關，與IL-10呈負相關（P < 0.05）。Treg細胞與疾病活動度、CRP及IL-17均呈負相關，與IL-10呈正相關（P < 0.05）。見表3。

3 討論

UC屬于一種慢性非特異型炎癥類疾病，患者通常會出現腹痛、腹瀉、黏液膿血便和里急后重等腸道癥狀，病灶區主要分布在大腸黏膜和黏膜下層，具有連續性及彌漫性特質，并可反復發作，對患者日常工作及生活具有較大危害[6-7]。以往此病在歐美等發達國家中的發病率較高，但近年來的臨床資料數據顯示，UC在我國的發病率也出現了逐漸升高的趨勢[8-9]。

目前，關于UC的發病機制仍不明確，但相關報道顯示其可能與機體的免疫異常等因素有關[10-11]。由于Th17細胞及Treg細胞在機體免疫功能的調節中具有重要作用，分析二者失衡與UC患者疾病活動度及炎癥程度的關系十分必要。

Th17細胞屬于輔助型T細胞，Treg細胞對機體內的免疫調節過程具有較為明顯的調節作用，二者能較好地反映機體內的免疫功能狀態。本研究顯示，UC患者存在一定程度的Th17/Treg細胞失衡，這種失衡狀態與疾病活動度有關，Th17細胞主要是通過原始的CD4+T細胞于IL-6及轉化生長因子-β1等物質的刺激下不斷分化形成的一類輔助型T細胞，其可通過強化細胞通透性、加速炎癥細胞的募集和活化，進而使UC患者的機體內出現炎性變化[12-13]。Treg細胞屬于一種T細胞亞群，具有免疫調節作用正常情況下，其可使得免疫系統能夠耐受自身成分，并使機體處于免疫穩態。在UC患者機體中，Treg細胞可發揮免疫抑制作用，其不僅能殺傷機體中的CD4+、CD8+T細胞及抗原遞呈細胞，而且可分泌出IL-10等細胞因子以及有細胞毒性的T細胞有關抗原4等物質而達到抑制免疫的作用[14-16]。同時，CRP、IL-17及IL-10均屬于炎性細胞因子，三者對機體內的炎性反應具有較好的指示性作用。本研究發現，UC患者機體中的CRP、IL-17水平有升高趨勢，但IL-10水平有下降趨勢，且三者指標的變化與病情有較大聯系。UC患者機體內炎癥狀態較為明顯，導致CRP這一敏感的炎癥指標水平不斷上升。Th17細胞所分泌出的IL-17屬于誘導機體內炎性反應的關鍵細胞因子，其可參與到炎癥的形成及宿主對細菌感染的防御過程，能夠引起組織浸潤及損傷[17-18]。適應性調節型T細胞所分泌的IL-10可降低機體中的炎性細胞因子水平，并對由T細胞所介導的有關免疫反應發揮抑制作用。本研究進一步根據Pearson相關性分析發現，Th17細胞及Th17/Treg與疾病活動度、CRP及IL-17均呈正相關，與IL-10呈負相關（P < 0.05）。Treg細胞與疾病活動度、CRP及IL-17均呈負相關，與IL-10呈正相關（P < 0.05），提示UC患者機體中的Th17/Treg細胞失衡與其疾病活動度以及炎癥程度具有明顯的關聯性。分析原因主要是因為Treg細胞減少能夠促使CD4+T細胞朝Th17細胞不斷分化，致使Th17細胞比例上升、功能亢進，強化了炎性細胞因子等分泌，最終產生炎性反應[19-20]。而Th17細胞增多后又可提升IL-17水平，但Treg細胞減少后又可降低IL-10水平，同時自身反應型T細胞逐漸被激活，而抑制性免疫細胞因子減少，此種變化又會導致腸道黏膜炎癥加重。因此，無論是Th17細胞增多，或是Treg細胞減少，臨床上均應確保Th17/Treg細胞平衡，可較好地預防UC發作。

綜上所述，UC患者機體中Th17/Treg細胞失衡與其疾病活動度及炎癥程度之間存在密切相關性，臨床上應盡可能地維持患者Th17/Treg細胞平衡，從而有利于病情防控。

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（收稿日期：2018-09-25? 本文編輯：金? ?虹）