無菌藥物生產環境中微生物的檢測及控制研究

摘要：無菌室是生產無菌藥物的主要場所。有效控制和檢測無菌藥物生產環境中的微生物含量是確保產品質量的重要指標。本文對無菌室微生物的種類及檢測以及如何對無菌環境滅菌消毒進行了綜述說明。

關鍵詞：無菌藥物;生產環境;微生物檢測;研究控制

引言

伴隨醫藥行業的迅猛發展，藥品的質量控制標準變得越來越嚴格，新版GMP標準的推出對無菌藥物的生產進行了更要級別的要求，GMP內容幾乎完全與歐盟GMP標準接軌，不僅對無菌生產潔凈級別提高了要求，同時對人員管理，生產質量管理等多方面進行要求。為此，本文主要對無菌室內微生物的控制和檢測進行描述，為正確維持無菌室的環境提供參考與借鑒。

1微生物的種類及檢測

按照微生物檢測內容可將無菌室微生物分為沉降菌、浮游菌、人員菌。在新版GMP要求下不同級別的潔凈區域內微生物檢測的限度標準如下：

1.1通過培養板中的自然沉降原理（通常使用90mm直徑的硼硅酸鹽玻璃培養皿，俗稱沉淀皿）沉淀細菌檢測空氣中收集的生物顆粒，經過一段時間后，讓其在可見下繁殖到可見合適的條件對菌落進行計數，并且通過平板培養皿中的菌落數確定清潔環境中存活微生物的數量，并評估潔凈室（區域）的清潔度。（1）取樣方法：將制備的培養皿放在預定的取樣點，打開培養皿蓋，將培養基表面暴露0.5小時，然后蓋上培養皿，然后翻轉，置32.5℃士2.5℃培養48h，取出檢查。（2）采樣點的布置：工作區采樣點位置離地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。

1.2浮游細菌檢測漂浮的細菌，即懸浮在空氣中的活微生物顆粒。該方法采用計數濃縮法，即將懸浮在空氣中的生物顆粒收集在特殊介質中，并使其在適當的生長條件下繁殖到可見的菌落中，計數一段時間，從而確定清潔的環境。每單位體積空氣中的活微生物數量用于評估潔凈室（區域）的清潔度。常用的收集儀器有“漂浮細菌空氣采樣器”。采樣方法及采樣點布置：采樣人員嚴格按照浮游菌空氣采樣器的操作規程進行采樣。工作區測點位置離地0.8m～1.5m左右;送風口測點位置離開送風面30cm左右;可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。為防止交叉污染，在不同級別的環境下建議配備專門的空氣采樣器，并定期用無塵抹布和消毒劑對空氣采樣器表面進行擦拭，保證期檢測數據真實可靠;在使用空氣采樣器采集浮游菌時，采集人員不要在儀器前走動，以免影響結果。安裝培養皿時手要在側面，不能放在培養皿的前方。

1.3人員菌的檢測人員菌的檢測主要為無菌室的工作人員進行更衣驗證及離開無菌室的工作人員進行的微生物檢測，即手部及潔凈服的不同部位進行取點檢測，經若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，并由菌落數量來反映工作人員在正常工作狀態下所攜帶的微生物數量。采樣方法及采樣位點：對無菌室工作的人員進行更衣驗證，取樣位點頭部、眼罩、腰部、手部、肘部、小腿等。手部檢測時，受測人員用手指輕按培養皿停留5秒鐘（五指平均分布于培養皿區域），雙手都要取樣;潔凈服的取樣點取樣時停留時間同樣要停留5秒鐘，然后押迅速蓋上平皿，送化驗室培養。

2無菌環境微生物數量的控制方法

2.1規范人員的衛生操作規程人員是無菌環境中最大的污染源，據有相關調查表明，在無菌藥品生產過程中，有70%的污染來自于人員。人體攜帶微生物的數目十分驚人，在沒有消毒的情況下，手部大約有1000～6000個微生物/cm2，一個噴嚏可以射出100000～1000000個微生物;健康人群站立不動也可以每分鐘向環境中散步100000個顆粒，移動時微粒數量會迅猛增加。

嚴格按照進入無菌室的穿衣規程穿戴潔凈服。生產過程中出現人員菌檢測不合格的工作人員應取消其進入無菌室的資格，并對其進行再次培訓，直到無菌檢測合格后方可恢復進入無菌室的資格;另外，要嚴格按照新版GMP對人員的要求，有效控制無菌室人員數量，并盡量避免人員在無菌室不必要的活動，減少人員對環境的污染。

2.2合理使用消毒劑無菌室內最普遍使用的消毒劑是75%的乙醇，另外常見的消毒劑還有70%異丙醇，酸性苯酚，堿性苯酚，殺孢子劑，新潔爾滅等，75%乙醇和70%異丙醇常作為人員及設備表面的消毒使用，堿性苯酚、酸性苯酚及殺孢子劑通常用于無菌環境地面的消毒。為防止微生物產生抗耐受性，通常將消毒劑周期性的交替使用，并保證其使用時限，例如在單周使用75%乙醇和酸性苯酚，而雙周則使用70%異丙醇和堿性苯酚。為減少人員菌的數量，工作人員要按照規定間歇性的對手掌用消毒劑消毒。

2.3無菌室的日常管理建立安全衛生值日制度，定期對無菌環境進行清潔，當設備和地面出現散落的藥物粉末或無菌水時，要及時用清理，并用消毒劑擦拭。一旦通風系統，墻壁，天花板，地板，門窗和普通媒體系統被發現損壞，及時報告并采取適當的維修措施，并及時記錄存檔。

2.4無菌環境消毒及設備的滅菌無菌環境的消毒常采用甲醛熏蒸的方法，為獲得最佳的消毒效果，在熏蒸前對無菌室噴灑適量的水以增加環境的空氣濕度，同時將無菌室內的物品以一定的空間角度擺放，以增加其表面積而使消毒更加徹底。設備滅菌使用高壓蒸汽滅菌法（121℃、30min），對反應釜設備多次脈動式抽真空，由于反應釜設備較大，一般會存在冷點（滅菌時反應釜溫度最低的位點），所以需要對反應釜設備安裝多個溫度探頭來確定滅菌溫度。設備冷點處溫度超過122℃并維持30分鐘蒸汽滅菌，保證設備滅菌效果。

3結語

微生物檢測是反映無菌環境無菌性的重要指標，但無菌環境的微生物數量控制絕不能依賴檢測，產品的無菌或其它質量特性也不能依賴于任何形式的檢驗及檢測結果，而是應該改善無菌環境衛生及工作人員的操作規范，將微生物的數量控制在根源處，從根本上提高無菌藥物的質量。

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