HPLC檢測中藥中非法添加化學降壓藥物

摘要：目的：了解中藥制劑中非法添加化學降壓藥物的現(xiàn)象，高效液相色譜法定性檢測中藥制劑可能含有10種非法添加的化學降壓藥物。方法：應用AgilentExtend-C18柱（250mm*4.6mm，5μm），0.02mol·L/1醋酸銨溶液為流動相A，甲醇-乙腈（2∶1）為流動相B，梯度洗脫，230nm檢測波長，30℃柱溫，1.0mL·min/1流速。結(jié)果：10種化學降壓藥物具有靈敏度，線性和檢測靈敏度。檢測限為0.01-13ng，連續(xù)5次進樣的色譜圖中各組分的保留時間RSDlt;0.1%。結(jié)論：高效液相色譜法檢測中藥中非法加入化學降壓藥物，簡便易行，重現(xiàn)性好。可以作為鑒別抗高血壓藥物的有效方法。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;中藥制劑;化學降壓藥物;非法添加

近年以來，純中藥的制劑及各類的保健品中，非法進行化學藥物添加的案例越多越多。降壓類的中藥制劑當中，添加了西藥成分的現(xiàn)象在這些案件中相對突出，這種不法行為為人們健康帶來極其嚴重的威脅。本研究通過對中藥的制劑中是否存在非法添加了化學降壓藥進行初步的篩查，選擇10種降壓藥物，應用梯度洗脫法對化學降壓藥進行分離的操作，結(jié)果顯示了該方法靈敏、簡便且重復性好，具體操作如下。

1高效液相色譜技術(shù)含義

高效液相色譜的主要流動相是液體，其使用高壓輸注系統(tǒng)向柱中添加混合溶劑和分離緩沖液。該方法可用于完成樣品檢驗。高效液相色譜可廣泛應用于化學，生物，醫(yī)藥，法律，商檢，環(huán)境檢測和生物化學等領(lǐng)域，其高靈敏度已受到檢測行業(yè)的廣泛贊譽。

2儀器與試藥

2.1儀器

高效液相色譜儀（Agilent1200），配液相四元泵、紫外光可變波長檢測器、控溫自動進樣器;高速離心機（TGL16G）;電子天平（MettlerAE200）;超聲波發(fā)生器（SB5200）。

2.2降壓藥的對照品

氯沙坦鉀片：（國藥準字H20070264，用量規(guī)格：50mg，浙江華海藥業(yè)股份有限公司）、厄貝沙坦片：（國藥準字H20030016，用量規(guī)格：150mg，浙江華海藥業(yè)股份有限公司）、硝苯地平片：（國藥準字H44023986，用量規(guī)格：10mg，廣東華南藥業(yè)集團有限公司）、酒石酸美托洛爾片：（國藥準字H32025390，用量規(guī)格：25mg，阿斯利康制藥有限公司）、鹽酸特拉唑嗪片：（國藥準字H20023659，用量規(guī)格：2mg，上海雅培制藥有限公司）、替米沙坦片：（國藥準字H20061185，用量規(guī)格：40mg，蘇州東瑞制藥有限公司）、鹽酸地爾硫片：（國藥準字H10880015，用量規(guī)格：30mg，上海信誼萬象藥業(yè)股份有限公司）、尼群地平片：（國藥準字H13022629，用量規(guī)格：10mg，石藥集團歐意藥業(yè)有限公司）、氫氯噻嗪片：（國藥準字H44023235，用量規(guī)格：25mg，三才石岐制藥股份有限公司）、吲達怕胺片：（國藥準字H44020885，用量規(guī)格：2.5mg，廣東安諾藥業(yè)股份有限公司）、均為市場購買，含量按標示的含量100%進行折算。

2.3試劑分析純試劑（醋酸銨）、純化水、色譜純?yōu)榧状寂c乙腈（Tedia，美國）。

2.4樣品采用珍菊降壓片（國藥準字Z20053333，規(guī)格：0.25g，含鹽酸可樂定0.03mg、氫氯噻嗪5mg蘆丁20mg，雷允上藥業(yè)有限公司）為市場購買。

3方法

3.1高效液相色譜條件設置應用C18色譜柱（250mm*4.6mm，5μm），0.02mol·L/1醋酸銨溶液為流動相A，甲醇-乙腈（2∶1）為流動相B，梯度洗脫，230nm檢測波長，30℃柱溫，1.0mL·min/1流速，進樣量控制2μL。

3.2制備對照液將10種獲得的對照藥研磨成粉，依次精密的稱取相當各對照的化合物10mg量，置于同一帶塞的錐形瓶，精準加入20mL甲醇，進行10min超聲后靜置，并進行高速離心10min，取離心后的上清液，獲得對照液以備用。

3.3樣品溶液的制備將珍菊抗高血壓片研磨成細粉，準確放入帶塞子的錐形瓶中，加入20mL甲醇，靜置10分鐘，然后高速離心10分鐘。獲得上清液以制備樣品液體。

4結(jié)果

4.1降壓藥峰面積線性結(jié)果

制備得對照液注入高效液相色譜儀當中進行分析。依據(jù)高效液相色譜條件設置，10種降壓藥化合物均得到很好的分離。對照液進行適量10倍稀釋，按高效液相色譜條件下依次進樣分析（2～10μL每2μL梯度進樣）。將10種降壓藥的進樣量峰面積線性回歸顯示，R=0.9994～0.9999，藥物該流動相系統(tǒng)穩(wěn)定，線性均呈現(xiàn)良好。

4.2檢測限

精密量取適量對照液，加甲醇逐級稀釋至不同濃度，按高效液相色譜條件設置進行測定，顯示在高效的液相色譜圖當中，各物質(zhì)的色譜峰信噪比（S/N）=10，研究的10種降壓藥物檢測限均處于0.01～13ng，表明HPLC檢測的靈敏性高。

討論

應用梯度洗脫程序，以甲醇、乙腈及緩沖鹽作為流動相。此系統(tǒng)可對10種降壓藥進行同時的分離。并采用不同色譜柱，各藥物分離結(jié)果各不同。在應用AgilentTC-C18柱分析HPLC的圖譜中觀察到了9個特征峰，其中，替米沙坦特征峰在圖譜中消失，因此AgilentTC-C18靈敏度低。而應用AgilentExtend-C18柱進行分析時，則10種藥的分離均良好，可選擇AgilentExtend-C18柱進行處理分析。另外，研究的10種降壓藥物檢測限均處于0.01～13ng，表明HPLC檢測的靈敏性高。

綜上所述，HPLC檢測中藥中非法添加化學降壓藥物簡單，靈敏，重現(xiàn)性好。可以作為鑒定抗高血壓藥物的有效方法。

參考文獻：

[1]鞏麗萍，田晨穎，郭常川，等.超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜快速篩查及定量分析中成藥或保健品中非法添加的24種消炎止痛類化學成分[J].中國藥學雜志，2015，50（24）：2154-2159.

[2]林偉杰，梁祈，詹若挺.止咳平喘類中成藥中9種非法添加化學成分的定性定量檢驗方法研究[J].廣州中醫(yī)藥大學學報，2017，34（3）：418-423.