辣木葉粉免疫功能研究

摘要：本品探討了辣木葉粉對(duì)小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫的影響，為辣木葉用于免疫低下疾病防治及相關(guān)功能食品開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)中，1.00g/kg·bw/d組加ConA孔與不加ConA孔吸光度的差值高于0g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）;DNFB誘導(dǎo)小鼠DTH試驗(yàn)中，1.00g/kg·bw/d組耳殼增重高于0g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。抗體生成細(xì)胞檢測(cè)試驗(yàn)中，0.17g/kg·bw/d、0.33g/kg·bw/d、1.00g/kg·bw/d 組小鼠溶血空斑數(shù)與0g/kg·bw/d組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）;小鼠血清半數(shù)溶血值試驗(yàn)中，0.33g/kg·bw/d、1./00g/kg·bw/d組小鼠血清半數(shù)溶血值（HC50）高于0g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。表明辣木葉粉具有增強(qiáng)小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫功能。

關(guān)鍵詞：辣木葉粉;細(xì)胞免疫;體液免疫

辣木為辣木亞目辣木科辣木屬植物，又名鼓槌樹(shù)，是多年生熱帶亞熱帶落葉喬木，其根具辛辣味，因而得名辣木[1]。辣木是印度和非洲當(dāng)?shù)鼐用竦囊环N食物，也是治療多種疾病的傳統(tǒng)藥材，根據(jù)印度醫(yī)學(xué)認(rèn)為，其根、樹(shù)皮、莢和葉可用于多種疾病的防治[2]。現(xiàn)代研究認(rèn)為，辣木富含蛋白質(zhì)、維生素、氨基酸及微量元素等營(yíng)養(yǎng)成分，此外，還含多種具有生物活性的糖苷類(lèi)、酚酸類(lèi)和黃酮類(lèi)等化合物[3]。本品探討了辣木葉粉對(duì)小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫的影響，為辣木葉用于免疫低下疾病防治及相關(guān)功能食品開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)分組及處理

隨機(jī)選取SPF級(jí)CI/F1代健康雌性小鼠，體重為19.0～21.9g，分四組。受試物為辣木葉粉，人體推薦量日用量是2g。設(shè)0.17g/kg·bw/d、0.33g/kg·bw/d、1.00g/kg·bw/d三個(gè)劑量組（分別相當(dāng)于受試樣品人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍），另設(shè)0g/kg·bw/d組以無(wú)菌水代替受試物。受試樣品用無(wú)菌水配制，低、中、高劑量配制濃度分別為17mg/mL、33mg/mL、100mg/mL，經(jīng)口每日一次給予小鼠相應(yīng)劑量的受試物，小鼠灌胃量為0.1mL/10g·bw。連續(xù)灌胃一個(gè)月后測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)

處死動(dòng)物，取脾，置于小平皿中，研磨脾臟，制成細(xì)胞懸液，過(guò)濾，離心，將細(xì)胞懸浮于完全培養(yǎng)液中。將細(xì)胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7mL，加入不含小牛血清的培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT（5mg/mL）50μL/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1mL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。將溶解液移入96孔培養(yǎng)板中，每孔做三個(gè)平行孔，用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)570nm下測(cè)定各孔吸光度值。

1.2.2DNFB誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）

每鼠用剃毛機(jī)將腹部的毛剃去，用10mg/mL DNFB 溶液50μL均勻涂抹致敏。5日后用10mg/mL DNFB溶液10μL 均勻涂抹于小鼠右耳（兩面）進(jìn)行攻擊，攻擊后24h頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下直徑8mm耳片，稱重。

1.2.3抗體生成細(xì)胞檢測(cè)

每只鼠腹腔注射2%的SRBC懸液進(jìn)行免疫，4d后處死，取出脾臟，放在盛有無(wú)菌Hank’s液的小平皿中，研磨脾臟，制成細(xì)胞懸液，過(guò)濾，離心將細(xì)胞懸浮于培養(yǎng)液中。將表層培養(yǎng)基加熱溶解后，保溫，與等量的Hank’s液混合，分裝小試管，向管內(nèi)加10% SRBC50μL，25μL脾細(xì)胞懸液，迅速混勻，傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上，做二個(gè)平行片，待瓊脂凝固后，放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育1.5h，然后將制備好的補(bǔ)體稀釋后加入到玻片架凹槽內(nèi)，繼續(xù)孵育1.5h后，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。

1.2.4血清溶血素測(cè)定

每只鼠腹腔注射0.2mL進(jìn)行免疫，4d后小鼠眼底靜脈叢取血于離心管內(nèi)，放置1h，離心10min，分離并收集血清。血清200倍稀釋后，按檢驗(yàn)方法測(cè)定樣品管及SRBC半數(shù)溶血時(shí)的光密度值。溶血素的量以半數(shù)溶血值（HC50）表示。

1.4 結(jié)果

試驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物飲水?dāng)z食正常，外觀無(wú)異常。與0g/kg·bw/d組比較，各劑量組小鼠試驗(yàn)前后體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。

1.4.1辣木葉粉對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響

由表1結(jié)果可見(jiàn)，1.00g/kg·bw/d組加ConA孔與不加ConA孔吸光度的差值高于0g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。

1.4.2辣木葉粉對(duì)DNFB誘導(dǎo)小鼠DTH的影響

由表2結(jié)果可見(jiàn)，1.00g/kg·bw/d組耳殼增重高于0g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。

1.4.3辣木葉粉對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞的影響

由表3結(jié)果可見(jiàn)，0.17g/kg·bw/d、0.33g/kg·bw/d、1.00g/kg·bw/d 組小鼠溶血空斑數(shù)與0g/kg·bw/d組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。

1.4.4辣木葉粉對(duì)小鼠血清半數(shù)溶血值（HC50）的影響

由表4結(jié)果可見(jiàn)，0.33g/kg·bw/d、1.00g/kg·bw/d組小鼠血清半數(shù)溶血值（HC50）高于0g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。

1.5 討論

試驗(yàn)結(jié)果顯示，ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)中，1.00g/kg·bw/d組加ConA孔與不加ConA孔吸光度的差值高于0g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）;DNFB誘導(dǎo)小鼠DTH試驗(yàn)中，1.00g/kg·bw/d組耳殼增重高于0g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。抗體生成細(xì)胞檢測(cè)試驗(yàn)中，0.17g/kg·bw/d、0.33g/kg·bw/d、1.00g/kg·bw/d 組小鼠溶血空斑數(shù)與0g/kg·bw/d組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）;小鼠血清半數(shù)溶血值試驗(yàn)中，0.33g/kg·bw/d、1./00g/kg·bw/d組小鼠血清半數(shù)溶血值（HC50）高于0g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。表明辣木葉粉具有增強(qiáng)小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫功能。

參考文獻(xiàn)：

[1]Tian Y，Zeng Y，Zhang J，et al.High quality reference genome of drumstick tree（Moringa oleifera Lam.），a potential perennial crop[J].Sci China Life Sci.2015，7：627.

[2]任廣旭，伊素芹，張鴻儒，等.辣木功效的研究現(xiàn)狀[J].食品研究與開(kāi)發(fā).2016，37（16）：219.

[3]孔令鈺，賀艷培，陶遵威，等.辣木生物活性的研究進(jìn)展[J].天津藥學(xué).2015（2）：57.