自動化檢測ELISA質控對照優化設置探討

摘要：經過二十多年的發展， ELISA檢測早已從手工加樣和檢測發展為自動化加樣和檢測。但是不論是進口試劑還是國產試劑質控對照的設置卻和二十多年前的手工檢測一樣，只能夠反映檢測條件的有效性，而不能夠反映自動化檢測過程的有效性，因此有必要優化質控對照的設置，以適應自動化檢測的需要。

關鍵詞：血液檢測;自動化;酶聯免疫吸附試驗（ELISA）;質控對照

檢測條件的有效性主要是指檢測過程中的時間、溫度、試劑分配和加樣量是否符合試劑說明書的要求，判斷標準為陽性對照大于某OD值，陰性對照小于某OD值，空白對照小于某OD值，以及為判斷該次檢測是否在控的標定濃度室內質控品的OD值檢測情況。目前ELISA試劑的質控對照設置可以反映上述指標有效性。

檢測過程的有效性主要是指ELISA檢測板96個檢測孔是否從第一孔到第96孔都加到了規定的試劑，所加試劑的量是否足夠。目前ELISA試劑的質控對照設置只能證明第一排的質控對照加到了規定的試劑，但從第二排到第十二排的試劑分配是否完成卻不能得到驗證，不能反映檢測過程的有效性。

以下以本檢驗科使用的8種ELISA試劑的質控對照設置為例，對質控對照的優化進行探討。

目前本檢驗科共使用3種進口ELISA試劑，5種國產ELISA試劑，從設置位置可以看出8種試劑的質控對照都位于第一排。在自動化檢測中試劑分配是按第一排到十二排的順序進行分配，位于第一排的質控對照對照肯定首先分配到試劑，但位于第二排到第十二排的樣本檢測孔是否分配到足量的試劑是沒有得到驗證的。如果由于分配器的氣密性下降或試劑量準備偏少導致分配器上部有氣泡，將會導致最后幾個檢測孔沒有加到試劑或所加試劑量不足。當檢測結束后，我們用肉眼對微板進行觀察，國產試劑由于本底很低，陰性結果呈透明無色狀，如果有少加或漏加試劑，肉眼是無法分辨的，而位于第一排的PC、NC、QC都顯示為正常。進口試劑本底較深，如果漏加顯色劑可以肉眼發現，但是漏加或少加酶試劑同樣無法用肉眼發現。因此存在漏檢樣本的風險。

在檢測中碰到這樣的情況后，我們就思考是否可以優化質控對照的設置，使其既可以對檢測條件的有效性進行驗證，也可以對檢測過程的有效性進行驗證。我們對8種ELISA試劑質控對照的優化設置如下：

我們的優化思路是將原來設置有2孔或3孔陽性對照的試劑，分出一孔設置到微板尾部最后一孔處，有四個國產試劑和一個進口試劑這樣優化設置。如果該試劑原來只設置了一孔陽性對照，則將臨界值的質控對照設置到板尾最后一孔。這樣設置質控對照后，如果位于第一孔和最后一孔的陽性對照或臨界值質控對照都符合要求，可以認為位于它們之間的每一個檢測孔都足量的加到了規定的試劑，那么不僅可以證明檢測條件的有效性，同時也可以證明整個檢測過程的有效性。該優化方案沒有增加對照孔數，沒有增加檢測成本，只是改變了設置的位置。

該優化方案中以國產試劑HBsAg2、抗-HCV2、抗-TP2優化為佳，第一孔和最后一孔都為相同的陽性對照，這樣可以直觀的判斷兩孔陽性對照的檢測值是否一致。如果檢測值不一致，則需判斷該差別是否在可接受范圍;如果該差別不能接受，則需查找原因。如果最后一孔未能檢出，可以認為檢測過程有問題，需查找是因為酶試劑沒有加到還是顯色劑沒有加到，或者其他的原因。

該優化方案中的抗-HIV1進口試劑是將三個不同的陽性對照中的第三種優化到最后一孔，這樣它就不能和第一孔的陽性對照檢測值進行對比，只能和自己以前的檢測值進行對比。但只要檢測結果符合說明書要求就可認為檢測過程有效。

該優化方案中的HBsAg1、抗-HCV1、抗-TP1由于說明書只要求設置一孔陽性對照，因此是把臨界值質控品優化到最后一孔。這樣設置除了不能和第一孔陽性對照的檢測值進行對比外，還存在臨界值質控對照的信息處理問題。現在實驗室都用LIS系統進行質控信息的處理，目前的軟件都是對固定位置的質控信息進行判斷處理，而不能對變化位置的質控信息進行處理，因此該方案不能被現在的LIS系統接受。這三種試劑的優化需要對說明書的質控對照設置進行修改來解決這個問題，HBsAg1和抗-HCV1原設置為1陽2陰可改為2陽1陰，抗-TP1原設置為1陽3陰可改為2陽2陰，這樣就可把一孔陽性對照設置到最后一孔而把臨界值質控品設置到第一排的固定位置，總的質控對照孔數未變，不增加檢測成本。

綜上所述，目前ELISA試劑的質控對照設置在自動化檢測條件下不能對檢測過程進行驗證，存在漏檢樣本的風險，在自動化檢測ELISA時需要對檢測條件的有效性和檢測過程的有效性進行驗證，通過優化質控對照的設置，分別在第一孔和最后一孔設置陽性對照，可以實現對檢測條件和檢測過程的有效性進行驗證，使ELISA檢測的有效性驗證更加科學合理。

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