自動(dòng)化檢測(cè)ELISA質(zhì)控對(duì)照優(yōu)化設(shè)置探討

摘要：經(jīng)過(guò)二十多年的發(fā)展， ELISA檢測(cè)早已從手工加樣和檢測(cè)發(fā)展為自動(dòng)化加樣和檢測(cè)。但是不論是進(jìn)口試劑還是國(guó)產(chǎn)試劑質(zhì)控對(duì)照的設(shè)置卻和二十多年前的手工檢測(cè)一樣，只能夠反映檢測(cè)條件的有效性，而不能夠反映自動(dòng)化檢測(cè)過(guò)程的有效性，因此有必要優(yōu)化質(zhì)控對(duì)照的設(shè)置，以適應(yīng)自動(dòng)化檢測(cè)的需要。

關(guān)鍵詞：血液檢測(cè);自動(dòng)化;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）;質(zhì)控對(duì)照

檢測(cè)條件的有效性主要是指檢測(cè)過(guò)程中的時(shí)間、溫度、試劑分配和加樣量是否符合試劑說(shuō)明書(shū)的要求，判斷標(biāo)準(zhǔn)為陽(yáng)性對(duì)照大于某OD值，陰性對(duì)照小于某OD值，空白對(duì)照小于某OD值，以及為判斷該次檢測(cè)是否在控的標(biāo)定濃度室內(nèi)質(zhì)控品的OD值檢測(cè)情況。目前ELISA試劑的質(zhì)控對(duì)照設(shè)置可以反映上述指標(biāo)有效性。

檢測(cè)過(guò)程的有效性主要是指ELISA檢測(cè)板96個(gè)檢測(cè)孔是否從第一孔到第96孔都加到了規(guī)定的試劑，所加試劑的量是否足夠。目前ELISA試劑的質(zhì)控對(duì)照設(shè)置只能證明第一排的質(zhì)控對(duì)照加到了規(guī)定的試劑，但從第二排到第十二排的試劑分配是否完成卻不能得到驗(yàn)證，不能反映檢測(cè)過(guò)程的有效性。

以下以本檢驗(yàn)科使用的8種ELISA試劑的質(zhì)控對(duì)照設(shè)置為例，對(duì)質(zhì)控對(duì)照的優(yōu)化進(jìn)行探討。

目前本檢驗(yàn)科共使用3種進(jìn)口ELISA試劑，5種國(guó)產(chǎn)ELISA試劑，從設(shè)置位置可以看出8種試劑的質(zhì)控對(duì)照都位于第一排。在自動(dòng)化檢測(cè)中試劑分配是按第一排到十二排的順序進(jìn)行分配，位于第一排的質(zhì)控對(duì)照對(duì)照肯定首先分配到試劑，但位于第二排到第十二排的樣本檢測(cè)孔是否分配到足量的試劑是沒(méi)有得到驗(yàn)證的。如果由于分配器的氣密性下降或試劑量準(zhǔn)備偏少導(dǎo)致分配器上部有氣泡，將會(huì)導(dǎo)致最后幾個(gè)檢測(cè)孔沒(méi)有加到試劑或所加試劑量不足。當(dāng)檢測(cè)結(jié)束后，我們用肉眼對(duì)微板進(jìn)行觀(guān)察，國(guó)產(chǎn)試劑由于本底很低，陰性結(jié)果呈透明無(wú)色狀，如果有少加或漏加試劑，肉眼是無(wú)法分辨的，而位于第一排的PC、NC、QC都顯示為正常。進(jìn)口試劑本底較深，如果漏加顯色劑可以肉眼發(fā)現(xiàn)，但是漏加或少加酶試劑同樣無(wú)法用肉眼發(fā)現(xiàn)。因此存在漏檢樣本的風(fēng)險(xiǎn)。

在檢測(cè)中碰到這樣的情況后，我們就思考是否可以?xún)?yōu)化質(zhì)控對(duì)照的設(shè)置，使其既可以對(duì)檢測(cè)條件的有效性進(jìn)行驗(yàn)證，也可以對(duì)檢測(cè)過(guò)程的有效性進(jìn)行驗(yàn)證。我們對(duì)8種ELISA試劑質(zhì)控對(duì)照的優(yōu)化設(shè)置如下：

我們的優(yōu)化思路是將原來(lái)設(shè)置有2孔或3孔陽(yáng)性對(duì)照的試劑，分出一孔設(shè)置到微板尾部最后一孔處，有四個(gè)國(guó)產(chǎn)試劑和一個(gè)進(jìn)口試劑這樣優(yōu)化設(shè)置。如果該試劑原來(lái)只設(shè)置了一孔陽(yáng)性對(duì)照，則將臨界值的質(zhì)控對(duì)照設(shè)置到板尾最后一孔。這樣設(shè)置質(zhì)控對(duì)照后，如果位于第一孔和最后一孔的陽(yáng)性對(duì)照或臨界值質(zhì)控對(duì)照都符合要求，可以認(rèn)為位于它們之間的每一個(gè)檢測(cè)孔都足量的加到了規(guī)定的試劑，那么不僅可以證明檢測(cè)條件的有效性，同時(shí)也可以證明整個(gè)檢測(cè)過(guò)程的有效性。該優(yōu)化方案沒(méi)有增加對(duì)照孔數(shù)，沒(méi)有增加檢測(cè)成本，只是改變了設(shè)置的位置。

該優(yōu)化方案中以國(guó)產(chǎn)試劑HBsAg2、抗-HCV2、抗-TP2優(yōu)化為佳，第一孔和最后一孔都為相同的陽(yáng)性對(duì)照，這樣可以直觀(guān)的判斷兩孔陽(yáng)性對(duì)照的檢測(cè)值是否一致。如果檢測(cè)值不一致，則需判斷該差別是否在可接受范圍;如果該差別不能接受，則需查找原因。如果最后一孔未能檢出，可以認(rèn)為檢測(cè)過(guò)程有問(wèn)題，需查找是因?yàn)槊冈噭](méi)有加到還是顯色劑沒(méi)有加到，或者其他的原因。

該優(yōu)化方案中的抗-HIV1進(jìn)口試劑是將三個(gè)不同的陽(yáng)性對(duì)照中的第三種優(yōu)化到最后一孔，這樣它就不能和第一孔的陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)值進(jìn)行對(duì)比，只能和自己以前的檢測(cè)值進(jìn)行對(duì)比。但只要檢測(cè)結(jié)果符合說(shuō)明書(shū)要求就可認(rèn)為檢測(cè)過(guò)程有效。

該優(yōu)化方案中的HBsAg1、抗-HCV1、抗-TP1由于說(shuō)明書(shū)只要求設(shè)置一孔陽(yáng)性對(duì)照，因此是把臨界值質(zhì)控品優(yōu)化到最后一孔。這樣設(shè)置除了不能和第一孔陽(yáng)性對(duì)照的檢測(cè)值進(jìn)行對(duì)比外，還存在臨界值質(zhì)控對(duì)照的信息處理問(wèn)題。現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室都用LIS系統(tǒng)進(jìn)行質(zhì)控信息的處理，目前的軟件都是對(duì)固定位置的質(zhì)控信息進(jìn)行判斷處理，而不能對(duì)變化位置的質(zhì)控信息進(jìn)行處理，因此該方案不能被現(xiàn)在的LIS系統(tǒng)接受。這三種試劑的優(yōu)化需要對(duì)說(shuō)明書(shū)的質(zhì)控對(duì)照設(shè)置進(jìn)行修改來(lái)解決這個(gè)問(wèn)題，HBsAg1和抗-HCV1原設(shè)置為1陽(yáng)2陰可改為2陽(yáng)1陰，抗-TP1原設(shè)置為1陽(yáng)3陰可改為2陽(yáng)2陰，這樣就可把一孔陽(yáng)性對(duì)照設(shè)置到最后一孔而把臨界值質(zhì)控品設(shè)置到第一排的固定位置，總的質(zhì)控對(duì)照孔數(shù)未變，不增加檢測(cè)成本。

綜上所述，目前ELISA試劑的質(zhì)控對(duì)照設(shè)置在自動(dòng)化檢測(cè)條件下不能對(duì)檢測(cè)過(guò)程進(jìn)行驗(yàn)證，存在漏檢樣本的風(fēng)險(xiǎn)，在自動(dòng)化檢測(cè)ELISA時(shí)需要對(duì)檢測(cè)條件的有效性和檢測(cè)過(guò)程的有效性進(jìn)行驗(yàn)證，通過(guò)優(yōu)化質(zhì)控對(duì)照的設(shè)置，分別在第一孔和最后一孔設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)條件和檢測(cè)過(guò)程的有效性進(jìn)行驗(yàn)證，使ELISA檢測(cè)的有效性驗(yàn)證更加科學(xué)合理。

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