發酵液中正己醇含量的檢測方法

郭 艷，廖勤儉，王 芳，周韓玲，安明哲，李楊華

(四川宜賓五糧液股份有限公司，四川宜賓644007)

正己醇是濃香型白酒中一種微量成分物質，俗稱“雜醇油”，具有強烈的、特殊的刺激性氣味。窖池中酒醅的發酵，形成了濃香型白酒與眾不同的成分構成和風味特征[1]，各種微量成分物質對白酒的風格形成和風格典型性起著至關重要的作用[2]。當白酒中正己醇含量超出一定范圍時，白酒會呈現出一種令人不悅的滋味，對人體有一定的毒害作用[3]。研究人員有對雜醇油進行過相關研究，但是專門針對正己醇的研究卻鮮有報道。本實驗研究了一種檢測發酵液中正己醇的檢測方法，可以通過氣相色譜快速檢測出發酵液中正己醇的含量，對探究白酒中正己醇的產生機理具有十分重要的意義。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

原料：窖泥、黃水，取自某濃香型酒廠。

試劑：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、無機鹽、碳酸鈉等。

培養基：細菌完全培養基。

正己醇標準品的配制：準確稱取色譜級正己醇，以無水乙醇配制成100 mL濃度為10 g/L的標準儲備液，放置于4℃冰箱中冷藏，備用。

儀器設備：美國Agilent公司6890氣相色譜，FID檢測器。

1.2 試驗方法

1.2.1 發酵液培養方法

配制200 mL細菌完全培養基于500 mL三角瓶中，稱取適量底層窖泥加入其中，將三角瓶置于30℃恒溫培養箱中培養4 d。待菌液培養成熟后，將種子培養液如此重復培養3次，即為己醇發酵液。

圖1 正己醇標樣圖譜

1.2.2 色譜條件

色譜柱條件：色譜柱：HP-INNOWax Agilent30×0.25×0.25；進樣口溫度250℃；檢測器（氫焰離子化檢測器）溫度250℃；柱流速：恒流1.0 mL/min；分流模式：20∶1；進樣量：1 μL；柱溫程序升溫：（HP-INNOWax Agilent）40 ℃（保持7 min），以7 ℃/min升溫至100℃（保持2 min），再以30℃/min升溫至180 ℃（保持1 min）。

1.2.3 樣品前處理

取發酵液5 mL于20 mL離心管中，加入5 mL萃取劑進行萃取，振蕩15 min后再靜置15 min，然后于離心機中以5000 r/min離心5 min，下層萃取液經過0.2 μm的膜過濾后，待測。

1.2.4 萃取劑的選擇

取5支20 mL的離心管，向每支試管中加入5 mL空白培養基和10 μL的10 g/L正己醇標準溶液，再分別加入5 mL二氯甲烷、正己烷、甲苯、石油醚，振蕩過濾后待測。

2 結果與分析

2.1 標樣的檢測及樣品萃取劑的確定

取10 g/L的標準儲備液，用無水乙醇稀釋至200 mg/L進行定性檢測，標準品的氣相色譜圖見圖1。己醇的出峰時間在15.845 min左右。

用不同萃取劑萃取后的檢測結果見表1。由于二氯甲烷萃取后的正己醇測定值最高，說明二氯甲烷對正己醇的萃取效果最好，所以選擇二氯甲烷為發酵液的萃取劑。

表1 不同萃取劑檢測結果

2.2 標準曲線及線性范圍

取10 g/L的正己醇標準溶液，用60%vol乙醇稀釋至20mg/L、60mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L、300 mg/L共6個梯度制作定量標準曲線。以峰面積Y為縱坐標，以質量濃度(mg/L)為X橫坐標進行線性回歸，結果見圖2。結果表明，化合物線性關系良好，回歸方程為y=0.2511x+0.0448，R2值為0.9999，滿足分析要求。根據3倍信噪比計算出化合物的定量檢出限為2.5 mg/L。

圖2 正己醇標準曲線圖

2.3 精密度實驗

用上述試驗方法對同一樣品測定6次，得到的正己醇發酵液經前處理后的待測樣品中正己醇含量的檢測結果見表2，6次平行結果的相對偏差(RSD)為0.92%，滿足分析要求。

2.4 加標回收率實驗

表2 精密度實驗結果(n=6)

取同一三角瓶中的發酵液4份，其中1份作為空白本底值，另外3份分別加入已知量的標準溶液，把4份處理后的樣品進行樣品前處理，再按上述實驗方法檢測后進行回收率的計算。表3中數據為處理后樣品及加標處理后樣品的測定值。實驗結果表明，發酵液中正己醇的回收率為97.27%～103.72%，滿足分析要求。

表3 回收率實驗結果

3 結論

該方法能快速準確地分析發酵液中的正己醇含量。發酵液樣品只需要簡單的萃取就能進樣分析，R2值、檢測的精密度、加標回收率等各項指標均達到分析要求。

該方法還可以檢測濃香型白酒釀造副產物黃水中的正己醇，對研究黃水的綜合利用有重要意義。