高效液相色譜分析法測定食品中5種防腐劑和甜味劑

蔡小欽 譚珊 李紅麗 吳曉琴

本次研究中對食品中5種添加劑采用液相色譜法檢測，重點分析色譜條件和其檢測結果相關性，并構建食品添加劑檢測方法。在本次研究中發現：液相色譜法的應用，能夠同時實現食品中的山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸、糖精鈉、安賽蜜的同時檢測。測定條件：色譜柱ZORBAX SB- C18柱分離，甲醇∶0.02 mol/L乙酸銨溶液=5∶95為流動相，流速1.0 mL/min，紫外檢測波長為230 nm。5種添加劑為400 μg/mL時相關性良好。最小檢出限介于0.196～1.452 mg/kg。相對標準偏差<5%，回收率>90%，該方法檢測快捷高效，便于檢測人員對食品中5種添加劑含量情況作出快速判斷。

檢測實驗

實驗材料與實驗方法

（1）實驗材料：①實驗原料為市售飲料、調味品等。②實驗儀器包括安捷倫1260高效液相色譜儀，自動進樣器，PURELAB flex超純水機，高速冷凍離心機，超聲波清洗儀。③主要試劑包括甲醇、乙酸銨、乙酸鋅、亞鐵氰化鉀。標本為苯甲酸、糖精鈉、山梨酸、脫氫乙酸（生產廠家德國Dr.Ehrenstorfer GmbH，純度=99.9%），安賽蜜（生產廠家德國Dr.Ehrenstorfer GmbH，純度=99%）。相關檢測中的5種添加劑檢出限分別為：山梨酸線性方程Y=105.276 6X+33.575 0，檢出限為0.42 mg/kg；脫氫乙酸線性方程Y=104.225X+58.798 8，檢出限為0.78 mg/ kg；糖精鈉線性方程Y=67.225X+29.665 6，檢出限為0.65 mg/kg；安賽蜜線性方程Y=38.554 7X+58.224 5，檢出限為0.67 mg/kg；苯甲酸線性方程Y=25.667 1X+103.225 0，檢出限為0.50 mg/kg。

（2）標準溶液配制：①脫氫乙酸標準溶液。稱取脫氫乙酸標準品0.101 0 g，以NaOH溶液（20 g/L）溶解，得到濃度為1.0 mg/mL的脫氫乙酸標準溶液。②混合標準溶液。將含苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉等添加劑的溶液稀釋配制成待用混合標準溶液。③亞鐵氰化鉀溶液。準備樣品，選取106 g亞鐵氰化鉀，放置在1 000 mL容量瓶中。④乙酸鋅溶液。質量為220g，再將其進行稱取之后放置在1 000 mL容量瓶中。⑤乙酸銨溶液。質量為1.54 g，轉移至1 000 mL溶液瓶中，對其實施經抽濾超聲波脫氣，以備使用。

（3）色譜條件：色譜柱選取的是ZORBAX SB- C18柱，柱溫設置為30 ℃，檢測選用230nm波長，在實驗過程中選取甲醇- 0.02 mol/L乙酸銨溶液為流動相。檢測中的選取樣品10 μL為進樣量。

（4）樣品前處理：檢測中的樣品質量為5g，并將其放置在小燒杯中，并向容量為50mL瓶中進行轉移。在對燒杯連續進行3次清洗之后，放置到容量瓶中，檢測過程中將亞鐵氰化鉀和乙酸鋅一一加入，加入質量為3mL，離心處理，吸取上清液濾膜后等待檢測。

（5）定性定量方法：稀釋配置配制完成的5種添加劑混合標準溶液，結合設計需求稀釋到相應的濃度。檢測中從出峰時間實現定性，在標準曲線制作中，橫坐標為標準品濃度，縱坐標為峰面積，目標樣品物計算含量為5g。

實驗方法

（1）色譜柱的選擇：本次研究重點分析ZORBA× SB- C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）液相色譜柱，ZORBA× SB- C18（5μm，4.6 mm×150 mm）液相色譜柱的分析時間長，以上色譜柱的長度不足，檢測5種添加劑分離性不夠完善。最終在檢測中確定色譜柱長ZORBA×SB- C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm），等待檢測。

（2）加標回收實驗精密度：檢測對象選取的市場上的糕點以及飲料，對其實施加標回收實驗。液相色譜檢測中全部得到良好的回收率，相對標準偏差（n=6）值全部在7%以下。不但具有一定精密度，同時適用范圍也比較廣泛。

（3）基質適用性分析：本次檢測中選用的是市售飲料等典型食品樣品，同時檢測以上樣品中的甜味劑以及防腐劑。

實驗討論

首先確定分層提取中的目標分析物分配系數，以能夠保障在液萃取中回收率良好。防腐劑和甜味劑標準品混合溶液需要在檢測過程中加入在互相不溶的溶劑中，對其防腐劑含量采用液相色譜法檢測，得到了溶液中的分析物濃度比，實現對目標分析物中防腐劑及甜味劑的估算以及分配。對于食品基質中的蛋白質雜志采用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液進行清除，對檢測結果沒有太大影響力。

在本次實驗檢測過程中，可以對食品中不同的甜味劑和防腐劑實現同時檢測。在檢測過程中對目標物采用液相色譜法，在應用中檢測食品具體較高應用范圍，不但具有一定經濟性，而且高效安全，可以實現對食品中防腐劑和甜味劑的同時檢測。