人工馴繁下的長絲裂腹魚卵及胚胎發育特征觀察

許 勇

(雅礱江流域水電開發有限公司，四川 成都 610051)

【研究意義】長絲裂腹魚(SchizothoraxdolichonemaHerzenstein)俗稱細甲魚，主要分布于金沙江及其支流雅礱江等水域，常生活在水流湍急、水溫較低、水底多礫石的寬谷河流中[1]，是長江上游特有魚類和四川省重點保護魚類。長絲裂腹魚下頜具銳利角質，主要刮食著生硅藻和底棲動物等，其肉質細嫩、富含脂肪、味道鮮美，還是產區重要的經濟魚類。近年來，由于酷漁濫捕、采沙淘金以及河道工程等的影響，其野生資源量顯著衰退，已被西南地區多個梯級水電站列為了近期增殖放流保護魚類，而做好其人工馴養、繁育則是增殖放流保護的前提。【前人研究進展】目前有關長絲裂腹魚的研究報道較少，僅見人工繁殖[2]、游泳能力和游泳行為[3]以及胚胎發育和仔魚生長[4]的研究。【本研究切入點】但是尚未見長絲裂腹魚卵的特征觀察報道，也尚未見詳細描述野生長絲裂腹魚移養馴化、人工繁殖及胚胎發育完整進程的報道。【擬解決的關鍵問題】本試驗通過收集野生長絲裂腹魚馴養至性成熟，并對其人工催產、成熟卵及受精卵特征和胚胎發育進程進行連續地觀察和描述，旨在為長絲裂腹魚的增殖放流保護和產業化發展提供基礎資料。

1 材料與方法

1.1 野生親魚收集與馴化

2012年11月，錦屏一級水電站下閘蓄水期間通過網捕收集雅礱江野生長絲裂腹魚百余尾，大小各異，運至錦屏·官地魚類增殖放流站(海拔高程1658 m)專池暫養(15 m×5 m×1 m，水深0.6 m)，調節水溫后浸泡消毒，加蓋防跳網，定期潑灑消毒以防疾病。1周后在暫養池中可放入已馴化好的短須裂腹魚種30～50尾(200～300 g)。約1月左右適應養殖環境后，轉入仿生態環道式親魚池中培育(面積446 m2，寬4 m，水深1.5 m)流水養殖(全年水溫5～20.8 ℃，平均水溫13.2 ℃，平均流速0.054 m/s)。馴化前期采用蚯蚓誘食，逐漸投喂不同比例(由少至多)的蚯蚓和配合飼料的混合餌料(2次/d)，配合飼料選擇蛋白含量為35 %的浮性飼料，繁殖季節前2～3月可增加投喂動物性餌料(如蚯蚓、黃粉蟲)和維生素E，促進性腺發育。

1.2 人工催產與孵化

2016年3月初，檢查發現長絲裂腹魚成熟雌雄親魚性腺發育良好，可以進行人工催產。3月6日19:00，挑選體質健壯的雌魚3尾(1.65～2.10 kg)、雄魚6尾(1.15～1.65 kg)進行人工試催產，激素選擇LHRH-A2(15 ug/kg)+PG(1.2 mg/kg)+HCG(1000 IU/kg)，采取胸鰭基部一次性注射，雄魚注射劑量減半。注射后親魚均放入水溫15 ℃的催產池中流水刺激促產。3月8日18:30，親魚相互追逐明顯，檢查發現雌魚均可人工采卵，隨即使用80 mg/L MS-222進行麻醉，麻醉后立即實施人工采卵和干法授精，產后親魚放入微流的清水中蘇醒，受精卵均勻平鋪于孵化框(70 cm×50 cm×40 cm)中微流水(水溫10.8±0.8 ℃)孵化。

1.3 觀察工具與方法

人工采卵后隨機選取每尾雌魚所產成熟卵各30粒，干法受精后每隔0.5～1 h隨機選取受精卵30粒作為樣本，使用Leica顯微鏡、Olympus SZ61解剖鏡對成熟卵及受精卵胚胎發育進行觀察，使用Sony數碼相機、Olympus拍照系統對各階段形態進行連續拍照，并使用數顯游標卡尺測量卵徑。同時記錄發育時間，發育時間以50 %以上進入該階段為準。使用Adobe Photoshop CS5軟件處理獲得照片以突出胚胎發育各階段的特征。

2 結果與分析

2.1 人工馴養與繁殖

野生長絲裂腹魚較易馴養，且能被短須裂腹魚帶動攝食，并逐漸攝食配合飼料。轉入暫養池初期，兩種魚群分散，后逐漸集中；魚群喜陰避陽，多棲息于環道式親魚池中弧形處的水底，隨著陽光照射始終躲避在池中背光側，僅在投喂時才躥至水面搶食，且迅速下潛返回。

經人工馴養后，長絲裂腹魚性腺能發育成熟，并可正常進入繁殖期。成熟雌魚腹部膨大而柔軟，卵巢輪廓較明顯，泄殖孔突出，但不明顯；成熟雄魚吻端珠星明顯，輕壓腹部有白色精液流出且入水即散。人工催產效應時間為47.5 h，獲卵26 988粒，其中受精卵20 340粒，受精率為75.37 %，出苗13 941尾，平均孵化率為68.54 %。

2.2 成熟卵及受精卵

長絲裂腹魚成熟卵的外觀呈圓球形，淺黃色，微粘性，卵徑大小范圍為2.34～3.60 mm，平均卵徑為(2.88±0.29)mm。受精后卵膜開始吸水膨脹成為沉性卵，卵粒變得圓潤飽滿，2 h后平均卵徑為(4.06±0.16) mm，卵徑大小范圍為3.52～4.48 mm，具體詳見表1。

2.3 胚胎發育

在水溫(10.8±0.8)℃下，長絲裂腹魚胚胎發育從受精卵到孵化出膜歷時204 h 25 min。根據胚胎發育的各階段變化和特征，分為胚盤隆起、卵裂、囊胚、原腸胚、神經胚、器官形成和出膜7個階段。

表1 長絲裂腹魚的成熟卵及受精卵卵徑

各階段主要胚胎發育時期、特征及圖片形態如下：

胚胎隆起：受精后3 h 45 min，受精卵動物極隆起形成胚盤(圖版I A)。

卵裂期：受精后5 h 20 min，胚盤第一次分裂形成2細胞；之后胚盤細胞繼續分裂，分別于受精后7 h 30 min、9 h 15 min、11 h、14 h 55 min、19 h 30 min依次形成4、8、16、32、64細胞；22 h 5 min時進入卵裂后期，此時細胞相互堆疊成桑葚狀(圖版I B～D)。

囊胚期：受精后25 h 20 min，細胞持續分裂變小，且界限模糊不清，細胞堆疊形成的囊胚呈帽狀高聳于卵黃之上，胚體進入囊胚期；31 h 40 min時囊胚向四周延展，逐漸變矮并下包卵黃；44 h 55 min時囊胚下包卵黃直至扁平，胚體即將進入原腸胚期(圖版I E～G)。

原腸期：受精60 h 15 min后，細胞繼續向四周延展，胚層向下包裹卵徑約1/3時，胚環逐漸形成；70 h 35 min時胚層繼續下包至卵徑約1/2時，胚環漸漸發育成胚盾，此時期發育緩慢；78 h 45 min時胚層進一步下包至卵徑約4/5時，胚盾則發育成胚體雛形(圖版I H～J)。

神經胚期：受精80 h 35 min后，胚體形體由雛形逐漸發育清晰，神經板頭部漸漸凸出形成隆起；84 h 25 min時神經板頭部往后逐漸形成柱狀脊索，胚層將卵黃體全部包裹，胚孔封閉(圖版I K～L)。

器官形成期：受精97 h 15 min后，胚體中部分段開始明顯，逐漸形成2～4對肌節；發育10 h 40 min后，肌節往前后相繼增至5～8對，同時頭部兩側形成1對腎狀凸起，此為眼基；132 h 5 min時胚體往后發育并延長形成尾芽，此階段胚體快速增長；4 h 25 min后，橢圓狀聽囊出現在腦泡后部；6 h 15 min后，圓形晶體出現在杯狀眼囊內；166 h 25 min時顯微鏡下可以觀察到肌肉微弱的收縮；受精189 h 55 min后，心臟出現在聽囊下方、卵黃囊上方，顯微鏡下可以觀察到心跳，此時血管并未形成(圖版I M～S)。

出膜期：受精204 h 25 min后，胚胎進入出膜期，此時胚胎在膜內無節律地快速翻轉或旋轉運動，此時囊黃上已有血管形成，可以看到紅色血細胞。隨著卵膜軟化，胚胎頭部或尾部先沖破卵膜，胚胎繼續擺動、旋轉、翻轉使開口變大，直至仔魚彈出(圖版I T)。

初孵仔魚：剛孵化出膜的仔魚全長平均為(10.25±0.26) mm，眼晶體中無色素，頭部彎曲緊貼卵黃囊(圖I-N)。1 d后眼晶體中色素明顯，頭下頜部與卵黃囊逐漸分離，頭部漸與背部平齊，尾部明顯上翹(圖版I U～V)。

3 討 論

3.1 長絲裂腹魚的馴養繁殖

長絲裂腹魚的野生習性決定了其應在流水環境中進行人工馴養，本試驗采用仿生態環道式親魚池培育，池底鋪設泥沙礫石，水質良好、水流速度較大，充分模擬其生活的自然環境。利用同江段短須裂腹魚和長絲裂腹魚的習性基本相似，在馴養野生長絲裂腹魚時可同已馴化好的短須裂腹魚混養，能較好地帶動長絲裂腹魚攝食，并隨生長發育至性腺成熟。從繁殖期親魚第二性征看，雌魚的生殖孔紅潤突出不顯著，明顯不如站內短須裂腹魚雌魚的性征表現，但擠壓腹部卻有卵粒流出，這說明長絲裂腹魚雌魚的性征表現可能本就不明顯，但也有可能與親魚培育的不好、懷卵量少有關，還有待進一步研究證實。從雌魚產卵量看，隨著年齡、體長和體重的增加，雌魚的繁殖力、成熟系數也明顯增加，故在親魚挑選時應盡可能選擇大齡雌魚開展人工繁殖，以期獲得量大、質優的卵子，不足的是本實驗暫未對產卵的雌魚年齡進行鑒定，故而長絲裂腹魚年齡與繁殖力的關系還有待于進一步研究。

3.2 長絲裂腹魚的受精卵特性

裂腹魚主要生活在高海拔、低水溫、急水流且營養物資較貧乏的青藏高原水域中，性成熟較遲、繁殖力較低，其受精卵也已進化出與高原地區相適應的特性，卵黃色，粒徑較大(一般2.5～3.0 mm)，且有毒性[5]，以此來保證物種的延續性。由表2可知，長絲裂腹魚成熟卵和吸水膨脹后的卵徑大于裂尻魚亞屬(RacomaMcClelland)的伊犁裂腹魚、小裂腹魚、塔里木裂腹魚、云南裂腹魚、四川裂腹魚和同裂腹魚亞屬(SchizothoraxHeckel)的昆明裂腹魚、光唇裂腹魚，與裂尻魚亞屬的拉薩裂腹魚和同亞屬的異齒裂腹魚、短須裂腹魚和細鱗裂腹魚相近，但比同亞屬的齊口裂腹魚稍小。可見長絲裂腹魚卵在裂腹魚中屬大型卵子，這雖降低了繁殖力，但大卵包含了更多內源性營養物，孵化時可順利度過低水溫環境，仔魚的消化運動器官能發育得較為完善，適應環境的能力也就越強，更有利于仔魚初次攝食、生長、避敵并提高成活率。本實驗長絲裂腹魚的卵徑大小不一，這與魚的年齡以及營養積累等有關。

3.3 長絲裂腹魚的胚胎發育特性

長絲裂腹魚的胚胎發育時序與西南地區的其它裂腹魚基本一致，具有種的特異性，但也有其自身的特點。在器官發育階段，長絲裂腹魚的眼基于肌節之后出現，與昆明裂腹魚、光唇裂腹魚、四川裂腹魚、細鱗裂腹魚和短須裂腹魚保持一致，但與齊口裂腹魚相反；聽囊于尾芽形成之后出現，與四川裂腹魚和昆明裂腹魚一致，但與齊口裂腹魚和短須裂腹魚[15]相反，而細鱗裂腹魚的則于晶體形成之后才出現；肌肉效應期出現于聽囊、晶體之后，與光唇裂腹魚和細鱗裂腹魚一致，但與四川裂腹魚、短須裂腹魚和齊口裂腹魚的出現于聽囊和晶體之間不同。胚胎特性的差異可能是這幾種裂腹魚各自長期適應環境和進化選擇的結果，目的在于感覺和運動器官盡可能優先發育完善，提高仔魚躲避敵害和捕食餌料的成功率，以便盡早增強仔魚適應環境的能力。

A.胚盤隆起；B.4細胞期；C.16細胞期；D.64細胞期；E.囊胚早期；F.囊胚中期；G.囊胚晚期；H.原腸早期；I.原腸中期；J.原腸晚期；K.神經胚期；L.胚孔封閉期；M.肌節出現期；N.眼基出現期；O.尾芽期；P.聽囊期；Q.晶體出現期；R.肌肉效應期；S.心臟出現期；T.出膜前期；U.初孵仔魚；V.1日齡仔魚圖版I 長絲裂腹魚的胚胎發育Plate I The embryo development process ofS.dolichonema

表2 13種裂腹魚的成熟卵徑和吸水膨脹后卵徑比較