重型血友病A患兒關(guān)節(jié)出血后IL—1β、IL—6、TNF—α釋放與關(guān)節(jié)病變形成的相關(guān)性研究

周娟

[摘要] 目的 探討重型血友病A患兒關(guān)節(jié)出血后IL-1β、IL-6、TNF-α釋放與關(guān)節(jié)病變形成的相關(guān)性。方法 方便選取該院（2015年1月—2017年1月）收治的重型血友病A患兒60例，無關(guān)節(jié)出血組（n=20），關(guān)節(jié)出血組（n=36），急性關(guān)節(jié)出血組（n=20），慢性關(guān)節(jié)出血組（n=15），應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測定血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平。 結(jié)果 急性關(guān)節(jié)出血組關(guān)節(jié)病變患者細(xì)胞內(nèi)TNF-α信使核糖核酸表達(dá)水平（6.695±2.523）ng/L，明顯高于無關(guān)節(jié)病變患者（1.791±1.479）ng/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.934 6，P<0.05）；急性關(guān)節(jié)出血組關(guān)節(jié)病變細(xì)胞內(nèi)IL-6、IL-1β信使核糖核酸表達(dá)水平分別為（0.912±0.525）ng/L、（1.879±1.542）ng/L；無關(guān)節(jié)病變者分別為（1.263±0.647）ng/L、（0.971 8±0.517）ng/L，急性關(guān)節(jié)出血組關(guān)節(jié)病變與無關(guān)節(jié)病變細(xì)胞內(nèi)IL-6、IL-1β信使核糖核酸表達(dá)水平對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.336 2、1.592 9，P>0.05）。結(jié)論 重型血友病A患兒急性關(guān)節(jié)出血TNF-α、IL-6、IL-1β水平明顯升高，以TNF-α表達(dá)水平最高，且伴關(guān)節(jié)病變患兒TNF-α水平也明顯升高，因此關(guān)節(jié)病變形成的關(guān)鍵因子為TNF-α。

[關(guān)鍵詞] 重型血友病A；急性關(guān)節(jié)出血；TNF-α；IL-6；IL-1β；關(guān)節(jié)病變

[中圖分類號] R4 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號] 1674-0742（2019）03（a）-0013-03

[Abstract] Objective To investigate the relationship between the release of IL-1β， IL-6 and TNF-α and the formation of joint lesions in children with severe hemophilia A. Methods 60 patients with severe hemophilia A admitted to our hospital （January 2015 to January 2017）， no joint bleeding group （n=20）， joint bleeding group （n=36）， acute joint bleeding group were selected （n=20）， chronic joint bleeding group （n=15）， serum TNF-α， IL-6， IL-1β levels were determined by enzyme-linked immunosorbent assay. Results The expression level of TNF-α messenger ribonucleic acid in patients with acute joint hemorrhage was （6.695±2.523）ng/L， which was significantly higher than that of patients without joint disease （1.791±1.479）ng/L. The difference was statistically significant （t=4.934 6， P<0.05）； acute joint expression levels of IL-6 and IL-1β messenger RNA in the joints of the hemorrhagic group were （0.912±0.525）ng/L and （1.879±1.542）ng/L， respectively. The patients without joint lesions were （1.263±0.647）ng/L and （0.971 8±0.517）ng/L， respectively. There was no significant difference in the expression levels of IL-6 and IL-1β messenger RNA in articular lesions （t=1.336 2， 1.592 9， P>0.05）. Conclusion The levels of TNF-α， IL-6 and IL-1β in patients with severe hemophilia A are significantly increased， and the expression level of TNF-α is the highest， and the level of TNF-α is also significantly increased in children with joint disease. Therefore， the key factor for the formation of joint lesions is TNF-α.

[Key words] Severe hemophilia A； Acute joint bleeding； TNF-α； IL-6； IL-1β； Joint disease

血友病A為一種先天性出血性疾病，主要原因?yàn)槿狈δ蜃英y(tǒng)計(jì)顯示，每年發(fā)病率為0.02%[1]。雖然隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，血友病的治療效果有了極大的提高，但血友病關(guān)節(jié)出血后第一合并癥關(guān)節(jié)病變并沒有得到有效的預(yù)防和治療，導(dǎo)致患者出現(xiàn)炎癥甚至殘疾[2]。雖然世界血友病聯(lián)盟推薦預(yù)防治療，但該預(yù)防治療也僅能降低出血時(shí)間的發(fā)生幾率，若患者形成了關(guān)節(jié)病，就不能再逆轉(zhuǎn)，因此預(yù)防治療效果不全面[3]。有學(xué)者研究顯示，同樣的出血情況下，關(guān)節(jié)病形成存在個(gè)體差異，這提示血友病關(guān)節(jié)病的形成不僅與關(guān)節(jié)出血有關(guān)，還存在其他因素[4]。血液充滿關(guān)節(jié)腔后激活基質(zhì)金屬蛋白酶類、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、單核/巨噬系統(tǒng)釋放白細(xì)胞介素-1β（IL-1β），致使血管內(nèi)皮生長因子增加，形成滑膜炎性反應(yīng)，出血后滑膜內(nèi)鐵沉積損害軟骨細(xì)胞，導(dǎo)致關(guān)節(jié)出現(xiàn)功能障礙或退行性變，這個(gè)過程與風(fēng)濕性關(guān)節(jié)很相似[5]。目前在風(fēng)濕免疫病領(lǐng)域中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了炎性反應(yīng)因子與關(guān)節(jié)炎的關(guān)系，特別是TNF-α、白介素-6（IL-6）、IL-1β，且抗TNF-α、IL-6、IL-1β的靶向藥物也已廣泛運(yùn)用于慢性關(guān)節(jié)病變預(yù)防[6]。雖然目前知道TNF-α、IL-6、IL-1β與血友病關(guān)節(jié)病變有密切關(guān)系，但其形成過程中的作用如何還不清楚，本研究選取我院（2015年1月—2017年1月）收治的重型血友病A患兒60例，就探討重型血友病A患兒關(guān)節(jié)出血后IL-1β、IL-6、TNF-α釋放與關(guān)節(jié)病變形成的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取該院收治的重型血友病A患兒60例，均經(jīng)臨床檢查確診，根據(jù)不同關(guān)節(jié)出血情況分為4組，無關(guān)節(jié)出血組（n=20），其中男12例，女8例；年齡2～18歲，平均（8.21±3.11）歲；關(guān)節(jié)出血組（n=36），其中男22例，女14例；年齡2～18歲，平均（8.17±3.21）歲；急性關(guān)節(jié)出血組（n=20），其中男11例，女9例；年齡2～18歲，平均（8.09±3.34）歲；慢性關(guān)節(jié)出血組（n=15），其中男8例，女7例；年齡2～18歲，平均（8.47±3.05）歲，4組患者一般資料對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合重型血友病A診斷標(biāo)準(zhǔn)；②患兒及（或）家屬均知情研究；③年齡2～18歲；④無抑制物產(chǎn)生病史者；排除標(biāo)準(zhǔn)：①病程中曾服用過免疫制劑者；②近期服用過抗炎鎮(zhèn)痛藥物者；③合并其他感染者；④存在自身免疫系統(tǒng)疾病者。該研究所選病例經(jīng)過倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

收集所有患兒的臨床資料，使用紫帽管采集靜脈血標(biāo)本，3 000 r/min離心25 min，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測定血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平。對外周單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行核糖核酸反轉(zhuǎn)錄、提取，使用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)測定TNF-α、IL-6、IL-1β的信使核糖核酸表達(dá)量。采集外周血標(biāo)本，用Trizol法提取細(xì)胞總核糖核酸，測定核糖核酸的濃度和純度[7]。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

選用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采取χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 關(guān)節(jié)出血后炎性反應(yīng)因子變化情況

關(guān)節(jié)出血組患者血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平與無關(guān)節(jié)出血組對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；關(guān)節(jié)出血組患者細(xì)胞內(nèi)TNF-α、IL-6、IL-1β信使核糖核酸表達(dá)水平均明顯提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；急性出血組患者血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平與無關(guān)節(jié)出血組對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；急性出血組患者細(xì)胞內(nèi)TNF-α、IL-6、IL-1β信使核糖核酸表達(dá)水平均明顯提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；慢性出血組患者血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平與無關(guān)節(jié)出血組對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；慢性出血組患者細(xì)胞內(nèi)TNF-α信使核糖核酸表達(dá)水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；急性出血期患者血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平以及細(xì)胞內(nèi)TNF-α、IL-6、IL-1β信使核糖核酸表達(dá)水平與慢性出血組對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。表1、表2、表3。

2.2 關(guān)節(jié)病變患兒炎性反應(yīng)因子表達(dá)水平

急性關(guān)節(jié)出血組關(guān)節(jié)病變與無關(guān)節(jié)病變血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；急性關(guān)節(jié)出血組關(guān)節(jié)病變患者細(xì)胞內(nèi)TNF-α信使核糖核酸表達(dá)水平（6.695±2.523）ng/L，明顯高于無關(guān)節(jié)病變患者（1.791±1.479）ng/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.934 6，P<0.05）；急性關(guān)節(jié)出血組關(guān)節(jié)病變細(xì)胞內(nèi)IL-6、IL-1β信使核糖核酸表達(dá)水平分別為（0.912±0.525）ng/L、（1.879±1.542）ng/L；無關(guān)節(jié)病變者分別為（1.263±0.647）ng/L、（0.971 8±0.517）ng/L，急性關(guān)節(jié)出血組關(guān)節(jié)病變與無關(guān)節(jié)病變細(xì)胞內(nèi)IL-6、IL-1β信使核糖核酸表達(dá)水平對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.336 2、1.592 9，P>0.05）。表4～5。

3 討論

血友病會(huì)導(dǎo)致患兒異常出血，一般以關(guān)節(jié)出血為主，若出血癥狀嚴(yán)重，還可能導(dǎo)致患兒死亡，雖然凝血因子替代治療具有一定效果，但也只能將該疾病轉(zhuǎn)變?yōu)橹職埿约膊8]。重度血友病患者出血時(shí)間發(fā)生在關(guān)節(jié)處占比達(dá)82%，因反復(fù)出血的原因，最終會(huì)引發(fā)關(guān)節(jié)病變，不僅會(huì)帶來巨大的疼痛感，還會(huì)導(dǎo)致患者關(guān)節(jié)永久性功能障礙。有學(xué)者的小鼠模型、體外細(xì)胞研究表示，在血友病關(guān)節(jié)病變的形成過程中，IL-10、IL-6、IL-1β、TNF-α等炎性反應(yīng)因子有重要作用[9]。有研究顯示，血友病關(guān)節(jié)出血由機(jī)械損傷引發(fā)的可行性很小，而促炎性細(xì)胞因子卻會(huì)對軟骨組織和滑膜造成巨大破壞，特別是TNF-α、IL-6、IL-1β，且這些促炎性細(xì)胞因子還會(huì)將傷口愈合時(shí)間延長[10]。

該研究結(jié)果顯示，急性關(guān)節(jié)出血組關(guān)節(jié)病變患者細(xì)胞內(nèi)TNF-α信使核糖核酸表達(dá)水平（6.695±2.523）ng/L，明顯高于無關(guān)節(jié)病變患者（1.791±1.479）ng/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.934 6，P<0.05）；急性關(guān)節(jié)出血組關(guān)節(jié)病變細(xì)胞內(nèi)IL-6、IL-1β信使核糖核酸表達(dá)水平分別為（0.912±0.525）ng/L、（1.879±1.542）ng/L；無關(guān)節(jié)病變者分別為（1.263±0.647）ng/L、（0.971 8±0.517）ng/L，急性關(guān)節(jié)出血組關(guān)節(jié)病變與無關(guān)節(jié)病變細(xì)胞內(nèi)IL-6、IL-1β信使核糖核酸表達(dá)水平對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.336 2、1.592 9，P>0.05）。關(guān)節(jié)出血患者血清TNF-α水平無明顯提高，而細(xì)胞內(nèi)TNF-α的信使核糖核酸表達(dá)水平明顯提高，分析與實(shí)驗(yàn)取血標(biāo)本和時(shí)間把握不足以及TNF-α容易裂解有關(guān)，而信使核糖核酸表達(dá)水平較穩(wěn)定，所以明顯提高。結(jié)果顯示，急性關(guān)節(jié)出血組關(guān)節(jié)病變與無關(guān)節(jié)病變TNF-α的信使核糖核酸水平存在差異，而其余因子無差異，說明TNF-α為關(guān)節(jié)病變形成的關(guān)鍵因子。結(jié)果顯示，關(guān)節(jié)出血慢性組TNF-α的信使核糖核酸水平高于無關(guān)節(jié)出血組，而其余因子無差異，說明血友病慢性滑膜炎形成中，TNF-α為關(guān)鍵因子，有巨大作用。學(xué)者劉國青等[11]做過類似研究，發(fā)現(xiàn)急性關(guān)節(jié)出血組伴關(guān)節(jié)病變與急性關(guān)節(jié)出血組不伴關(guān)節(jié)病變的 TNF-α的細(xì)胞內(nèi) mRNA 的水平[（5.584±3.634） vs （1.680±1.590）]差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.02），與該研究結(jié)果一致。

綜上所述，重型血友病A患兒急性關(guān)節(jié)出血TNF-α、IL-6、IL-1β水平明顯升高，以TNF-α表達(dá)水平最高，且伴關(guān)節(jié)病變患兒TNF-α水平也明顯升高，因此關(guān)節(jié)病變形成的關(guān)鍵因子為TNF-α。

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（收稿日期：2018-12-07）