載脂蛋白E基因多態性與心腦血管疾病患者C反應蛋白水平相關性分析

國希云，王曙霞，鄧嫻，唐果，何荊貴

(中國人民解放軍總醫院第一醫學中心干部診療科,北京 100853)

載脂蛋白E(ApoE)最早發現于1973年，是從極低密度脂蛋白(VLDL)中發現的，后來在所有哺乳動物的乳糜微粒(CM),低密度脂蛋白(LDL)，高密度脂蛋白(HDL)相繼被發現，目前已經確定ApoE的生理功能是主要作為LDL和CM受體的配體，參與脂蛋白的代謝。既往研究發現，ApoE基因rs7412 和 rs429358多態性與心腦血管發病密切相關，ApoEε4攜帶者心腦血管風險明顯增高[1-3]，但其機制目前尚不十分明確，本研究擬通過研究ApoEε4攜帶者與超敏C反應蛋白(hs-CRP)水平之間的關系，探討炎癥在ApoEε4攜帶者心腦血管疾病發病方面的作用。

1 對象與方法

1.1 研究對象 心腦血管疾病組： 連續入選我院2016年4月至2017年3月門診就診的心腦血管疾病患者278例(其中冠心病患者160例，缺血性腦卒中患者118例)。其中男208例，女70例，年齡(67.6±8.7)歲。對照組： 同期在我院進行體檢的健康對照人群236例，其中男165例，女71例，年齡(66.9±8.8)歲。兩組患者的年齡、性別、文化程度等比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 提取DNA 所有受試者均禁食≥ 12 h，次日清晨抽取肘靜脈血10 mL，其中一部分血液標本用于生化檢測，其余部分加入乙二胺四乙酸二鈉抗凝，-20 ℃ 保存，采用分離白細胞，低滲溶血，常規酚一氯仿法提取DNA，EDTA抗凝。

1.2.2 ApoE基因多態性檢測 引物為：5’-ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACAC-3’，5’-TAAGCTTGGCACGGCTGTCCAAGGA-3’，PCR反應參數為：取PCR產物5 μL，加HhaⅠ酶3 u，37 ℃酶切5 h，用2%瓊脂糖凝膠電泳分離酶切產物。結果可顯示PCR產物為244 bp，被酶切為91 bp和83 bp的片段為ε2基因，被酶切為91 bp和48 bp的片段為ε3基因，被酶切為72 bp和48 bp的片段為ε4基因。

1.2.3 CRP檢測 采用生化全自動儀分別對三酰甘油(TG)，總膽固醇(TC)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C),空腹血糖和血清hs-CRP 水平等進行測定。

1.3 統計學處理 采用SPSS 18.0統計學軟件進行分析。計數資料以例數及率表示，比較采用χ2檢驗。計量資料均行正態性檢驗，正態資料的組間比較采用成組t檢驗，偏態資料的組間比較采用秩檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般臨床情況 心腦血管疾病組與對照組的臨床一般情況及血脂、血糖、血壓，見表1。心腦血管疾病組的收縮壓高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。年齡、血脂等指標兩組間差異無統計學意義。

2.2 ApoE基因型頻率比較 ApoE基因型頻率基本符合Hardy-Weinberg平衡，對照組ApoEε2,ApoEε3和ApoEε4基因分別占20.8%,75.0%和4.2%,心腦血管疾病組ApoEε3頻率為74.1%，與對照組之間大體相近，心腦血管疾病組ApoEε4基因頻率為14.7%，明顯高于健康對照組，而心腦血管疾病組ApoEε2基因頻率為11.2%，明顯低于健康對照組。見表2。

表1 心腦血管疾病組與健康對照組一般情況比較

表2 心腦血管疾病組與健康對照組ApoE基因頻率對比

2.3 不同基因型hs-CRP比較 心腦血管疾病組的hs-CRP水平顯著高于對照組(P<0.05)，心腦血管疾病組ApoE各基因型的hs-CRP水平均較對照組增高，但ApoEε3和ApoEε2在兩組間差異無統計學意義。心腦血管疾病組ApoEε4水平較對照組差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 心腦血管疾病組與健康對照組不同ApoE基因型hs-CRP對比

注：兩組比較采用成組秩檢驗

3 討論

ApoE是由299個氨基酸殘基構成，當其112位和158位全是半胱氨酸時，就是E2型的異構體，當這兩個位置全是精氨酸時就是E4型異構體。當112位是半胱氨酸，158位是精氨酸是就是E3型的異構體。有的人體內只有一種異構體，就是純合子，像E2E2，E3E3，E4E4。有的人體內含有兩種異構體，就是雜合子E2E3，E2E4，E3E4[4]。

體內所含有的異構體類型是和基因型相對應的，決定人們載脂蛋白E型別的基因位于19號染色體上，有三個等位基因共同表達ε2，ε3，ε4。因此，又可將6種異構體型別劃分為三個大的表型，即ApoE2，E3，E4表型。相應的不同的表型有不同的特性，E3型為野生型，占到70%～80%，E2，E4型通常稱為變異性，或者突變型。

E2型占自然人群的5%～10%。E2型攜帶者不易患神經退化性疾病，像阿爾茨海默病、帕金森病，也不容易患心肌梗死、腦梗死等心腦血管疾病；E4型的突變攜帶者易患老年癡呆，帕金森綜合征等神經退化性疾病，也是高血脂、動脈硬化、心肌梗死、腦梗死等心腦血管疾病的易感人群，占10%～15%。既往研究將大鼠體內的ApoE基因敲除，然后給予大鼠正常的飲食，大鼠會罹患嚴重的動脈粥樣硬化，由此推測，ApoE的ε4等位基因可能是導致動脈粥樣硬化的獨立因素[5-7]。本研究中，心腦血管疾病患者ApoE的ε4等位基因頻率顯著高于對照組。ApoEε4攜帶者心腦血管患病風險明顯增高，但其機制目前尚不十分明確。

hs-CRP是由肝細胞產生的一種炎癥和組織損傷急性期反應的非常敏感的標志物，動脈硬化是一系列病因所致炎性反應引發炎性細胞和介質造成動脈壁損壞所引起。CRP可誘導單核細胞表達組織因子，激活凝血系統和補體系統導致機體凝血與纖溶失衡，從而增加心血管事件的危險[8-11]。本研究通過發現心腦血管疾病組ApoEε4攜帶者的hs-CRP水平增高，提示ApoEε4攜帶者體內炎癥水平增高，可能是其導致心腦血管疾病增加的機制之一。但本研究亦有較明顯的不足：樣本量較少，缺乏對ApoEε4攜帶者體內炎性水平地更深入研究。

綜上所述，載脂蛋白E4等位基因在心腦血管疾病患者中的比例較高，同時攜帶ApoEε4基因型的患者血漿hs-CRP 水平增高，ApoEε4患者體內炎癥水平較高，可能是導致其心腦血管疾病發病率增高的原因之一。