開胃消食合劑對功能性消化不良大鼠胃動素和生長抑素的影響

吳元祥 朱方石 薛瑞華

[摘要] 目的 研究開胃消食合劑對功能性消化不良（FD）大鼠的治療作用及相關機制。 方法 將60只雄性Wistar大鼠隨機分為空白組、模型組、陽性藥組、開胃消食合劑低劑量組、開胃消食合劑中劑量組、開胃消食合劑高劑量組，空白組正常飼養，其余采用饑飽失常和夾尾激怒法構建FD模型。持續造模14 d后，灌胃治療14 d，實驗結束。觀察各組大鼠狀態，記錄體重，用葡聚藍-2000灌胃來測定大鼠的胃排空率和小腸推進率。采用酶聯免疫吸附測定（ELISA）檢測血清和十二指腸中胃動素（MTL）和生長抑素（SS）的含量。 結果 與空白組比較，模型組體重下降（P < 0.01）；與模型組比較，開胃消食合劑中、高劑量組能增加大鼠體重（P < 0.05或P < 0.01）。與空白組比較，模型組胃排空率降低（P < 0.01）；與模型組比較，開胃消食合劑高劑量組能增加胃排空率（P < 0.05）。與空白組比較，模型組小腸推進率明顯降低（P < 0.01）；與模型組比較，開胃消食合劑低、中、高劑量組小腸推進率均有所升高，但差異無統計學意義（P > 0.05）。與空白組比較，模型組血清和十二指腸中MTL含量明顯降低（P < 0.05或P < 0.01）；與模型組比較，開胃消食合劑高劑量組能增加血清和十二指腸中MTL的含量（P < 0.05或P < 0.01）。與空白組比較，模型組血清和十二指腸中SS含量明顯增加（P < 0.05）；與模型組比較，開胃消食合劑高劑量組能減少大鼠血清和十二指腸中SS含量（P < 0.05）。 結論 開胃消食合劑具有治療FD的作用，能夠增加胃排空率和小腸推進率，其作用機制與改善胃腸激素SS和MTL的分泌密切相關。

[關鍵詞] 開胃消食合劑；功能性消化不良；胃動素；生長抑素

[中圖分類號] R573 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2019）04（b）-0018-05

Effect of Kaiwei Xiaoshi Mixture on motilin and somatostatin in rats model of functional dyspepsia

WU Yuanxiang1，2 ZHU Fangshi1 XUE Ruihua2 LIU Jian2 SHAO Changle1 MA Jinxia1 YAN Zhanpeng1

1.Clinical Research Department of Chinese and Western Medicine， Jiangsu Province Academy of Traditional Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing 210028， China； 2.Department of Gastroenterology， Chinese Medicine Hospital of Rugao City， Jiangsu Province， Rugao 226500， China

[Abstract] Objective To study the therapeutic effect of Kaiwei Xiaoshi Mixture on functional dyspepsia （FD） rats and its related mechanism. Methods Sixty male Wistar rats were randomly divided into blank group， model group， positive drug group， low dose of Kaiwei Xiaoshi Mixture group， middle dose of Kaiwei Xiaoshi Mixture group and high dose of Kaiwei Xiaoshi Mixture group. The blank group rats were fed normally. The rest of rats were fed with starvation and satiety disorders and tail-clipping irritation for 14 days to establish FD model. The gavage treatment lasted for 14 days. At the end of the experiment， the mental state of rats in each group was observed and the weight of rats was recorded. The gastric emptying rate and small intestinal propulsion rate of rats in each group were measured by gavage with blue dextran 2000. The contents of motilin （MTL） and somatostatin （SS） in serum and duodenal tissue were detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Results Compared with the blank group， the body weight of the model group decreased （P < 0.01）； compared with the model group， the body weight in the middle and high dose of Kaiwei Xiaoshi Mixture groups increased （P < 0.05 or P < 0.01）. Compared with the blank group， the gastric emptying rate of the model group decreased （P < 0.01）； compared with the model group， the gastric emptying rate in high dose of Kaiwei Xiaoshi Mixture group increased （P < 0.05）. Compared with the blank group， the small intestine propulsion rate of the model group was significantly decreased （P < 0.01）； compared with the model group， the intestinal propulsion rate in low， middle and high dose of Kaiwei Xiaoshi Mixture groups increased， while there were no statistically significant differences （P > 0.05）. Compared with the blank group， the MTL content in the serum and duodenum of the model group was significantly decreased （P < 0.05 or P < 0.01）； compared with the model group， the MTL content in serum and duodenum of high dose of Kaiwei Xiaoshi Mixture group increased （P < 0.05 or P < 0.01）. Compared with the blank group， the SS content in the serum and duodenum of the model group was significantly increased （P < 0.05）； compared with the model group， the SS content in serum and duodenum of high dose of Kaiwei Xiaoshi Mixture group reduced （P < 0.05）. Conclusion Kaiwei Xiaoshi Mixture has the effect of treating FD and can significantly increase gastric emptying rate and small intestinal propulsion rate， and its mechanism is closely related to the improvement of gastrointestinal hormones SS and MTL secretion.

[Key words] Kaiwei Xiaoshi Mixture； Functional dyspepsia； Motilin； Somatostatin

功能性消化不良（functional dyepepsia，FD）指具有餐后飽脹不適、早飽感、上腹痛、上腹燒灼感中的一項或多項的癥狀，而不能用器質性、系統性或代謝性疾病等來解釋產生癥狀原因的疾病[1]。現代醫學對其治療主要有抑制胃酸、保護胃黏膜、促進胃腸動力等，但停藥后易復發[2-3]。近年來中醫藥研究表明，復方、中藥提取物、中西藥聯用等對FD有一定療效，且在減少復發，副作用小等方面具有優勢[4-5]。開胃消食合劑是根據國醫大師朱良春的經驗方化裁而來，能夠有效改善FD[6-8]。因此，本研究在建立FD大鼠模型的基礎上，探討健胃消食合劑治療FD的分子機制，為開胃消食合劑的臨床應用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試劑

水合氯醛（30037517）購自國藥集團有限公司；生長抑素（SS）（E-EL-R0914c）和胃動素（MTL）（E-EL-R0639c）酶聯免疫吸附測定（ELISA）試劑盒由南京建成生物科學試劑公司提供；藍色葡聚糖DB-2000（JM-17-0360-01）購自美國Pharmacia公司。

1.2 藥品

開胃消食合劑，批號：101013，由江蘇省如皋市中醫院配制提供，含生藥量0.07 g/mL，成人每次30 mL，每日3次；多潘立酮片，批號：101110032，西安楊森制藥有限公司生產，成人每次10 mg，每日3次。

1.3 儀器

全波長酶標儀購自瑞士Tecan公司；微孔板振蕩器購自海門其林貝爾儀器公司；水平離心機購自湘儀公司；恒溫箱購自無錫蘇意達公司；十萬分之一電子天平購自丹弗精密儀器公司。

1.4 實驗動物

Wistar雄性大鼠60只，4～6周，體重（200±20）g，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，動物合格證號：SCXK（滬）2017-0005。大鼠自由飲水和進食，飼養室溫度應保持在20～25℃，相對濕度保持在50%～65%，12 h白天和12 h黑夜。本動物實驗方案符合動物保護、動物福利和倫理原則，符合國家實驗動物福利倫理的相關規定。

1.5 模型建立

將Wistar大鼠60只隨機分為空白組（10只）和FD模型組（50只），空白組給予正常飲食飼養，FD模型組采用饑飽失常喂養和夾尾激怒復合造模法構建FD，FD模型組大鼠自由水，喂食1 d，禁食1 d，循環。用長海綿鉗夾大鼠尾巴末端1/3處，令其暴怒。每次連續不斷刺激10 min，每隔3 h刺激1次，每日4次，第14天造模結束，各組大鼠恢復正常喂養。每天于固定的時間記錄各組大鼠狀態及糞便質量情況。

1.6 分組與給藥

造模成功后各組大鼠恢復正常喂養，將成模大鼠隨機分為五組，分別為模型組、陽性藥組（2.7 mg/kg多潘立酮）、開胃消食合劑低劑量組（0.57 g/kg含生藥量）、開胃消食合劑中劑量組（1.14 g/kg含生藥量）、開胃消食合劑高劑量組（2.28 g/kg含生藥量）。給藥方式均為灌胃，給藥時間持續14 d。藥物劑量的給予參考了1983年徐叔云主編的《藥理學實驗方法學》中“人和大鼠按體表面積折算的等效劑量比率表”[7]。

1.7 胃排空率和小腸推進率的測定

第28天實驗結束，取0.4 mL的2% DB-2000灌胃，20 min后腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠，腹主動脈快速采血，室溫放置4 h，3500 r/min（離心半徑為10 cm）離心15 min，取上清，保存到-80℃超低溫冰箱。取大鼠胃組織，沿大彎處剪開，用生理鹽水沖洗胃內容物，最后定容到10 mL，3000 r/min離心5 min后，取上清，利用酶標儀檢測各組大鼠胃內容物上清液在620 nm處的吸光度（OD值）。大鼠的胃排空率（%）=（1-OD檢測孔/OD標準孔）×100%。迅速取出小腸，測量幽門至色素最前端和幽門至盲腸的距離，計算小腸推進率（%）=色素傳導距離/小腸總長度×100%。

1.8 ELISA檢測血清和十二指腸組織中MTL和SS的含量

十二指腸組織液氮充分研磨，加入生理鹽水，充分溶解，3500 r/min離心10 min，取上清，十二指腸組織樣本準備完畢。血清放置在室溫融化，血清樣本準備完畢。設置空白孔、標準品孔和樣品孔；將標準品50 μL加入到96孔中，再加50 μL生物素；樣品孔加入樣本50 μL，加入生物素50 μL；蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育30 min；每孔加洗滌液，靜置30 s棄去，重復5次；加入50 μL親和素-HRP溶液，混勻，蓋上封板膜，37℃溫育30 min，洗滌5次；每孔加入顯色劑A、B各50 μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 min；每孔加終止液50 μL；450 nm波長測量各孔吸光度；用ELISAcalc計算，擬合模型選擇四參數Logistic曲線，計算血清和十二指腸組織中SS和MTL的濃度。

1.9 統計學方法

數據處理用統計軟件SPSS 13.0進行，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況

空白組食量和飲水量正常，毛色光澤，精神狀態良好，排便正常，糞便呈顆粒狀；模型組食量和飲水量明顯減少，毛色晦暗，精神狀態差，焦躁不安，排便量減少，糞便質地較軟；與模型組比較，陽性藥組食量和飲水量增加，精神狀態明顯改善，打斗情況減少，排便量較模型組增加；與模型組比較，開胃消食合劑低、中、高劑量組食量和飲水量增加，精神狀態改善，焦躁和易怒情況減少，糞便質量顯著改善；與陽性藥組比較，開胃消食合劑高劑量組效果最為明顯。

2.2 各組大鼠體重比較

如表1所示，與空白組比較，模型組大鼠體重明顯降低（P < 0.01）；與模型組比較，陽性藥組大鼠體重明顯增加（P < 0.05）；與模型組比較，開胃消食合劑低、中、高劑量組能夠明顯增加大鼠的體重，且具有濃度依賴，尤其是開胃消食合劑中、高劑量組體重改善效果顯著（P < 0.05或P < 0.01）；與陽性藥組比較，開胃消食合劑高劑量組對大鼠體重的改善更為有效。

2.3 各組大鼠胃排空率比較

如表2所示，與空白組比較，模型組大鼠胃排空率明顯降低（P < 0.01）；與模型組比較，陽性藥組大鼠胃排空率明顯上升（P < 0.05）；與模型組比較，開胃消食合劑低、中、高劑量組大鼠胃排空率均有所增加，且具有濃度依賴效應，尤其是開胃消食合劑高劑量組對胃排空率的改善最為明顯（P < 0.05）。

2.4 各組大鼠小腸推進率比較

如表3所示，與空白組比較，模型組大鼠小腸推進率明顯降低（P < 0.01）；與模型組比較，陽性藥組大鼠小腸推進率明顯升高（P < 0.05）；與模型組比較，開胃消食合劑低、中、高劑量組大鼠小腸推進率有所升高，且具有濃度依賴效應，但差異無統計學意義（P > 0.05）。與開胃消食合劑高劑量比較，陽性藥組相對促進小腸推進率的效果更為明顯。

2.5 各組大鼠血清中MTL、SS含量比較

如表4所示，與空白組比較，模型組大鼠血清中MTL含量明顯降低，SS含量明顯增加，差異均有統計學意義（P < 0.05）；與模型組比較，陽性藥組MTL含量明顯增加（P < 0.05）；與模型組比較，開胃消食合劑高劑量組血清中MTL含量明顯增加，SS含量明顯減少，差異均有統計學意義（P < 0.05）。

2.6 各組大鼠十二指腸中MTL、SS含量比較

如表5所示，與空白組比較，模型組大鼠十二指腸提取液中MTL含量明顯降低（P < 0.01），SS含量明顯增加（P < 0.05）；與模型組比較，陽性藥組MTL含量顯著增加（P < 0.01）；與模型組比較，開胃消食合劑低、中、高劑量組大鼠十二指腸組織中MTL含量均有所增加，且具有濃度依賴效應，尤其是開胃消食合劑中、高劑量組改善較為明顯（P < 0.05或P < 0.01）。與模型組比較，開胃消食合劑干預后，可以減少大鼠外周十二指腸組織中SS的含量，尤其是開胃消食合劑高劑量組（P < 0.05）。

3 討論

中醫古籍無“功能性消化不良”病名記載，但根據其臨床表現，當屬中醫“痞滿”范疇[2，5]。李乾構認為FD病位在胃，其病機是脾虛氣滯，本虛標實，本虛為脾胃虛弱，標實為氣血痰濕食等郁滯中焦，氣機不通，治療應健脾和胃，理氣降逆[10]。王俊等[11]運用內容分析法設定病因、病機分析類目，從中醫古籍文獻探討FD中醫病因病機的規律和特點，結果表明，中醫病機以氣滯、氣虛、寒為主體。李霞等[12]發現飲食不節是其最主要的病因，痰飲為患是本病反復發作的病因特點，氣滯是FD的基本病機。綜上，多數學者認為脾虛氣滯是FD的主要病機，健脾消食導滯為FD的主要治法[5，13]。

開胃消食合劑是由國醫大師朱良春的經驗方化裁而來，由焦山楂、神曲、麥芽、檳榔、木香、陳皮、甘草等藥物組成。其中，焦山楂健脾消食、行氣導滯，為君藥。麥芽性味甘平，健胃消食；神曲健脾和胃、消食調中，合麥芽助君藥消食導滯，為臣藥。陳皮理氣健脾、燥濕化痰；木香行氣止痛、健脾消食；檳榔消食導滯，緩瀉通便；三藥合用，助君藥理氣健脾、行氣止痛，為佐藥。甘草健脾調中為使藥。該方結構嚴謹，君臣佐使分明，根據FD中醫病機而立法處方，諸藥共奏健脾消食導滯的功效。臨床研究表明，開胃消食合劑能有效改善FD患者臨床癥狀，對上腹脹、早飽、食欲不振癥狀的改善尤其明顯；開胃消食合劑能顯著改善患者胃腸動力，從而減輕FD患者臨床癥狀[6-7，14]。

本研究采用經典的復合因素造模法，利用饑飽失常和夾尾激怒來模擬人的飲食不節、情志失調等因素，構建FD大鼠模型，發現開胃消食合劑對大鼠的精神狀態和體重均有明顯的改善作用[15-17]。機體胃排空率和小腸推進率是胃腸動力的重要評價指標[18-21]。本研究發現，開胃消食合劑干預大鼠后能夠明顯改善FD大鼠的胃排空率和小腸推進率，這提示開胃消食合劑可以改善大鼠胃腸動力。MTL能夠促進胃腸運動，加速胃排空，參與調控機體的攝食，MTL分泌下降會導致FD患者胃排空延長、收縮減弱或Ⅲ期收縮缺乏。SS具有減弱胃腸運動、延遲胃排空、抑制膽囊收縮等作用，還能夠抑制多種消化酶的合成與分泌[22-26]。在本研究結果中，開胃消食合劑能夠明顯增加血清和十二指腸組織中MTL的含量，能夠抑制血清和十二指腸中SS的含量。這提示，開胃消食合劑能夠改善FD大鼠體內的胃腸激素MTL和SS。

總之，本研究在成功復制FD大鼠模型的基礎上，發現開胃消食合劑能夠有效改善FD大鼠精神狀態和體重，能夠增加FD大鼠的胃排空率和小腸推進率，能夠改善FD大鼠胃腸激素SS和MTL的分泌，這與開胃消食合劑對FD藥效作用的發揮密切相關。然而，開胃消食合劑對FD的具體作用環節和分子靶點還有待深入研究。

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（收稿日期：2018-08-23 本文編輯：張瑜杰）