轉化生長因子β1與鈣囊素在胰腺癌中的表達情況及其相關性

海 花 陳金金

胰腺癌是消化系統常見的惡性腫瘤，男性發病人數多于女性，在我國的發病率逐年增高[1]。胰腺癌具有惡性程度高、發病隱匿、死亡率高等特點，并且由于其缺乏有效的早期診斷手段，導致手術切除率低，5年生存率不超過5%[2]。當前胰腺癌的病因與發病機制尚不十分清楚，不過發病為多步驟、多階段、多因素、多基因變異參與的復雜的生物學演變過程，隨著分子生物學與免疫學技術的發展與結合，臨床上廣泛開展了對胰腺癌分子水平致病機制的研究[3]。轉化生長因子β1(transforming growth factor beta1，TGF-β1)是目前發現的1種血管生成相關因子，可通過刺激血管生成、合成細胞外基質等，為腫瘤發生發展提供適宜微環境[4]。鈣囊素(S100A11)為S100蛋白家族的成員之一，在體內可轉導鈣依賴性的細胞調節信號，與腫瘤的形成和進展具有一定的相關性[5]。本文探討了TGF-β1與S100A11在胰腺癌中的表達情況及其相關性，希望為闡述胰腺癌的發病機制提供參考，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2016年8月至2017年12月我院收治的90例胰腺癌患者。納入標準：均經病理檢查證實為胰腺癌；臨床病例資料完整；已簽知情同意書；術前未接受化療、放療等治療。排除標準：胰腺癌外其他所有類型惡性腫瘤；臨床資料不明確且病理科無完整切片或石蠟檔案；妊娠與哺乳期婦女。本研究已通過醫院倫理委員會批準。

90例患者年齡29～58歲，平均(49.11±2.87)歲；男性55例，女性35例；平均體重指數為(22.98±1.82) kg/m2；病理分期：Ⅰ期48例，Ⅱ期30例，Ⅲ期12例；分化程度：低分化、中分化、高分化分別有54、18、18例；無淋巴結轉移60例，有轉移30例。

1.2 免疫組化方法

鼠抗人TGF-β1與S100A11單克隆抗體都購自武漢博士德生物有限公司，免疫組化染色試劑盒購自于北京中杉金橋生物技術有限公司，DAB(3，3-二氨基聯苯胺Tris緩沖液)顯色試劑盒購自福建邁新生物技術有限公司。用已知陽性對照染色片為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

免疫組化的組織樣本選擇癌組織、癌旁正常組織，制作石蠟切片3 μm，60 ℃烤片4 h；二甲苯脫蠟2次，酒精梯度脫水后進行水洗；修復抗原，蒸餾水沖洗，5 min×3次；3%H202溶液處理15 min，PBS沖洗，5 min×3次；一抗4 ℃孵育12 h，PBS沖洗，5 min×3次；二抗25 ℃孵育30 min，PBS沖洗，5 min×3次；DA室溫下3～5 min顯色，蘇木精復染細胞核，脫水、透明、封片，鏡下觀察。每張切片由兩位病理專家獨立閱片共同協商出判斷結果。

1.3 統計方法

應用SPSS 20.0軟件，計數資料用χ2檢驗，計量數據用t檢驗，相關性分析用Spearman等級相關分析或χ2檢驗，影響因素分析用多因素非條件logistic回歸分析，P<0.05 表示差異顯著。

2 結果

2.1 TGF-β1與S100A11陽性表達率對比

TGF-β1、S100A11在癌旁組織及癌組織中陽性表達率比較具有顯著差異 (P<0.05)，見表1。

表1 TGF-β1與S100A11在胰腺癌中的表達情況對比 (例，%)

2.2 TGF-β1與S100A11表達與胰腺癌組織臨床特征的相關性

TGF-β1與S100A11在胰腺癌組織中的陽性表達率與胰腺癌的病理分期、分化程度、淋巴結轉移顯著相關(P<0.05)。見表2。Spearman 等級相關分析顯示：胰腺癌組織中TGF-β1表達與S100A11陽性表達呈顯著負相關性(γ=-0.607，P=0.000)。

表2 TGF-β1與S100A11在胰腺癌組織中表達與臨床特征的相關性(例，%)

2.3 影響因素分析

胰腺癌組織的病理分期、分化程度、淋巴結轉移都為影響TGF-β1與S100A11陽性表達的獨立危險因素(P<0.05)。見表3～表4。

表3 影響胰腺癌組織TGF-β1陽性表達的主要因素

表4 影響胰腺癌組織S100A11陽性表達的主要因素

3 討論

胰腺癌是1種高度遺傳特異性的惡性腫瘤，預后非常差，總體5年生存率不到4%，總的中位生存率不到20個月[6]。癌基因激活或抑癌基因失活均會導致正常組織發生癌變，近年來通過對胰腺癌相關基因進行分析，可以為預測胰腺癌的預后提供有力的而可靠的證據，有助于分析腫瘤的發生與發展[7]。

腫瘤血管生成的啟動由一系列生長因子、細胞因子所誘發，其與腫瘤的生長、轉移及預后顯著相關[8]。本研究顯示，TGF-β1、S100A11在癌旁組織及癌組織中的陽性表達率間具有顯著差異 (P<0.05)。TGF-β1是1種多肽二聚體，可調節細胞生長平衡，促進細胞外基質合成和細胞分化等[9]，大量研究顯示，慢性胰腺炎及胰腺癌組織中TGF-β1及其受體的表達顯著高于正常胰腺組織，TGF-β1可作用于鄰近成纖維細胞分泌更多細胞外基質以促進瘤組織周圍血管生成[10]。也有研究表明TGF-β1是1種腫瘤抑制子，可阻滯早期腫瘤細胞從G0期進入S期，但在惡性腫瘤晚期，TGF-β1可通過刺激血管生成，提供適宜腫瘤生長的環境[11]。S100A11也具有抑制及促進腫瘤生長的雙重調節作用，在乳腺癌、肝癌、甲狀腺癌中都呈現異常表達情況[12]。

不同病理類型、臨床分期的胰腺癌患者，采用相同的治療方案能得到不同的預后，為此需要積極建立更加有效的胰腺癌判定診斷方法，從而指導胰腺癌的臨床工作。TGF-β1過表達可使得腫瘤更具侵襲性，TGF-β1表達增加可通過間接的旁分泌、鄰分泌機理，刺激腫瘤內血管生成，上調細胞外基質降解蛋白，利于腫瘤細胞浸潤與轉移[13]。S100A11可促進p53降解，導致依賴p53的抑癌活性下降，可介導p21生成，引起p21介導p53依賴的細胞周期G1期阻滯[14]。本研究顯示，TGF-β1與S100A11在胰腺癌組織中的陽性表達率與胰腺癌的病理分期、分化程度、淋巴結轉移顯著相關(P<0.05)，Spearman 等級相關分析顯示胰腺癌組織的TGF-β1與S100A11的陽性表達呈顯著負相關性(P<0.05)。也有研究表明有S100A11過表達的腫瘤更具有侵襲性，與胰腺癌患者的腫瘤大小、淋巴結轉移呈顯著正相關[15]，如果腫瘤組織分裂旺盛，可使TGF-β1表達增高，同時TGF-β1陽性表達的胰腺癌腫瘤組織的惡性程度大，細胞增殖活躍，轉移的機會高[16]，但是具體的機制還不明確。

TGF-β1是1個預示胰腺癌發生、發展的相關指標，TGF-β1的低表達可能為胰腺癌逃脫TGF-β1負性生長調控的機制之一[17]。S100A11在細胞增殖、分化、凋亡都有一定的作用，具備細胞內和細胞外調節活性，其由活化的中性粒細胞所分泌，在炎癥損傷部位有大量表達[18]。本研究多因素非條件logistic回歸分析顯示胰腺癌組織病理分期、分化程度、淋巴結轉移都為影響TGF-β1與S100A11陽性表達的獨立危險因素(P<0.05)。隨著遺傳學損傷的不斷積累，更多的抑癌基因失活而大量的癌基因被激活后，再加上外界環境的作用，導致胰腺癌的發生，二者共同加快腫瘤發展、增加腫瘤侵襲、轉移能力。

總之，TGF-β1與S100A11在胰腺癌組織中都呈現高表達狀況，與組織的病理分期、分化程度、淋巴結轉移顯著相關，可作為判斷胰腺癌患者病情的重要指標。