EGFR基因19或21外顯子突變非小細胞肺癌的臨床病理特征及靶向治療效果

王 艷 張申眾 袁秀敏 王晉舜 張 璐 門桐林 李 雪

作為臨床上一種極為常見的惡性腫瘤疾病，非小細胞肺癌(NSCLC)具有較高的發病率與死亡率，嚴重威脅人類健康[1]。研究報道，非小細胞肺癌在肺癌疾病中占80%左右，惡性程度高，容易出現早期轉移、復發[2]，影響患者的臨床治療及預后。分子病理學研究證實，EGFR相關信號通路在肺癌發生及發展過程中有著重要的作用，其一方面影響著腫瘤細胞分化增殖、新生血管生成[3]，另一方面也影響著腫瘤細胞侵襲及轉移。目前，臨床對NSCLC的治療主要以分子靶向藥物為主[4-5]。本研究收集我院120例NSCLC患者的病例資料予以分析，總結了表皮生長因子受體(EGFR)基因19、21外顯子突變情況及NSCLC病理特征，分析了靶向治療效果，現對研究結果予以總結與匯報。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月至2017年6月我院腫瘤科收治的120例EGFR基因突變陽性NSCLC患者作為研究對象，其中男性53例，女性67例，年齡28～79歲，平均年齡為(56.4±5.2)歲。隨機數字表法對患者實施分組，觀察組與對照組各60例。2組患者年齡、性別、病理類型及臨床分期等資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，存在可比性。

1.2 納入與排除標準[6-8]

納入標準：①對入選病例給予臨床診斷及病理學檢查，診斷結果與國際NSCLC臨床診斷標準相符[9]；②該研究得到本院醫學倫理委員會的認可，入組患者均知情、同意，入組均為自愿，并按照要求在知情同意書上簽字；③病理組織EGFR基因突變顯示為陽性；④病歷資料完整；⑤患者具有較好依從性，能夠接受定期隨訪。排除標準：①伴隨嚴重器官疾病以及肝腎功能不全者；②認知功能障礙及智力障礙患者；③臨床資料不全者；④肺外存在原發性腫瘤患者；⑤存在嚴重感染及有心臟病史患者；⑥胃潰瘍患者；⑦存在藥物過敏史患者；⑧妊娠期及哺乳期婦女。

1.3 方法

1.3.1 標本選取 提取NSCLC患者病理組織切片，以6～8張為宜，對患者EGFR突變情況予以檢測，腫瘤組織切片予以甲醛固定，并實施石蠟包埋。采用切片機對病理組織進行切割，制作成為厚度為5 μm的切片。通常病理組織切片選擇要以腫瘤組織覆蓋范圍>整體切片組織50%以上為宜，將標本放置于-20 ℃環境下冷凍保存。

1.3.2 提取組織中DNA 將5～8張制備完成的病理組織切片放置于65 ℃環境下進行烤片，1 h后對病理組織進行二甲苯反復脫蠟處理，共3次，15 min/次。將其浸泡在無水乙醇中，反復3次，5 min/次。用蒸餾水予以漂洗。采用傳統手工方式實施病理切片，對非腫瘤組織進行剝脫，保留腫瘤組織，在1.5 ml Eppendorf管中刮入腫瘤組織。在Eppendorf管中加入180 μl的BufferTL與20 μl蛋白酶K，震蕩使其混合均勻，放置入60 ℃環境下水浴消化過夜。嚴格按照試劑盒說明提取標本中的DNA組織。將提取的DNA組織滴入到適量瓊脂糖凝膠中，采用電泳檢測法對已提取的DNA進行檢測，判斷提取的DNA樣本是否合格。測定樣本的260 nm及280 nm吸光度，在-20 ℃低溫環境下保存，留作備用。

1.3.3 EGFR基因19、21外顯子突變檢測 嚴格按照Gen Bank數據庫中人EGFR基因序列對EGFR外顯子19、21引物進行設計，引物的設計需要充分考慮EGFR檢測位點，聚合酶反應條件如下：94 ℃環境下給予5 min預變性處理，同樣溫度進行30 sec變性處理，溫度降至55 ℃退火30 sec，70 ℃下進行延伸45 sec，連續循環40次左右，最后70 ℃下延伸12 min。將擴增提取物滴入到瓊脂糖凝膠中，對擴增產物給予電泳檢測。然后純化處理擴增產物。將測序得到的結果與Gen Bank數據庫EGFR基因序列比較。

收集所有患者的年齡、性別、吸煙史、病理類型等一般資料，對所有患者給予定期電話隨訪，督促患者進行門診復查。

1.3.4 治療方法 對照組：給予常規治療。觀察組：給予靶向治療，患者入院第1天晚上給予250 mg吉非替尼(AstraZeneca KK Maihara Plant，國藥準字H20090759)治療，之后每天僅早上給予250 mg吉非替尼治療，連續治療1個月。

1.4 觀察指標

對EGFR基因19及21外顯子突變狀態予以檢測，比較患者EGFR基因19及21外顯子突變情況及NSCLC臨床病理特征。對2組患者臨床治療效果、中位生存期進行綜合評價。治療總有效率=完全緩解率+部分緩解率[10]。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 EGFR基因19、21外顯子突變情況比較

120例患者中EGFR基因19外顯子突變率61.7%(74/120)，顯著高于EGFR基因21外顯子突變率38.3%(46/120)，差異有統計學意義(χ2=5.376，P=0.021)。

2.2 EGFR基因19、21外顯子突變患者臨床病理特征分析

EGFR基因19、21外顯子突變患者在性別、年齡、有無吸煙史、臨床分期、有無遠處轉移、有無手術切除史方面差異無統計學意義(P>0.05)，在有無淋巴轉移、病理類型、組織類型方面的數據比較，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 EGFR基因19、21外顯子突變患者臨床病理特征分析(例，%)

2.3 觀察組與對照組患者臨床治療情況比較

治療后對療效予以隨訪與評估，發現觀察組總有效率為95.0%(57/60)，與對照組的71.7%(43/60)比較，差異有統計學意義(χ2=12.597，P<0.05)。見表2。

表2 觀察組與對照組患者臨床治療情況比較(例，%)

2.4 觀察組與對照組患者中位生存期比較

觀察組患者治療后中位生存期為(54.25±4.52)周，顯著高于對照組的(32.46±4.61)周，差異有統計學意義(t=26.143,P<0.05)。

3 討論

研究報道，肺癌患者中有80%以上屬于非小細胞肺癌，且50%以上NSCLC患者就診時已發展至晚期，部分患者病灶甚至向遠處轉移[11-12]。目前，臨床對于NSCLC的治療方案多種多樣，一般對于早期NSCLC患者建議行手術治療，而對于晚期及病灶遠處轉移患者則采用化療方案治療。

近年來，分子病理學研究不斷深入，NSCLC分子機制也逐漸明確，靶向藥物成為臨床治療NSCLC的首選。EGFR在多種腫瘤疾病中均呈現出過度表達或突變狀態，40%～80%NSCLC患者伴隨EGFR的高表達。EGFR能夠激活下游信號轉導途徑，在腫瘤細胞分化、增殖中發揮著極為重要的作用[13]，同時還能夠促進腫瘤組織新生血管生成。吉非替尼作為第1個EGFR-TKIs在NSCLC治療中得以應用。有學者在研究中提出TKIs的敏感性很大程度上取決于NSCLC病理組織EGFR有無發生突變[14-15]。在對NSCLC患者給予TKI治療前，可以對其EGFR基因突變狀態予以檢測，然后篩選出適宜靶向治療的患者。這對于抑制腫瘤進程、改善預后有著重要的意義。

EGFR位于第7號染色體短臂，共有28個外顯子，其中主要突變區域集中在18～21外顯子，90%以上為19、21外顯子突變，前者主要表現為缺失突變，后者主要為L858R突變。本研究對120例EGFR基因19或21外顯子突變NSCLC患者的病理組織切片予以檢測，結果顯示EGFR基因19外顯子突變占61.7%，顯著高于EGFR基因21外顯子突變38.3%(P<0.05)，與以往學者研究結果一致。本次研究中，觀察組治療后總有效率為95.0%，與對照組的71.7%比較，差異有統計學意義(P<0.05)，說明靶向治療效果較好，對患者有重要的臨床意義。

綜上所述，EGFR基因突變類型與NSCLC臨床病理特征密切相關，通過對患者EGFR基因19、21外顯子突變的檢測，能夠為靶向治療提供參考。