不同配伍比例刺五加和樹舌的鎮(zhèn)靜催眠作用

盧銘 王鳳芝 李琪

摘要[目的]探究不同配伍比例刺五加-樹舌靈芝醇提物對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜催眠作用的影響。[方法]不同配伍比例的刺五加和樹舌靈芝用75%乙醇作為溶劑，料液比為1∶20，利用冷凝回流提取1.5 h后得各配伍比例的乙醇提取物;利用差熱分析儀對(duì)得到的不同配伍比例的乙醇提取物進(jìn)行分析;應(yīng)用苯巴比妥鈉所致小鼠睡眠的方法，研究刺五加和樹舌靈芝乙醇提取物改善睡眠的量效關(guān)系。[結(jié)果]差熱分析結(jié)果顯示，刺五加和樹舌靈芝配比為1∶5和5∶1時(shí)，2種藥物配伍后的相互作用明顯。鎮(zhèn)靜催眠作用結(jié)果顯示，配伍比例為1∶5、3∶1、4∶1、5∶1小鼠的體重依次顯著增大（P<0.05）;配伍比例為1∶1、1∶2、2∶1、1∶3、1∶4、1∶5、3∶1、4∶1、5∶1的給藥組抑制小鼠的活動(dòng)次數(shù)（P<0.05）依次增大;閾下劑量苯巴比妥鈉對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜催眠試驗(yàn)結(jié)果顯示，所有給藥組均有鎮(zhèn)靜催眠效果;閾上劑量苯巴比妥鈉對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜催眠試驗(yàn)結(jié)果顯示，配伍比例為1∶1、1∶2、2∶1、1∶3、1∶4、1∶5、3∶1、4∶1、5∶1的給藥組鎮(zhèn)靜催眠作用（P<0.05）依次增大。[結(jié)論]刺五加-樹舌靈芝配比為5∶1的醇提物對(duì)小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用效果最好，其作用優(yōu)于單味藥刺五加組和單味藥樹舌靈芝組。

關(guān)鍵詞刺五加;樹舌靈芝;翻正反射;醇提物;鎮(zhèn)靜催眠

中圖分類號(hào)R285文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611（2019）03-0150-04

doi∶10.3969/j.issn.0517-6611.2019.03.048

刺五加是五加科（Araliaceae）五加屬（Acanthopanax）刺五加[Acanthopanax senticosus（Rupr. Maxim.） Harms.]的干燥根及根莖或莖，又名坎拐棒子、一百針、老虎潦，在民間很早就供藥用[1]，具有鎮(zhèn)靜催眠[2]、抗炎[3-4]、抗氧化[5-6]、抗輻射[7]、降糖[8]、抗疲勞[4]、抗缺氧[6]等作用。樹舌為靈芝屬（Ganoderma Karst.） 樹舌靈芝（Ganoderma applanatumn）的子實(shí)體，別名樹舌、平蓋靈芝、扁目靈芝[9]，具有抗氧化[10]、免疫調(diào)節(jié)[11]、抗腫瘤[12-14]、保肝[15]、抗菌[16]等作用。

神經(jīng)衰弱是由于長(zhǎng)期處于緊張和壓力下，出現(xiàn)精神易興奮和腦力易疲乏等現(xiàn)象?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)尚無特效藥治療，西藥一般治療效果佳，但有一定副作用。中藥中有許多具有安神功效的藥物，毒副作用小，但需長(zhǎng)期服用，療效慢。

樹舌靈芝性涼、刺五加性溫，具有清肝熱、補(bǔ)肝腎的作用。故筆者將二者聯(lián)合使用對(duì)鎮(zhèn)靜催眠作用進(jìn)行研究，為得到一種療效好、見效快的鎮(zhèn)靜催眠復(fù)方中藥提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為清潔級(jí)健康雄性昆明小鼠156只，體重18～22 g，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供，合格證書SCXK（黑）-2013-001。分籠飼養(yǎng)小鼠，飼料供給充足、不限飲水，室溫20～25 ℃，適應(yīng)環(huán)境7 d后使用。

1.1.2試材。刺五加根及根莖，采自黑龍江省佳木斯市樺南縣，樹舌靈芝子實(shí)體采自佳木斯市湯原縣大亮子河林場(chǎng)，二者經(jīng)佳木斯大學(xué)王麗紅教授認(rèn)定為五加科五加屬刺五加和靈芝屬樹舌靈芝。二者經(jīng)粉碎機(jī)打磨成粗粉，供試驗(yàn)用。

1.1.3試劑。乙醇，分析純，天津市凱通化學(xué)試劑有限公司;地西泮注射液，批號(hào)1610212，天津金耀藥業(yè)有限公司;苯巴比妥鈉注射液，批號(hào)17121301，天津金耀藥業(yè)有限公司。

1.1.4儀器與設(shè)備。RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠;FA2004分析天平儀，上海越平科學(xué)儀器（蘇州）制造有限公司;YLS-1A多功能小鼠自主活動(dòng)記錄儀，濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司;高溫差熱分析儀，上海精密儀器儀表有限公司。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1刺五加-樹舌靈芝提取物的制備。

刺五加和樹舌靈芝按配比1∶1（1號(hào)）、1∶2（2號(hào)）、1∶3（3號(hào)）、1∶4（4號(hào)）、1∶5（5號(hào)）、5∶1（6號(hào)）、4∶1（7號(hào)）、3∶1（8號(hào)）、2∶1（9號(hào)）、刺五加（10號(hào)）、樹舌靈芝（11號(hào)），精確稱取各配伍比例的刺五加和樹舌靈芝共3.00 g，采用回流提取法，將原料放入500 mL圓底燒瓶中，使用75%乙醇溶液為提取溶劑，料液比1∶20，加入60 mL乙醇，提取時(shí)間1.5 h，抽濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去部分乙醇，再將所得濾液用電熱套和坩堝蒸干溶液。

1.2.2差熱分析測(cè)定方法。

此次試驗(yàn)研究不同配比刺五加-樹舌靈芝復(fù)方制劑中活性成分，試驗(yàn)條件差熱量程±5 μV;升溫速率20 K/min;升溫范圍0～200 ℃;氣氛為靜態(tài)空氣;參比物為空坩堝。

1.2.3刺五加-樹舌靈芝對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜催眠作用的研究。

1.2.3.1刺五加-樹舌靈芝提取物的制備。

刺五加和樹舌靈芝按配比1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、5∶1、4∶1、3∶1、2∶1精確稱取刺五加-樹舌靈芝共11.25 g，將原料放入500 mL錐形瓶中，使用75%乙醇溶液為提取溶劑，料液比1∶20，加入乙醇225 mL，浸泡24 h后，置于圓底燒瓶中，采用冷凝回流提取法，提取時(shí)間1.5 h，抽濾，將所得濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸干乙醇后，濃縮至浸膏，用所制備的羧甲基纖維素鈉溶液定容至25 mL容量瓶中，制成濃度為0.45 g/mL的混懸液，以待使用。

1.2.3.2小鼠給藥劑量的計(jì)算。

計(jì)算小鼠給藥劑量，通過人所需給藥劑量折算出小鼠給藥劑量。小鼠的給藥劑量（mg/kg）=W×人的臨床用量（mg/kg）。人的臨床用量為0.5 mg/kg，W=9.01，小鼠給藥劑量4.505 mg/kg，含生藥量為11.25 mg，小鼠體重20 g計(jì)算，給藥劑量0.090 1 mg/只。

1.2.3.3動(dòng)物分組及給藥方法。

取體重18～22 g昆明小鼠156只，隨機(jī)分為13組，每組12只，分別為空白（生理鹽水）、對(duì)照組（羥甲基纖維素鈉）、地西泮陽性對(duì)照組（0.15 mg/kg）、1∶1組、1∶2組、1∶3組、1∶4組、1∶5組、5∶1組、4∶1組、3∶1組、2∶1組、刺五加組、樹舌靈芝組。灌胃給藥，每日1次，灌胃劑量為每20 g灌胃0.2 mL。

（1）各給藥組對(duì)小鼠體重的影響。按上述分組給藥，連續(xù)給藥7 d，分別記錄每天小鼠體重的變化。

（2）各給藥組對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)的影響。按上述分組給藥，連續(xù)給藥7 d，末次給藥1 h 后，將各組小鼠分別放入自主活動(dòng)儀暗箱中，適應(yīng)環(huán)境2 min后，記錄各組小鼠5 min 內(nèi)自主活動(dòng)次數(shù)，比較組間差異。

1.2.3.4不同給藥組對(duì)閾上劑量苯巴比妥鈉的小鼠催眠作用的影響。

將78只實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為13組，每組6只，分別標(biāo)號(hào)為刺五加∶樹舌靈芝1∶1為1號(hào)、1∶2為2號(hào)、1∶3為3號(hào)、1∶4為4號(hào)、1∶5為5號(hào)、5∶1為6號(hào)、4∶1為7號(hào)、3∶1為8號(hào)、2∶1為9號(hào)、刺五加為10號(hào)、樹舌靈芝為11號(hào)、空白、對(duì)照?？瞻捉M給予相同體積的羥甲基纖維素鈉，對(duì)照組給予相同劑量的地西泮，連續(xù)灌胃7 d。第7天灌胃后，將13組實(shí)驗(yàn)小鼠皮下注射閾上劑量的苯巴比妥鈉。以小鼠翻正反射消失時(shí)間記為睡眠潛伏期，以翻正反射消失的持續(xù)時(shí)間記為睡眠時(shí)間，分別記錄各組入睡的睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間。

1.2.3.5不同給藥組對(duì)閾下劑量苯巴比妥鈉的小鼠催眠作用的影響。

將78只實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為13組，每組6只，分別標(biāo)號(hào)為刺五加∶樹舌靈芝1∶1為1號(hào)、1∶2為2號(hào)、1∶3為3號(hào)、1∶4為4號(hào)、1∶5為5號(hào)、5∶1為6號(hào)、4∶1為7號(hào)、3∶1為8號(hào)、2∶1為9號(hào)、刺五加為10號(hào)、樹舌靈芝為11號(hào)、空白、對(duì)照。空白組給予相同體積的羥甲基纖維素鈉，對(duì)照組給予相同劑量的地西泮，連續(xù)灌胃7 d。第7天灌胃后，將13組實(shí)驗(yàn)小鼠皮上注射閾下劑量的苯巴比妥鈉，分別記錄各組入睡的睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以±S表示，組間數(shù)據(jù)運(yùn)用Duncans multiple range test方法進(jìn)行單因素方差分析。根據(jù)P<0.05判斷顯著性。

2結(jié)果與分析

2.1差熱分析法測(cè)定分析刺五加-樹舌靈芝提取物

根據(jù)差熱分析法（DTH）對(duì)不同比例刺五加和樹舌靈芝醇提取物反應(yīng)后的放熱情況（圖1）可知，配伍后的藥物曲線和單獨(dú)刺五加、單獨(dú)樹舌靈芝曲線明顯不同，經(jīng)分析后發(fā)現(xiàn)5號(hào)、6號(hào)曲線變化明顯，混合后的產(chǎn)物在刺五加和樹舌單獨(dú)提取物之間，且二者圖形相近，所產(chǎn)生的物質(zhì)相近，故將二者反應(yīng)后的曲線和單獨(dú)刺五加與樹舌靈芝曲線作為對(duì)比。

2.2刺五加-樹舌靈芝對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜催眠作用研究

2.2.1各給藥組對(duì)小鼠體重的影響。

根據(jù)小鼠晝伏夜出的習(xí)性，選擇早上固定時(shí)間灌胃給藥，連續(xù)灌胃7 d，并記錄每天的小鼠體重，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。

2.2.2各給藥組對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)的影響。從表2可看出，與給藥前相比，給藥后的1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)、4號(hào)、5號(hào)、6號(hào)、7號(hào)、8號(hào)、9號(hào)、10號(hào)、11號(hào)，小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)均比給藥前低。給藥后各給藥組與空白組相比，10號(hào)和11號(hào)無顯著性差異（P>0.05），6號(hào)能顯著減少小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)（P<0.05），其次為7號(hào)、8號(hào)、9號(hào)、3號(hào)、4號(hào)、5號(hào)、1號(hào)、2號(hào)。結(jié)果見表2。

2.2.3不同給藥組對(duì)閾上劑量苯巴比妥鈉鎮(zhèn)靜催眠作用的影響。

觀察記錄各給藥組閾上劑量苯巴比妥鈉對(duì)小鼠睡眠潛伏時(shí)間和睡眠時(shí)間（表3），與空白組比較，各給藥組均縮短了小鼠入睡的潛伏時(shí)間。其中6號(hào)最顯著（P<0.05），10號(hào)和11號(hào)對(duì)小鼠的潛伏期幾乎沒有影響（P>0.05），其余各組之間差異不大;與空白組比較，6號(hào)顯著延長(zhǎng)了小鼠睡眠時(shí)（P<0.05），10號(hào)和11號(hào)對(duì)小鼠的睡眠時(shí)間幾乎沒有影響（P>0.05）。

2.2.4不同給藥組對(duì)閾下劑量苯巴比妥鈉鎮(zhèn)靜催眠作用的影響。從表4可看出，與空白組相比，對(duì)照組及1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)、4號(hào)、5號(hào)、6號(hào)、7號(hào)、8號(hào)、9號(hào)、10號(hào)、11號(hào)，對(duì)閾下劑量苯巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠催眠均表現(xiàn)出協(xié)同作用，且6號(hào)小鼠睡眠潛伏期顯著縮短（P<0.05），組間比較顯示，3號(hào)、4號(hào)、5號(hào)、7號(hào)、8號(hào)之間無顯著性差異（P>0.05），9號(hào)、10號(hào)、11號(hào)、1號(hào)、2號(hào)之間無顯著性差異（P>0.05）;6號(hào)顯著延長(zhǎng)小鼠的睡眠時(shí)間（P<0.05），組間比較顯示，7號(hào)和8號(hào)之間無顯著性差異（P>0.05），3號(hào)、4號(hào)、5號(hào)、2號(hào)、9號(hào)之間無顯著性差異（P>0.05），1號(hào)、2號(hào)、9號(hào)之間無顯著性差（P>0.05），10號(hào)和11號(hào)之間無顯著性差異（P>0.05）。

3結(jié)論

此次試驗(yàn)將刺五加和樹舌靈芝按1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、5∶1、4∶1、3∶1、2∶1不同比例配伍，用75%乙醇為溶劑，料液比為1∶20，采用冷凝回流提取法，旋蒸除去多余乙醇，濃縮，提取其有效成分，并與單獨(dú)刺五加和樹舌靈芝提取物進(jìn)行對(duì)比，利用差熱分析儀檢測(cè)二者混合后是否有新物質(zhì)產(chǎn)生，分析結(jié)果顯示刺五加和樹舌靈芝配比為5∶1和1∶5的效果最為明顯，且兩者所提取的化學(xué)物質(zhì)基本相同，該方法操作簡(jiǎn)單、用藥量少，能準(zhǔn)確檢測(cè)產(chǎn)物的吸放熱情況，為接下來試驗(yàn)結(jié)果提供依據(jù)。

經(jīng)對(duì)不同配伍比例刺五加和樹舌靈芝醇提物對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜催眠作用的研究，其中包括各給藥組對(duì)小鼠行為學(xué)影響的試驗(yàn)、小鼠體重變化情況，苯巴比妥鈉閾上及閾下鎮(zhèn)靜催眠試驗(yàn)，研究其提取物是否對(duì)小鼠具有鎮(zhèn)靜催眠效果，小鼠行為學(xué)試驗(yàn)結(jié)果顯示，1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、5∶1、4∶1、3∶1、2∶1對(duì)小鼠的活動(dòng)均有抑制效果，組間比較刺五加-樹舌靈芝配比為5∶1組效果最為明顯（P<0.05）;直接睡眠試驗(yàn)結(jié)果顯示，1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、5∶1、4∶1、3∶1、2∶1組均有鎮(zhèn)靜作用，但不能致小鼠直接睡眠;苯巴比妥鈉閾下鎮(zhèn)靜催眠試驗(yàn)結(jié)果顯示，1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、5∶1、4∶1、3∶1、2∶1能縮短小鼠睡眠潛伏期（P<0.05）及延長(zhǎng)小鼠的睡眠時(shí)間，組間比較刺五加-樹舌靈芝配比為5∶1組效果最為明顯（P<0.05）;苯巴比妥鈉閾上鎮(zhèn)靜催眠試驗(yàn)結(jié)果顯示，1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、5∶1、4∶1、3∶1、2∶1組可延長(zhǎng)小鼠的睡眠時(shí)間（P<0.05），但是刺五加-樹舌靈芝配比為5∶1組效果最為明顯（P<0.05）。

試驗(yàn)證明刺五加和樹舌靈芝配伍可顯著提高鎮(zhèn)靜催眠效果，刺五加與樹舌靈芝醇提物配比為5∶1時(shí)鎮(zhèn)靜催眠效果最為顯著，療效最好，具有開發(fā)新藥的依據(jù)。

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