尖孢鐮刀菌古巴?；?號(hào)生理小種的磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白1（FoSTIP1）基因的克隆及表達(dá)分析

齊興柱 汪軍 劉磊

摘? 要? 本研究克隆了尖孢鐮刀菌古巴?；?號(hào)生理小種（Fusarium oxysporum f. sp. cubense race 4， Foc4）轉(zhuǎn)錄因子FoSkn7一個(gè)候選的下游基因，結(jié)果表明該基因cDNA編碼序列全長(zhǎng)1737 nt，編碼一個(gè)含578個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。對(duì)其編碼的蛋白進(jìn)行了結(jié)構(gòu)域和進(jìn)化分析，結(jié)果表明該蛋白質(zhì)含有脅迫誘導(dǎo)蛋白（stress-in-ducible protein-1， STI1）結(jié)構(gòu)域和多個(gè)三角形4肽重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域（tetratricopeptide repeat， TPR）。該蛋白質(zhì)與尖孢鐮刀菌番茄專化型的磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白1（STIP1）親緣關(guān)系最近，因此初步將其確定為Foc4的磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白并命名為FoSTIP1。采用相對(duì)熒光定量PCR方法分析了該基因在野生型B2菌株入侵香蕉苗根部及在外源H2O2誘導(dǎo)情況下的表達(dá)變化，也分析了FoSKN7基因缺失突變體中該基因在外源H2O2誘導(dǎo)情況下的表達(dá)。結(jié)果表明在入侵香蕉苗根部及在外源H2O2誘導(dǎo)情況下，B2菌株中的FoSTIP1表達(dá)均有上調(diào)，而FoSKN7基因缺失突變體中FoSTIP1即使有H2O2誘導(dǎo)，其表達(dá)也遠(yuǎn)低于B2菌株中的FoSTIP1。推測(cè)FoSTIP1可能是FoSkn7的靶基因并參與了Foc4抗外源氧化脅迫。

關(guān)鍵詞? 尖孢鐮刀菌古巴?；?號(hào)生理小種;磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白;表達(dá)特性

中圖分類號(hào)? S432.4? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? A

當(dāng)細(xì)胞面臨各種環(huán)境脅迫時(shí)，細(xì)胞內(nèi)熱休克蛋白基因被激活并表達(dá)，導(dǎo)致熱休克蛋白大量產(chǎn)生。熱休克蛋白主要作為分子伴侶參與到蛋白質(zhì)的折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)及組裝等過程，能恢復(fù)或加速清除細(xì)胞內(nèi)已變性的蛋白質(zhì)進(jìn)而穩(wěn)定細(xì)胞結(jié)構(gòu)[1]。近年來的研究表明，分子伴侶如Hsp70和Hsp90生物功能的發(fā)揮受到各種輔助伴侶分子的調(diào)控。磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白（stress-inducible protein 1， STIP1）是迄今為止研究最為廣泛的輔助伴侶分子，也被稱為熱休克蛋白70/90組織蛋白[heat shock protein （HSP） 70/90 organizing protein， HOP]，是一個(gè)62.6 ku蛋白，有9個(gè)三角形4肽重復(fù)結(jié)構(gòu)域和一個(gè)核定位信號(hào)（NLS）[2]。該蛋白能夠直接與Hsp70和Hsp90相結(jié)合，并且作為連接體分子，把細(xì)胞質(zhì)中的Hsp70-client蛋白復(fù)合物轉(zhuǎn)運(yùn)到Hsp90上[3]。STIP1的TRR結(jié)構(gòu)域在Hsp90伴侶機(jī)制中參與Hsp70和Hsp90的結(jié)合[4]。這種蛋白質(zhì)復(fù)合物參與了多種細(xì)胞過程，包括轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)折疊、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、病毒復(fù)制、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分裂[5-6]。核定位信號(hào)序列允許STIP1在細(xì)胞周期蛋白激酶的控制下從細(xì)胞質(zhì)運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞核[2]。

然而，作為一個(gè)熱休克蛋白的輔助伴侶分子，除了釀酒酵母中報(bào)道過STIP1[7]之外，目前在植物和真菌中，無論國(guó)內(nèi)還是國(guó)外的文獻(xiàn)中都未見關(guān)于STIP1的報(bào)道。

Foc4是香蕉枯萎病的強(qiáng)致病性病原菌，這種病原菌對(duì)海南省乃至我國(guó)香蕉種植業(yè)造成了重大影響。本實(shí)驗(yàn)室在研究Foc4抗外源氧化脅迫的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)過程中獲得了一個(gè)候選的cDNA片段與已報(bào)道STIP1基因高度同源[7]，同時(shí)發(fā)現(xiàn)在FoSkn7轉(zhuǎn)錄因子缺失突變體中，該基因的表達(dá)大幅下調(diào)。因此，筆者將該預(yù)測(cè)基因命名為FoSTIP1，并對(duì)其進(jìn)行了克隆鑒定和表達(dá)分析，為進(jìn)一步開展該類蛋白作用機(jī)理研究提供基礎(chǔ)。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 實(shí)驗(yàn)用菌株和香蕉苗? Foc4的野生型B2菌株分離自海南省樂東縣香蕉枯萎病病株，由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所提供。FoSKN7基因缺失突變體由本實(shí)驗(yàn)室制備。袋裝巴西蕉（Musa AAA， Cavendish cv. Brazil）組培苗購自海南省儋州市組培中心。

1.1.2? 試劑、引物及培養(yǎng)基? 植物總RNA提取試劑盒，PCR Mix反應(yīng)混合物，反轉(zhuǎn)錄試劑盒[FastKing RT Kit （With gDNase）]和熒光定量PCR試劑盒[Talent qPCR PreMix （SYBR Green）]均為北京天根生化科技有限公司的產(chǎn)品。PCR引物（表1）由上海生工生物科技有限公司合成。真菌菌株的培養(yǎng)采用葡萄糖-馬鈴薯培養(yǎng)基（potato- glucose-agar medium， PDA; potato-glucose-dextrose broth medium， PDB）。香蕉苗采用自來水培養(yǎng)。

1.2? 方法

1.2.1? 菌株及香蕉苗培養(yǎng)方法? 為了提取H2O2處理的菌體總RNA，將Foc4野生型B2菌株及FoSKN7基因缺失突變體于PDB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)6 d，然后在超凈工作臺(tái)中用6層擦鏡紙過濾培養(yǎng)物并收集濾液（即孢子液）然后按孢子與液體PDB培養(yǎng)基為1∶50的比例將孢子液接種到新的PDB培養(yǎng)基中，28 ℃、120 r/min振蕩培養(yǎng)12 h，然后加入H2O2至終濃度10 μmol/mL，繼續(xù)振蕩培養(yǎng)5 h收集菌體，液氮研磨，提取總RNA。將袋裝香蕉組培苗轉(zhuǎn)入透明塑料杯中，自來水室溫培養(yǎng)10 d左右直到香蕉苗長(zhǎng)出幼嫩的白根，再將苗轉(zhuǎn)入新的塑料杯，并加入如前所述培養(yǎng)12 h的B2菌株，繼續(xù)室溫放置24 h，收集菌體及香蕉苗根的混合物，液氮研磨，提取總RNA，檢測(cè)目的基因在病原菌入侵香蕉苗根部時(shí)的表達(dá)變化情況。為了檢測(cè)目的基因在FoSKN7基因缺失突變體菌株中的表達(dá)差異，突變體和B2菌株分別用H2O2（5和10 μmol/mL）處理5 h后再提取總RNA。

1.2.2? FoSTIP1基因組編碼區(qū)、啟動(dòng)子和cDNA序列的克隆及生物信息學(xué)分析方法? 利用Foc4的FoSKN7基因缺失突變體菌株轉(zhuǎn)錄組信息獲得了1個(gè)表達(dá)下調(diào)明顯的熱休克蛋白基因的cDNA信息。利用該cDNA信息在NCBI網(wǎng)站查找同源序列的方法，獲得了一段與Foc4有較高同源性的水稻惡苗病菌（Fusarium fujikuroi IMI 58289 ）的基因組序列（GenBank登錄號(hào)： HF679023.1），以此序列為模板設(shè)計(jì)了2對(duì)引物（表1），分別用于PCR擴(kuò)增目的基因的基因組序列及其上游啟動(dòng)子區(qū)的序列。利用其cDNA序列信息在其起始密碼子和終止密碼子附近設(shè)計(jì)2對(duì)引物（表1），并以10 μmol/mL H2O2誘導(dǎo)5 h的總RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，采用鑲嵌PCR方法擴(kuò)增、克隆并測(cè)序Foc4的STIP1基因的cDNA序列。利用目的基因的cDNA序列預(yù)測(cè)的蛋白質(zhì)序列在NCBI中進(jìn)行結(jié)構(gòu)域分析并查找了其他物種中與該蛋白質(zhì)序列類似的蛋白。參考相關(guān)文獻(xiàn)[8-9]分析了啟動(dòng)子序列中FoSkn7轉(zhuǎn)錄因子可能的結(jié)合位點(diǎn)。

所應(yīng)用的生物信息學(xué)分析軟件包括：NCBI blast在線軟件http：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast. Cgi;NCBI結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)在線軟件CDD http：//www. ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi?；蚪Y(jié)構(gòu)在線預(yù)測(cè)軟件softberry：http：//linux1.softberry. com/。Clustal X軟件對(duì)Foc4的STIP1蛋白序列及所獲得的同源蛋白序列進(jìn)行多重序列比對(duì)，以鑒定它們之間的同源性;MEGA 10軟件對(duì)所獲得的序列構(gòu)建了鄰位相接的系統(tǒng)發(fā)育樹，并用Bootstrap方法（Bootstrap method; model： P-distance; 1000 replicates; seed=64238）對(duì)該樹進(jìn)行分析。

1.2.3? 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析基因表達(dá)? 按植物總RNA提取試劑盒說明書提取處理后菌株的總RNA，然后反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA第一鏈，利用熒光定量PCR試劑盒[Talent qPCR PreMix （SYBR Green）]進(jìn)行相對(duì)熒光定量PCR分析，所用引物為：5-STyg、3'-STyg，5-Actin、3-Actin（表1）。PCR反應(yīng)體系按照熒光定量PCR試劑盒說明書配制。PCR反應(yīng)在BIO-RAD公司的Mini OpticonTM Rreal-Time PCR System上進(jìn)行。PCR熱循環(huán)條件如下：94 ℃變性30 s;退火溫度設(shè)梯度溫度48～50 ℃，并退火15 s;72 ℃延伸15 s;然后讀取熒光值，重復(fù)40個(gè)循環(huán);最后從45～90 ℃，每隔0.2 ℃讀取溶解曲線熒光值，每讀數(shù)一次，停留2 s。運(yùn)行完畢后，從Opticon Monitor 3.1軟件讀取C（t）值，以β-actin基因作為內(nèi)參對(duì)照，檢測(cè)目的基因在野生型菌株入侵香蕉苗以及H2O2處理時(shí)的表達(dá)水平時(shí)，采用2ΔC（t）法計(jì)算，檢測(cè)目的基因在FoSKN7基因缺失突變體菌株中的表達(dá)水平時(shí)，采用2ΔΔC（t）法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)水平。

2? 結(jié)果與分析

2.1? FoSTIP1基因的克隆、序列分析及蛋白質(zhì)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)分析

在篩選Foc4抗外源氧化脅迫的功能基因的過程中獲得了一個(gè)候選基因（命名為FoSTIP1）的cDNA片段，通過輸入Genbank進(jìn)行blast比對(duì)，發(fā)現(xiàn)與水稻惡苗病菌（Fusarium fujikuroi IMI 58289，基因組登錄序列號(hào)：HF679023.1）高度同源。因此，以該水稻惡苗病菌同源序列為模板，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增成功獲得了FoSTIP1的基因組編碼區(qū)序列及上游啟動(dòng)子序列，其中，基因組編碼區(qū)序列的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)2113 nt，上游啟動(dòng)子序列PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)2221 nt，2個(gè)DNA片段部分重疊，測(cè)序后經(jīng)序列比對(duì)分析，最終鑒定該基因組編碼區(qū)序列1902 nt， 上游啟動(dòng)子序列1501 nt。經(jīng)與水稻惡苗病菌基因組相應(yīng)序列比對(duì)，同源性達(dá)90%，將該序列遞交到GenBank，獲得登錄序列號(hào)：MG742355。

將上述克隆及測(cè)序獲得的FoSTIP1基因組序列信息輸入到softberry基因結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)網(wǎng)站，選擇了4個(gè)物種模式（Fusraium， Glarea_lozoyensis， Grosmannia_clavigera和Fusraiumgraminearum）預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)錄序列，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以前3個(gè)物種模式為參照，預(yù)測(cè)的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)存在差異，但參照3個(gè)物種模式均預(yù)測(cè)到一個(gè)長(zhǎng)1737 nt的ORF，編碼一個(gè)由578個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)，預(yù)測(cè)該蛋白質(zhì)等電點(diǎn)pI=5.50，分子量為64.35127 ku，將該ORF序列與FoSTIP1（轉(zhuǎn)錄組測(cè)序編號(hào)為Gene5608）的cDNA序列進(jìn)行BLAST比對(duì)，結(jié)果完全相同。利用該ORF序列，在其起始密碼子和終止密碼子附近設(shè)計(jì)引物（表1），并以10 μmol/mL H2O2誘導(dǎo)5 h的總RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，PCR擴(kuò)增、克隆及測(cè)序獲得了該基因ORF的cDNA序列。經(jīng)BLAST比對(duì)發(fā)現(xiàn)該ORF的cDNA序列與預(yù)測(cè)的cDNA序列一致，其長(zhǎng)度為1737 nt。將該序列遞交到GenBank，獲得登錄序列號(hào)：MG742356。將以Fusraium物種模式作參考預(yù)測(cè)的轉(zhuǎn)錄序列與前面得到的上游啟動(dòng)子序列及基因組編碼區(qū)序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)FoSTIP1在基因組上有4個(gè)外顯子，3個(gè)內(nèi)含子（圖1）。其中，內(nèi)含子1長(zhǎng)59 nt，內(nèi)含子2為53 nt，內(nèi)含子3長(zhǎng)52 nt。

FoSTIP1的結(jié)構(gòu)域分析表明C末端含有一個(gè)典型的脅迫誘導(dǎo)蛋白（stress-in-ducible protein-1，STI1）結(jié)構(gòu)域，多個(gè)三角形4肽重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域（tetratricopeptide repeat，TPR）（圖2）。

筆者搜索了NCBI的基因組數(shù)據(jù)庫，獲得了其他真菌中11個(gè)磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白1的蛋白序列。將所獲得的蛋白序列與我們克隆獲得的Foc4的FoSTIP1的蛋白序列一起用MEGA7.0 軟件構(gòu)建了鄰位相接樹（圖3）。進(jìn)化樹分析表明，該蛋白質(zhì)與尖孢鐮刀菌番茄專化型的磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白1（STIP1）親緣關(guān)系最近（圖3）。

2.2? FoSTIP1在外源氧化脅迫及入侵香蕉苗根部時(shí)的表達(dá)

在前期工作中，我們分別對(duì)Foc4在H2O2 （10 μmol/mL）處理5 h及入侵香蕉苗根部24 h的B2菌株進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，在未經(jīng)外源H2O2處理的B2菌株樣品中，檢測(cè)到FoSTIP1轉(zhuǎn)錄本為2037，而經(jīng)外源H2O2（10 μmol/mL）處理5 h的B2菌株樣品中，F(xiàn)oSTIP1轉(zhuǎn)錄本為5190，二者比較，log2（FC）=1.047286，表達(dá)上調(diào)。log2（FC）表示兩樣品間基因轉(zhuǎn)錄本差異倍數(shù)（Fold Change）的對(duì)數(shù)值，用于衡量表達(dá)量差異的大小，log2（FC）>0即為表達(dá)上調(diào)。在入侵香蕉苗根部24 h的B2菌株樣品中，檢測(cè)到FoSTIP1轉(zhuǎn)錄本為4197，與未經(jīng)處理的B2菌株樣品中FoSTIP1轉(zhuǎn)錄本數(shù)量比較，log2（FC）=1.042924，表達(dá)上調(diào)。

為了驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)的可靠性，采用半定量RT-PCR技術(shù)分析了上述2種條件下FoSTIP1的表達(dá)。分析以β-actin基因作為內(nèi)參對(duì)照，采用2ΔC（t）法計(jì)算。結(jié)果如圖4所示，與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果一致。其中，在外源H2O2（10 μmol/mL）處理5 h的B2菌株中FoSTIP1的表達(dá)量約為對(duì)照樣品中的2.201倍，入侵香蕉苗根部24 h的B2菌株中，F(xiàn)oSTIP1的表達(dá)量約為對(duì)照樣品中的1.878倍（圖4）。

2.3? FoSTIP1調(diào)控機(jī)理的初步分析

分析Foc4的FoSKN7基因缺失突變體菌株轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在FoSKN7基因缺失突變體菌株中檢測(cè)到FoSTIP1轉(zhuǎn)錄本為287，而野生型B2菌株樣品中，F(xiàn)oSTIP1轉(zhuǎn)錄本為2217，二者比較，log2（FC）= 2.97505，表達(dá)下調(diào)顯著。半定量RT-PCR分析結(jié)果如圖5所示，在用5 μmol/mL H2O2處理5 h的情況下，F(xiàn)oSKN7基因缺失突變體中FoSTIP1的相對(duì)表達(dá)量約為野生型B2菌株2/3，在用10 μmol/mL H2O2處理5 h的情況下，F(xiàn)oSKN7基因缺失突變體中FoSTIP1的相對(duì)表達(dá)量約為野生型B2菌株1/3。表明即使有外源氧化脅迫存在的情況下的情況下，F(xiàn)oSKN7基因缺失突變體中FoSTIP1的表達(dá)量相對(duì)B2菌株也大幅下調(diào)。

He等[8]報(bào)道了Skn7能結(jié)合到其靶基因（氧化脅迫應(yīng)答基因）啟動(dòng)子區(qū)特異結(jié)合位點(diǎn)（5'-GGCNNGGC-3'， 5'-GGCNGGC-3'， 5'-GGCN A A-3'， 或5'-GGCNNAGA-3'）。Morgan等[9]也報(bào)道了Skn7 能結(jié)合到其靶基因啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合位點(diǎn)（5'-CCG AAA-3'）。參考釀酒酵母中Skn7轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的堿基序列[10-11]，我們進(jìn)一步分析了FoSTIP1基因上游的啟動(dòng)子序列。結(jié)果發(fā)現(xiàn)FoSTIP1基因上游的啟動(dòng)子含有2個(gè)可能的Skn7轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合靶位點(diǎn)：5'-CCGAAA-3'（-1490），5'-GGCGAGA-3' （-770）（圖6）。

3? 討論

植物對(duì)病原菌入侵的最快防衛(wèi)反應(yīng)之一就是活性氧的急促釋放，稱為氧化爆發(fā)（oxidative burst），這種現(xiàn)象在植物抵抗病原菌入侵過程中具有重要作用。前期的研究工作中，我們發(fā)現(xiàn)Foc4在入侵位點(diǎn)會(huì)遭遇寄主細(xì)胞因活性氧迸發(fā)而產(chǎn)生的強(qiáng)氧化脅迫環(huán)境。因此，分別對(duì)H2O2處理過的以及香蕉苗根誘導(dǎo)過的Foc4野生型B2菌株，進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，以探究Foc4遭遇外源氧化脅迫時(shí)的分子應(yīng)對(duì)機(jī)制。同時(shí)，還對(duì)一個(gè)Foc4的FoSKN7基因缺失突變體進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。發(fā)現(xiàn)FoSKN7PCR反應(yīng)進(jìn)行3次重復(fù)。

基因缺失突變體中一個(gè)熱休克蛋白基因（磷酸化應(yīng)激誘導(dǎo)蛋白1，F(xiàn)oSTIP1）表達(dá)下調(diào)顯著。因此對(duì)該基因進(jìn)行了克隆鑒定，基因結(jié)構(gòu)分析，啟動(dòng)子分析。并利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)其在外源氧化脅迫存在條件下及菌株入侵香蕉苗根部條件下的表達(dá)進(jìn)行了分析。考慮到熱休克蛋白作為細(xì)胞內(nèi)的保護(hù)性蛋白，是一類提高細(xì)胞應(yīng)對(duì)外界環(huán)境脅迫能力的蛋白質(zhì)。熱休克蛋白能與很多蛋白質(zhì)分子結(jié)合，發(fā)揮多種生理功能：幫助氨基酸鏈折疊成正確的三維結(jié)構(gòu)，清除受損而無法正確折疊的氨基酸鏈，護(hù)送蛋白分子尋找目標(biāo)分子以免受到其他分子的干擾等，從而減輕各種極端環(huán)_? 標(biāo)記為Skn7的可能結(jié)合靶位點(diǎn)，其中“ATG ”為FoSTIP1開放閱讀框的起始密碼子。

境條件如高溫、干旱、強(qiáng)氧化脅迫、UV線照射等對(duì)細(xì)胞的損害。所以，當(dāng)細(xì)胞面臨各類環(huán)境脅迫時(shí)，第一反應(yīng)就是引起多種熱休克蛋白表達(dá)上調(diào)[11]。與此相一致，本研究中FoSTIP1在外源氧化脅迫及香蕉苗根部誘導(dǎo)條件下的表達(dá)均大幅上調(diào)。在高等哺乳動(dòng)物體內(nèi)，STIP1也是一個(gè)重要的分子伴侶，其兩端分別與Hsp70和Hsp90相連，對(duì)于腫瘤細(xì)胞發(fā)生、脅迫反應(yīng)和細(xì)胞增殖分化等均具有重要的調(diào)節(jié)作用。目前，STIP1作為卵巢癌發(fā)生的一種新的標(biāo)志物被廣泛研究和報(bào)道[12-14]。但是在植物和真菌中，除酵母以外未見有關(guān)于STIP1功能研究的報(bào)道。

考慮到Skn7轉(zhuǎn)錄因子是一個(gè)調(diào)控多種熱休克蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄因子，其蛋白質(zhì)包含一個(gè)N-末端的熱休克轉(zhuǎn)錄因子DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（heat-shock transcription factor-like DNA-binding domain）和一個(gè)C-末端的應(yīng)答調(diào)節(jié)受體結(jié)構(gòu)域（response regulator receiver domain）[15]，而FoSKN7的基因缺失突變體中FoSTIP1的表達(dá)大幅下調(diào)以及FoSTIP1啟動(dòng)子區(qū)存在的可能的FoSkn7結(jié)合位點(diǎn)表明FoSTIP1是FoSkn7可能的靶基因。

綜上所述，本研究的結(jié)果暗示FoSTIP1可能參與了Foc4抗外源氧化脅迫，原因如下：1、熒光定量PCR表明，在有H2O2誘導(dǎo)的情況下FoSTIP1基因表達(dá)上調(diào)。2、由于Foc4在入侵位點(diǎn)會(huì)遭遇寄主細(xì)胞因活性氧迸發(fā)而產(chǎn)生的強(qiáng)氧化脅迫環(huán)境，香蕉苗誘導(dǎo)的情況下FoSTIP1基因表達(dá)上調(diào)可能與寄主細(xì)胞中活性氧（ROS）物質(zhì)的含量增加有關(guān)。3、酵母和多種絲狀真菌中的研究表明Skn7轉(zhuǎn)錄因子是參與抗外源氧化脅迫信號(hào)通路的的重要一環(huán)[10]，而轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、熒光定量PCR及啟動(dòng)子分析均證明FoSTIP1是FoSkn7的可能的靶基因。熱休克蛋白質(zhì)的主要功能即為參與生物細(xì)胞應(yīng)對(duì)外界環(huán)境脅迫[16]，而作為一種熱休克蛋白質(zhì)，F(xiàn)oSTIP1也可能參與這些過程。

參考文獻(xiàn)

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