宣痹通瘀膠囊對異丙腎上腺素誘發大鼠心肌缺血的影響?

劉迎輝，李雙娣，隋永朋，李洪禹，劉愛東

(1.長春中醫藥大學，長春 130017；2.長春中醫藥大學附屬醫院，長春 130021； 3.長春中醫藥大學附屬第三臨床醫院，長春 130117)

冠心病又被稱為缺血性心臟病，是因冠狀動脈粥樣硬化導致血管腔變窄或阻塞，或因為冠狀動脈發生功能性改變而導致心肌缺血、缺氧甚或壞死而引起的心臟病，屬于中醫學胸痹心痛范疇[1]。宣痹通瘀膠囊是國家級名中醫、著名心血管專家黃永生教授的臨床經驗方,為治療氣滯血瘀型冠心病心絞痛的中藥復方制劑，其臨床療效顯著。本實驗通過腹腔注射大劑量異丙腎上腺素注射液(ISO)誘發大鼠心肌缺血模型，通過觀察大鼠心電圖ST段變化，天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)活性變化及心肌組織超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量變化，評價宣痹通瘀膠囊抗心肌缺血的作用，為臨床治療缺血性心臟病提供實驗依據。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

SPF級Wistar大鼠共計60只，雌雄各半，體質量200～220 g，購自長春億斯實驗動物技術有限責任公司(資格證號SCXK-(吉)2011-0004)。

1.2 藥物、主要試劑及儀器

宣痹通瘀膠囊由長春中醫藥大學附屬醫院實驗研究中心提供，每粒膠囊含生藥4.03 g(批號20141201)；通心絡膠囊由石家莊以嶺藥業股份有限公司生產，每粒膠囊含生藥0.26 g(批號國藥準字Z19980015)；ISO注射液(上海禾豐，批號41140601)；AST測定試劑盒(批號151261)、CK測定試劑盒(批號150911)、LDH測定試劑盒(批號150211)均由中生北控有限公司生產；SOD酶聯免疫試劑盒(美國R&D Systems Inc，批號20160508 A)；MDA檢測試劑盒(南京建成，批號20141015)；生理信號采集系統(澳大利亞埃德)；全自動生化分析儀(荷蘭威圖)；酶標儀(美國伯樂)；可調高速勻漿機(江蘇榮華)；臺式高速低溫離心機(德國賀利氏)。

2 方法

2.1 動物分組及給藥

實驗動物適應性飼養1周后，按隨機數字表法分為空白組、模型組、陽性對照組、宣痹通瘀高、中、低劑量組6組各10只，雌雄各半。給藥前將宣痹通瘀膠囊內容物用0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC)配制成31.08 g/100 mL、15.54 g/100 mL和7.77 g/100 mL 3個濃度的懸液，通心絡膠囊內容物用0.5%CMC配制成2.4 g/100 ml的懸液。對照組和宣痹通瘀各劑量組均按照10 ml/kg/次灌胃，每日1次，連續10 d。空白組和模型組均給予等體積的0.5%CMC懸液灌胃。

2.2 指標檢測

末次給藥后1 h，將大鼠用20%烏來糖經腹腔注射麻醉，固定于鼠板上，記錄一段正常標準Ⅱ導聯心電圖。隨后，除空白組動物腹腔注射生理鹽水4 ml/kg外，其余各組動物均腹腔注射ISO 2 mg(4ml)/kg。記錄各組注射后第1、3、5、10和30 min的肢體標準Ⅱ導聯心電圖。記錄心電圖后，經腹主動脈取血，3000rmp離心10 min分離血清。按試劑盒說明書操作要求測定血清AST、CK和LDH活性；取心臟制作心肌組織勻漿，3000 rmp離心15 min取上清液，測定心肌組織中MDA含量及SOD活性[2-3]。

2.3 統計學方法

3 結果

3.1 大鼠心電圖ST段表達比較

表1顯示，在腹腔注射ISO前各組動物的心電圖ST段呈正態均勻分布，各組間比較差異無統計學意義(P>0.05)。注射ISO后，除空白組外其他各組心電圖ST段均有不同程度上移。在注射ISO后的各測試時間點，模型組大鼠心電圖ST段上移幅度均明顯高于空白組(P<0.05或P<0.01)，表明動物造模成功；宣痹通瘀高劑量組動物心電圖ST段上移幅度均明顯低于模型組(P<0.05或P<0.01)，表明用藥有效。宣痹通瘀中、低劑量組的起效時間分別為注射ISO后3 min，以及注射ISO后5 min和10 min。對照組在注射ISO 3 min以后的各測試時間點、心電圖ST段上移幅度明顯低于模型組(P<0.05或P<0.01)。

表1 大鼠心電圖ST段表達比較

注:與空白組比較：#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較:*P<0.05，**P<0.01

3.2 各組大鼠血清心肌三酶活性、心肌SOD活性及MDA含量表達比較

表2顯示，模型組動物血清心肌三酶(AST、CK、LDH)的釋放量明顯高于空白組(P<0.05或P<0.01)，而心肌組織中MDA含量明顯高于空白組(P<0.05)，SOD活性明顯低于空白組(P<0.01)，表明已經形成心肌缺血性損傷。宣痹通瘀高、中劑量組和對照組大鼠血清心肌三酶AST、CK和LDH的活性均明顯低于模型組，心肌組織中MDA含量明顯低于模型組，SOD活性均高于模型組，差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)；宣痹通瘀低劑量組與模型組比較差異無統計學意義(P>0.05)，但有降低心肌三酶和MDA含量、增強SOD活性的趨勢。

4 討論

宣痹通瘀膠囊由6味中藥構成，分別為延胡索(酒炙)、三七、川芎、郁金、人參、冰片。方中延胡索為君藥，能行血中之氣滯，氣中之血滯，具有活血行氣止痛之功[4]；三七、川芎、郁金三藥共為臣藥，助君藥活血行氣、化瘀止痛；方中人參有佐助和佐制之功，既可補氣生血又能固護正氣，還能防止君臣藥因行氣化瘀克伐太過而耗傷正氣[5]；冰片善于走散，在方中亦為佐藥，具有散氣、散血、散火、散滯、通竅等功效[6]。在傳統治療胸痹心痛的組方中，往往著重于活血行氣止痛，未兼顧到胸痹心痛實屬本虛標實之證。而本方針對本病“虛氣留滯”的病機特點，取其“邪盛難掩本虛”之本義，治標勿忘固本[7]。其組方優勢，一是活血化瘀之藥與行氣導滯之品相配伍，可解血分、氣分之瘀滯；二是行氣之品與補氣之藥相伍，祛邪不忘扶正，使活血而不耗氣，行氣之又不傷及陰液；三是辛散有路,在活血行氣的同時給邪以出路，使氣機升降平和,氣血運行調順。本實驗研究所選用的對照藥物是與宣痹通瘀膠囊的功效、主治相近、藥物劑型及給藥途徑相似的通心絡膠囊，是吳以嶺院士在其脈絡學說理論指導下研制的治療冠心病心絞痛的臨床常用藥物，具有益氣活血、通絡止痛之功效[8]。本實驗結果顯示，宣痹通瘀膠囊高劑量組的治療效果優于通心絡膠囊，宣痹通瘀膠囊中劑量組的治療效果與通心絡膠囊接近，宣痹通瘀膠囊低劑量組的治療效果不及通心絡膠囊。

表2 各組大鼠血清心肌三酶活性、心肌SOD活性及MDA含量表達比較

注:與空白組比較：#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較:*P<0.05；**P<0.01

本實驗采用腹腔注射 ISO誘發大鼠心肌缺血模型，這種造模方法與其他心肌缺血的動物造模方法比較，具有簡單有效、成本低、可重復性強的優點，而且其病理改變非常類似人類急性心肌缺血的病變特征，是目前關于心肌缺血實驗研究中常用的造模方法[9]。心電圖ST段在等電位線上抬高程度與心肌缺血損傷程度呈正相關。同時在心肌缺血缺氧的情況下，細胞膜通透性增強導致心肌酶外漏，其中AST、CK、LDH 3種心肌酶釋放最為明顯，其釋放量與心肌損傷、缺血缺氧程度呈正比。

研究表明，氧自由基增加是導致心肌發生缺血損傷的重要機制之一。SOD是生物體內重要的抗氧化酶，是清除氧自由基的首要物質。MDA可以反映脂質過氧化的程度，心肌發生缺血性損傷后，SOD的活性下降，清除氧自由基的能力下降，引起心肌細胞內氧自由基含量增多，導致細胞膜脂質進一步過氧化，過氧化代謝產物MDA含量增加，引起心肌細胞發生嚴重損傷[10-11]。此外相關研究表明，氧自由基可以激化細胞的氧化應激反應，進而導致細胞凋亡。當氧自由基處于低濃度時可以誘使細胞發生凋亡，而當氧自由基處于高濃度時則可導致細胞壞死。心肌細胞凋亡參與心肌缺血梗死的各個階段，且細胞凋亡的程度直接決定心肌梗死的程度[12-16]。本實驗驗證了宣痹通瘀膠囊通過預防性給藥，能夠抑制動物心電圖ST段的異常抬高，減少血清心肌三酶釋放入血量，增強 SOD活性，降低 MDA含量，減輕心肌損傷程度，其治療效果與用藥呈正相關的量效關系，其作用機制可能與其能夠調節能量代謝、減少自由基生成、進而阻斷細胞凋亡有關，但具體的作用機制尚需進一步的研究探索。