PIWIL2在乳腺癌組織中的表達及臨床意義

楊睿

摘 要：目的：探討PIWIL2在乳腺癌組織中的表達，為臨床診斷和治療提供實驗依據。 方法：篩選漯河醫(yī)學高等專科學校第一附屬醫(yī)院自2013年1月至2018年11月就診的女性乳腺癌患者80 例，以及同期良性乳腺組織女性20例，利用免疫組織化學方法檢測PIWIL2在不同患者乳腺組織中的表達情況，并針對患者的年齡、月經狀況等一般臨床資料進行相關性統(tǒng)計學分析。結果：PIWIL2在乳腺癌患者癌組織中的表達顯著高于癌旁組織和良性乳腺組織（P<0.05），其表達強度與患者的年齡、月經狀況未呈現(xiàn)統(tǒng)計學相關性。結論：PIWIL2在乳腺癌組織中的表達升高，對乳腺癌的診斷和治療具有一定的臨床意義。

關鍵詞：PIWIL2 乳腺癌 免疫組化

中圖分類號：R737.9 文獻標識碼：A 文章編號：1003-9082（2019）07-0-02

乳腺癌是一種發(fā)生于乳腺腺上皮組織的多發(fā)性惡性腫瘤，99%見于女性，據國際癌癥研究機構（International Agency for Research on Cancer，IARC）統(tǒng)計，乳腺癌已成為全球女性最常見的惡性腫瘤，也是女性惡性腫瘤死亡的主要原因。中國婦女乳腺癌的發(fā)病率并不高，但由于中國人口基數(shù)較大，其發(fā)病例數(shù)位列全球前列[1]。近些年來，全球乳腺癌患者的絕對數(shù)量仍然呈現(xiàn)不斷上升的趨勢。乳腺癌的病因復雜，遺傳、年齡、酗酒、晚育、生活環(huán)境、生活方式改變等都是與之相關的因素。隨著科學技術的不斷發(fā)展進步，人們對于乳腺癌的認識逐漸加深，越來越多新的技術手段和治療理念被應用于臨床治療，使乳腺癌的治療由傳統(tǒng)的化療、手術為主，轉變?yōu)槎喾N治療手段并重的綜合治療時代。PIWIL2（P-element-induced wimpy testis like 2）屬于PIWI/AGO（P-element-induced wimpy testis/Argonaute）家族。近些年來，越來越多的研究結果表明[2]，PIWIL2在大多數(shù)惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)特異性表達，而其在除睪丸外的其他正常組織中則未見明顯表達。PIWIL2可能通過沉默或降解抑癌基因，使原癌基因激活，從而參與或導致各種組織腫瘤的發(fā)生[3]。本研究通過檢測80例女性乳腺癌患者癌組織、癌旁組織以及同期20例正常良性乳腺女性的乳腺組織中PIWIL2的表達情況，統(tǒng)計分析PIWIL2的表達與乳腺癌患者臨床病理及一般資料的相關性，探索PIWIL2在乳腺癌組織中的表達及其臨床意義。

一、材料與方法

1.研究對象

選取2013年1月至2018年11月在漯河醫(yī)學高等專科學校第一附屬醫(yī)院就診的女性乳腺癌患者80例，取其患處組織及癌旁組織，分別設為乳腺癌組和癌旁組織組，同時選取同期良性乳腺組織女性20例，設置為良性乳腺組。 觀察對象納入標準： ①初診，未曾接受放、化療或免疫治療；②女性患者，年齡25～70歲；③無其他既往腫瘤病史，目前未發(fā)現(xiàn)其他部位的腫瘤；④有確切的組織學病理報告；⑤患者本人同意參加本次調查。

2.儀器設備與試劑

石蠟切片機、自動包埋機、防脫玻片、恒溫箱、BX-51顯微鏡、顯微鏡攝像系統(tǒng)、電磁爐、移液器、濕盒；PBS緩沖液、0.3%H2O2.90%酒精、酸性蘇木素染色劑、枸櫞酸鈉修復液、松節(jié)油；兔抗人PIWIL2多克隆抗體、正常非免疫動物血清、生物素標記的Ⅱ抗、抗體稀釋液、AEC顯色試劑盒。本實驗使用的兔抗人PIWIL2多克隆抗體生產廠家為天津賽爾生物技術有限公司，AEC顯色試劑盒、正常非免疫動物血清等的生產廠家為福州邁新生物技術有限公司。

3.實驗方法

3.1采用SP三步法處理樣本

將采集好的臨床樣本連續(xù)3μm切片，使用防脫玻片攤片，在60℃恒溫箱中烘烤20min，使用松節(jié)油脫蠟后，先后浸泡于90%和80%的酒精各2min，清水中漂洗1min，蒸餾水中漂洗2min，再使用PBS緩沖液沖洗2-3次，每次5min，采用3%H2O2的去離子水靜置孵育10min，PBS沖洗2-3次，每次5min，再置于100mL0.01M的枸緣酸鈉緩沖液（PH6.0）中煮沸20min，自然冷卻20min后，用冷水至室溫，再次使用PBS緩沖液沖洗2-3次，每次5min，滴加正常山羊血清封閉液，室溫靜置孵育20min，滴加50μLI抗，室溫靜置60min，PBS沖洗3次，每次5min，滴加50μL含0.05%tween-20的Ⅱ抗，室溫靜置90min，PBS沖洗3次，每次5min，采用AEC顯色試劑盒，室溫下孵育10-30min，直至顯色達到預期，蒸餾水洗滌終止反應，PBS沖洗2次，每次5min，使用蘇木素復染5min，自來水沖洗10min，再水洗，反藍10min，甘油明膠封片。

3.2觀察并計數(shù)

PIWIL2染色的陽性表現(xiàn)為紅色或棕紅色，在光鏡下進行形態(tài)學觀察，每張組織切片隨機選取10個具有代表性的高倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞，以胞質內出現(xiàn)紅色或淡紅色判斷為陽性，計算該切片陽性細胞的百分率并評分：細胞著色≤5%為陰性表達，6%～25%為+、26%～50%為++，>51%為 +++，其中+、++、+++均屬于陽性評分。

3.3統(tǒng)計學分析

采取SPSS20.0統(tǒng)計學軟件對本文數(shù)據進行分析處理，判斷PIWIL2在不同年齡、月經狀況患者體內的表達狀況，計數(shù)資料采用χ2檢驗，當P<0.05時，表示差異具有統(tǒng)計學意義。

二、實驗結果

1.PIWIL2在乳腺癌患者癌組織、癌旁組織及良性乳腺組織中的表達情況

各組樣本中的免疫組化結果分析表明，PIWIL2蛋白在乳腺癌患者癌組織中的陽性表達率為76.3%（61/80），在癌旁組織中的陽性表達率為33.8%（27/80），PIWIL2在乳腺癌組織中的表達明顯高于癌旁組織，兩者之間的差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。PIWIL2在良性乳腺組，僅有1例顯示為弱陽性表達，表明PIWIL2在乳腺癌組織中的表達遠遠高于良性乳腺組織（P<0.01），見表2。

2.PIWIL2在乳腺癌患者中的表達與患者年齡、月經狀況等一般臨床資料的關系

將乳腺癌患者的免疫組化結果與其年齡、月經狀況等臨床一般資料進行χ2檢驗分析，結果表明，PIWIL2在不同年齡、月經狀況的患者中表達均無統(tǒng)計學差異（P>0.05），見表3。

三、討論

隨著全球生態(tài)環(huán)境的惡化、人類生存壓力的增大以及老齡化人口的不斷增多，癌癥的發(fā)病率和死亡率快速增長，癌癥已逐漸成為阻礙人類壽命增長的主要疾病。近期，國際癌癥研究中心（International Agency for Research on Cancer，IARC）發(fā)布了2018全球癌癥統(tǒng)計報告，結果顯示，2018年全球共新增癌癥病例18078957例，發(fā)病率為236.9/10萬，其中約50%集中在肺癌（11.6%）、乳腺癌（11.6%）、結直腸癌（10.2%）、前列腺癌（7.1%）和胃癌（5.7%），乳腺癌居第二位。2018年全球癌癥死亡病例共9555027例，死亡率為125.2/10萬，其中6.6%為乳腺癌，排名第五位。乳腺癌多見于女性，是女性最常見的癌癥，高居女性因癌死亡的首位，嚴重威脅女性的健康。中國女性乳腺癌的發(fā)病和死亡例數(shù)在全球位居前列，分別占全球發(fā)病和死亡總數(shù)的11.2%和9.2%[4]。女性乳腺癌的發(fā)病受生育、年齡、缺乏體力勞動、肥胖、乳腺癌認識不足等多種因素的影響，中國70%左右的乳腺癌病例發(fā)生于45歲以上的女性，且城市發(fā)達地區(qū)乳腺癌的患病率和死亡率明顯高于農村地區(qū)[5]。目前乳腺癌的治療主要采用手術、化療、放療、內分泌治療、中醫(yī)藥輔助治療等手段，但其發(fā)生和調控機制尚不完全清楚，因此對乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中各類因子的表達調控依然是腫瘤分子生物學領域研究的重要課題。近年來研究表明[6]，PIWI家族蛋白在胃癌、乳腺癌、精原細胞瘤、肝癌、胰腺癌、膠質瘤等多種腫瘤中均呈現(xiàn)異常表達，能作用于STAT3/Bcl-xl和STAT3/CynlinD1細胞信號通路，其機制之一即為PIWIL2的過度表達，導致內源性RNAi激活，信號通路增強，在各種腫瘤中發(fā)揮作用。

本研究利用免疫組化檢測PIWIL2在乳腺癌中的表達情況，發(fā)現(xiàn)PIWIL2在乳腺癌組織中的表達明顯高于癌旁組織和正常乳腺組織，并且差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示乳腺癌組織中的PIWIL2存在過表達，可能參與乳腺癌的發(fā)生及調控。結合免疫組化結果與患者的一般資料分析表明，PIWIL2在女性乳腺癌患者中的表達與年齡、月經狀況無關（P>0.05）。

綜上所述，PIWIL2在女性乳腺癌組織中高表達，且與患者的年齡、月經狀況無關，可作為乳腺癌的診斷和觀察指標，但PIWIL2作用的具體機制尚不明確，需要結合細胞生物學和分子生物學新技術，進行進一步研究，為乳腺癌的臨床診治及檢測提供更加充分的實驗數(shù)據。

參考文獻

[1]BrayF，F(xiàn)erlayJ，SoerjomataramI，etal.Globalcancerstatistics2018：GLOBOCANestimatesofincidenceandmortalityworldwidefor36cancersin185countries[J].CACancerJClin，2018，68（6）：394-424.

[2]AnitaG，Seto，RobertE，Kingston，NelsonC.Lau.TheComingofAgeforPiwiProteins[J].MolecularCell，2007，26（5）：603-609.

[3]LeeJaeHo，SchütteDorothea，WulfGerald，etal.Stem-cellproteinPiwil2iswidelyexpressedintumorsandinhibitsapoptosisthroughactivationofStat3/Bcl-XLpathway[J].HumanMolecularGenetics，2006，15（2）：201-211.

[4]王寧，劉碩，楊雷，張希，袁延楠，李慧超，季加孚.2018全球癌癥統(tǒng)計報告解讀[J].腫瘤綜合治療電子雜志，2019，5（01）：87-97.

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