武漢地區新生兒α-地中海貧血篩查及影響因素分析

周斌 熊乾 蔡文倩 沈姍姍 胡晞江

華中科技大學同濟醫學院附屬武漢兒童醫院（武漢市婦幼保健院）（武漢430014）

地中海貧血是我國發病率較高的單基因遺傳病之一，其中α-地中海貧血是最常見的一種類型［1］，據文獻報道，廣西、廣東、海南和福建等都是α-地中海貧血高發地區［2-3］。新生兒α-地中海貧血篩查敏感指標是γ-珠蛋白形成的γ4（Hb Bart′s）的百分含量，其含量變異程度在一定程度可指示其基因類型，Hb Bart′s 含量不僅與攜帶的基因類型相關，可能還受其他因素影響［4，5］。目前我國中部地區對α-地中海貧血報道較少，其Hb Bart′s 水平對新生兒α-地中海貧血基因類型預測也很少涉及。

1 資料與方法

1.1 一 般資 料 2016年11月1 至2017年10月20日武漢市各助產機構采集的新生兒濾紙干血斑標本99 333 例，排除各種不合格標本58 例，共收集合格標本99 275 例。新生兒濾紙干血斑通過采集新生兒足跟血獲得，血斑直徑＞8 mm。產婦及新生兒人口學特征見表1。產婦平均年齡29.0 歲，大多數產婦孕周大于37 周，新生兒男296 例，女250例。Hb Bart′s 平均值為1.49%，Hb Bart′s 含量不成正態分布，且未找到合適的方法將其轉換成正態分布的變量，所以本研究中的統計方法均為非參數檢驗。

表1 產婦及新生兒人口學特征Tab.1 Demographic characteristics of pregnant woman and newborns

1.2 方法

1.2.1 篩查方法 運用Sebia 公司Capillarys 2 neonat fast 毛細管電泳儀系統，檢測新生兒濾紙干血斑中血紅蛋白A（Hb A）、抗堿血紅蛋白（Hb F）、血紅蛋白A2（Hb A2），γ 四聚體（Hb Bart′s）及其他常見的血紅蛋白變異體，Hb Bart′s 含量大于0 或Hb Bart′s 出峰區域檢出血紅蛋白即判斷為篩查陽性。

1.2.2 確診方法 采用LUMINEX MAGPIX 液相芯片懸浮技術，檢測中國人常見的3 種α 珠蛋白基因缺失突變［--（--SEA）、-α（3.7）、-α（4.2）］，3 種α 珠蛋白基因點突變（CS142、QS125、WS122）；一種或多種基因突變同時發生的新生兒即可確診為基因突變攜帶者或患者。

1.3 統計學方法 用SPSS 18.0 軟件進行統計分析。采用描述性統計方法對研究對象的人口學特征，Hb Bart′s 水平分布特征進行分析。采用非參數檢驗來分析單個因素對Hb Bart′s 含量的影響。

2 結果

2.1 α-地貧篩查和基因檢測結果 在99 275 例新生兒濾紙干血斑標本中，篩出含Hb Bart′s 新生兒1 263 例，篩查陽性率為1.27%，在篩查陽性新生兒中Hb Bart′s 含量最大值為14.5%，最小值為0.1%，均數1.4%；篩查陽性者召回1 233 例，召回率97.6%，召回新生兒中有671 例（男375 例，女296例）與新生兒疾病篩查系統進行了全面信息匹配，使其基因檢測結果與新生兒篩查結果對應，其余新生兒因家屬未提供產婦個人信息未能匹配新生兒篩查結果。671 例經α-地中海貧血相關基因檢測，共檢出546 例新生兒有α-地中海貧血基因突變，其Hb Bart′s 含量最小值0.1%，最大值11.6%，男296 例，女250 例，α-地貧篩查陽性預測值為81.4%。隨機抽取100 例篩查陰性的標本，經α-地中海貧血相關基因檢測檢測后發現1 例-α3.7/αα，假陰性率1%。

在546 例α-地中海貧血基因突變新生兒中，檢出14種基因型，其中--SEA/αα，299 例，占54.8%；-α3.7/αα，150 例，占27.5%；-α4.2/αα，24 例，占4.4%；ααCS142/αα，18 例，占3.3%；ααQS125/αα，16 例，占2.9%；-α3.7/-α3.7，4 例，占0.7%；ααWS122/αα1 例，占0.2%；--SEA/-α3.7，2 例，占0.4%；其他基因型26 例，主要是α 復合β 地中海貧血，占4.8%；由此可知武漢地區新生兒α-地中海貧血基因突變主要以--SEA/αα和-α3.7/αα為主。

2.2 Hb Bart′s 含量的陽性預測值 召回的671例初篩陽性標本中，有125 例經基因檢測后無α-地中海貧血常見的6 種突變。按Hb Bart′s 含量分為4 組，0.1% ～0.5%組，0.6% ～1%組，1.1% ～2%組，≥2.1%組。其Hb Bart′s 含量在0.1～0.5%之間的新生兒未檢出6 種α-地中海貧血常見基因突變者96 例，檢出基因突變者230 例，陽性預測值71%；0.6% ～1.0%之間未檢出基因突變者10 例，檢出基因突變者45 例，陽性預測值為78%；1.1% ～2%之間檢出基因突變者89 例，未檢出基因突變者8 例，陽性預測值91.8%；≥2.1%以上的檢出基因突變者192例，未檢出基因突變者11例，陽性預測值94.6%；經卡方檢驗發現不同含量Hb Bart′s 組間在陽性預測值中存在統計學差異。提示Hb Bart′s 含量越高陽性預測值越高。見表2。

2.3 Hb Bart′s 含量的影響因素分析

2.3.1 基因類型對新生兒Hb Bart′s 含量的影響 在檢出的α-地中海貧血患兒中，不區分產婦年齡，孕周和新生兒性別時，比較不同基因突變類型新生兒檢出的Hb Bart′s 含量是否有統計學意義，由于ααWS122/αα，-α3.7/-α3.7，--SEA/-α3.7基因突變類型的例數較少，所以分析過程中僅包含--SEA/αα，-α3.7/αα，-α4.2/αα，ααCS142/αα，和ααQS125/αα 這5種基因型。--SEA/αα，-α3.7/αα，-α4.2/αα，ααCS142/αα，ααQS125/αα這5 種基因型對應的Hb Bart′s 含量分別為2.50±0.97%，0.36±0.1%，0.36±0.18%，0.82±0.29%，0.45±0.22%，經非參數檢驗，認為不同基因突變型α-地中海貧血的新生兒Hb Bart′s 含量不同。見表3。

表2 Hb Bart′s 含量的分布Tab.2 Distribution of Hb Bart′s例（%）

表3 不同基因型地中海貧血患者Hb Bart′s（%）含量分析Tab.3 Analysis of Hb Bart′s(%)for thalassemia

2.3.2 新生兒性別、孕周對Hb Bart′s 含量的影響 在檢出的α-地中海貧血患兒中，男296 例，女250 例，檢出Hb Bart′s 含量的均值分別為1.55%和1.42%。經非參數檢驗發現男性和女性新生兒α-地中海貧血患兒Hb Bart′s 含量無統計學意義（P＞0.05）。在檢出的α-地中海貧血患兒中，根據孕周分為早產兒（孕周＜37 周）和正常孕周（孕周≥37周）組兩組，檢出Hb Bart′s 含量的均值分別為1.68%和1.61%。經非參數檢驗發現早產兒和正常孕周新生兒Hb Bart′s 百分含量無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

3 討論

地中海貧血（thalassemia），又稱海洋性貧血和珠蛋白合成障礙性貧血，簡稱地貧。它是一種單基因隱性遺傳病，也是全球分布最廣，累計人群最多的一種單基因病之一。地中海貧血有α、β、γ、δ四種類型，前兩種最常見，其診斷主要依靠基因檢測和血紅蛋白鑒定，目前毛細管血紅蛋白電泳是血紅蛋白成分分類主要手段之一［6-8］。

本研究是將新生兒濾紙干血斑全血進行血紅蛋白毛細管電泳來篩查地中海貧血，研究結果顯示：99 275 例新生兒干血斑標本中，檢出Hb Bart′s新生兒1 263 例，篩查陽性率為1.27%，召回1 233例，其中671 例能匹配地中海貧血篩查結果，此部分初篩陽性新生兒共檢出546 例α-地中海貧血基因突變新生兒，基因突變率81.3%，比廣東省臺山梁逸敏等［9］報道的通過毛細管電泳儀篩查陽性率87.80%的基因突變率略低，這是因為本實驗室考慮到湖北武漢地區重型和中間型α-地中海貧血基因突變患兒可能比廣東等高發區占比少，而輕型和靜止型占比相對較多，因此，在制定判讀標準時，將Hb Bart′s 含量大于0 或Hb Bart′s 出峰區域檢出血紅蛋白均以α-地中海貧血初篩陽性結果報告，所以初篩陽性的標本中可能包含部分異常血紅蛋白病患兒。另外81.3%的篩查符合率比部分使用HPLC 技術檢測α-地中海貧血的符合率要高［10］，說明毛細管電泳篩查新生兒α-地中海貧血效果好。武漢地區主要檢出--SEA/αα，-α3.7/αα，-α4.2/αα，ααCS142/αα 和ααQS125/αα 五種基 因 突變型，分別 占54.8%，27.5%，4.4%，3.3%，2.9%。與貴州，云南，廣東，廣西等地區α-地中海貧血分布有少許差異［11-14］，本次未檢出中間型α-地中海貧血患兒可能是收集標本例數較少而中間型α-地中海貧血患兒患兒發病率較低。

對671 例初篩陽性標本的Hb Bart′s 分組，經卡方檢驗認為不同含量Hb Bart′s 組間在陽性預測值中存在統計學差異，Hb Bart′s 含量越高陽性預測值越高。這可能是因為新生兒α-地中海貧血初篩是通過濾紙干血片溶脫全血后再進行檢測，檢測前濾紙干血片已放置了3 ～10 d，溶脫的血紅蛋白標本在保存過程中很可能發生不同降解，小的降解碎片可能導致基線不平，若發生在Hb Bart′s 出峰區域就容易被毛細血管電泳儀系統判續為Hb Bart′s，即少量降解片段通常導致較低百分含量假性Hb Bart′s，且不容易與真正Hb Bart′s 峰型相區別，導致假陽性發生。因此當Hb Bart′s 含量越高其陽性預測值越高［15］。

由表3可見，不同基因突變型地中海貧血新生兒Hb Bart′s 含量有統計學意義，說明Hb Bart′s 含量隨著基因突變型不同發生變化。其中Hb Bart′s含量水平由高至低依次為三個α 基因缺陷的--SEA/-α3.7型，兩個α 基因缺失的--SEA/αα 基因型、一個α 基因突變的ααCS142/αα 和ααQS125/αα 基因型，一個α 基因缺失的-α4.2/αα 和-α3.7/αα，所以可根據Hb Bart′s 含量大致預測基因缺陷程度。檢測結果還發現-α3.7/-α3.7基因突變型Hb Bart′s 含量變化跨度大，4 例-α3.7/-α3.7基因突變的新生兒，其含量分別為1.2%，11.2%，2.6%，1.7%，提示-α3.7/-α3.7基因突變型可能存在較大個體差異，還需要更多的數據和跟蹤觀察。在檢出的α-地中海貧血患兒中，根據孕周和性別分組均無統計學意義，說明孕周和性別對Hb Bart′s 含量沒有影響。

因此，通過新生兒Hb Bart′s 含量分析篩查α-地中海貧血具有簡單、高效、準確等優勢，并且能實現早期初步判斷基因突變類型，值得廣泛推廣，孕周和性別不影響Hb Bart′s 含量，其主要受基因突變類型影響。