大葉苦丁茶多酚對四氯化碳致小鼠肝損傷的預防作用

潘妍霓,趙 欣，龍興瑤,周先容,3,母健菲,3,劉必慧,*

(1.重慶市功能性食品協同創新中心,重慶市功能性食品工程技術研究中心, 功能性食品研發重慶市工程實驗室,重慶第二師范學院生物與化學工程系,重慶 400067; 2.車醫科學大學食品生命工學專業,韓國京畿道 487-010; 3.西南大學食品科學學院,重慶 400715)

肝臟是生物重要的代謝生理器官,肝臟損傷會對機體造成嚴重的危害。化學性肝損傷是造成肝功能障礙的常見原因,嚴重時甚至可引起肝硬化及肝癌[1]。CCl4是實驗室誘導動物肝損傷的常用化學誘導劑,CCl4在引發肝損傷的過程中會導致肝細胞大量分泌炎癥因子,從而加劇炎癥作用,加重肝損傷;同時,四氯化碳能引起肝微粒體脂質過氧化,導致細胞膜脂質過氧化并破壞細胞膜,誘發肝損傷[2]。

苦丁茶是冬青科植物大葉冬青的葉,在華南地區和西南地區等地盛產,具有抗炎鎮痛、提神解毒、抗高血壓、抗菌等功效[3]。苦丁茶能夠抑制氧化應激、預防炎癥等,這與其中的茶多酚有密切關系[4]。茶葉中的茶多酚是一種天然的抗氧化劑,具有清除自由基和抗氧化等生物活性[5]。特別是針對CCl4誘導的實驗性肝損傷、脂質過氧化以及CCl4與肝微粒體脂質和蛋白質發生共價結合導致的肝細胞膜結構和功能的破壞均可以被茶多酚有效減少[6]。研究表明苦丁茶提取物對肝損傷有較好的抑制效果[7],但其作用機制還需進一步的研究。

Mn-SOD和Cu/Zn-SOD是機體內SOD的異構體,是兩種以不同離子為活性中心的SOD自由基清除劑,一定含量的SOD能抑制體內的自由基,起到預防肝損傷的作用[8]。IκB-α是抑炎因子,四氯化碳導致肝臟受損引起的氧化磷酸化會降解IκB-α,從而誘發炎癥反應,低IκB-α水平標志著肝臟損傷[9]。COX-2通常在機體組織非正常狀態下表達,是一種重要的炎癥標志物[10]。NO是一種高活性氧化劑,通過肝細胞中活化的 NOS在肝臟中產生,在肝損傷一定時期后,能夠促進iNOS基因的高表達,同時,炎癥因子iNOS 誘導產生的 NO 也進一步促進肝臟發生損傷[11]。CAT是生物體中一種抗氧化酶,通過清除機體中的H2O2,抑制氧化應激,減輕CCl4給生物體帶來的氧化,預防肝損傷[12]。TNF-α是最關鍵的促炎介質,對 NF-κB的活化起正反饋調節作用,它既是 NF-κB的激活物,也是其激活后的產物,低濃度的TNF-α可調節肝細胞生長分化與再生,但高濃度的TNF-α既可以誘導肝細胞凋亡,是造成肝細胞損傷的主要因子[13]。NF-κB是一種機體內至關重要的轉錄誘導因子,它可以調節肝損傷等炎癥反應所需的基因表達水平,高NF-κB水平可表示肝損傷[14]。IL-1β是由肝臟中的Kupffer細胞分泌的炎性細胞因子,IL-1β可吸引中性粒細胞,引起炎癥介質釋放,從而加劇肝損傷[15]。

本研究使用CCl4對肝臟進行處理,建立小鼠化學性肝損傷模型,以大葉苦丁茶多酚提取物為研究對象,觀察大葉苦丁茶多酚提取物對四氯化碳誘導小鼠肝損傷的預防作用,進一步采用分子生物學方法檢測小鼠血清和肝組織相關指標,從機理上闡釋大葉苦丁茶多酚提取物對小鼠肝損傷的改善作用。研究成果將益于大葉苦丁茶多酚提取物的開發利用,為大葉苦丁茶多酚在食品加工和保健品研發中的發展提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

大葉苦丁茶 蕪湖市徽茶品茶葉有限公司;清潔級雄性昆明小鼠50只(動物許可證SCXK(渝)2012-0001) 重慶醫科大學實驗動物中心,在濕度50%±20%、溫度(22±4) ℃下飼養1周后正式進行實驗;AST試劑盒、ALT試劑盒 南京建成生物工程研究所;甘油三酯(TG)測定試劑盒、總膽固醇(TC)測定試劑盒 北京索萊寶科技有限公司;水飛薊素 美國Sigma公司;Trizol、First Strand cDNA Synthesis試劑盒 賽默飛世爾;沒食子酸、福林酚、甲醇、ABTS 南京都萊生物技術有限公司;DPPH阜陽曼琳生物技術有限公司;無水乙醇 重慶川東化工有限公司;三氯化鋁 天津市大茂化學試劑廠;氯化鋅 天津市北辰方正試劑廠;三氯化鐵、FeSO4、水楊酸 成都市科龍化工試劑廠。

KQ-100超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司;電子天平 上海舜宇恒平科技儀器有限公司;Step One Plus定量PCR儀、Biomate3S紫外可見分光光度儀、LUX多功能酶標儀 賽默飛世爾;R1002VN旋轉蒸發儀 鄭州長城科工貿有限公司;ICEN-24R高速冷凍離心機 杭州奧盛儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 大葉苦丁茶多酚的提取 將大葉苦丁茶打碎成粉,稱取100 g加入100 mL 45%乙醇溶液,90 ℃下浸提30 min,重復浸提2次,合并2次浸提液,調節浸提液pH至6.0,加入AlCl3(6 g)和ZnCl2(12 g)混合沉淀劑進行沉淀,將混合液在3000 r/min離心10 min,將200 mL 12%鹽酸(V/V)加入收集到的沉淀中轉溶,抽濾分離出上清液,分別2次加入200 mL乙酸乙酯進行萃取。最后對萃取液進行旋轉蒸發得到多酚提取物[16]。

1.2.2 大葉苦丁茶多酚提取物的含量測定 稱量一定量的標準沒食子酸,加入60%乙醇,制備沒食子酸標準儲備溶液,精密量取沒食子酸標準溶液(0.4、0.6、0.8、1.0及1.2 mL),分別置于6個50 mL量瓶中,各加20 mL蒸餾水,分別加入 5 mL 0.2 mol·L-1Folin-Ciocalteu試劑,然后加入6 mL 100 g·L-1碳酸鈉溶液,加水至50 mL,振搖,避光反應2 h 后,用蒸餾水做空白,760 nm處測定OD值。以沒食子酸質量濃度和OD值分別為橫、縱坐標,繪制標準曲線。將大葉苦丁茶按照以上方法平行測定3次,根據標準曲線(Y=0.0665X+0.0328,R2=0.9996,Y為吸光度值,X是沒食子酸標準溶液質量濃度)計算大葉苦丁茶多酚的含量[17]。

1.2.3 大葉苦丁茶多酚提取物的抗氧化活性測定

1.2.3.1 大葉苦丁茶多酚提取物DPPH清除自由基能力 稱取DPPH 12.5 mg置于100 mL容量瓶中,加無水乙醇溶解,定容至刻度,用時再稀釋至25 g/mL,現配現用。參照王曉宇等[18]的方法,利用配制好的DPPH試劑測定大葉苦丁茶粗多酚的抗氧化效果。將0.1 g PLK定容于10 mL的容量瓶中配制成10 mg/mL的PLK溶液,再稀釋10倍制成1 mg/mL的PLK溶液。將1 mg/mL的PLK溶液分別稀釋成20、40、60和80 μg/mL的PLK溶液,分別取100 μL 配制的各濃度PLK溶液和3.9 mL以無水乙醇為溶劑的DPPH自由基溶液混合后所測得的吸光度設為A1,100 μL的配制的各濃度PLK溶液和3.9 mL無水乙醇混合所得吸光度記為A2,100 μL 80%甲醇溶液與3.9 mL DPPH溶液混合所得吸光度記為A3,室溫下避光放置30 min后,吸取200 μL最終反應液于96孔板中,用酶標儀在波長517 nm處測定吸光值。以VC(濃度為20、40、60和80 μg/mL)為陽性對照,每個樣品重復3次,取平均值。按以下公式計算:

DPPH清除率(%)=[1-(A1-A2)/A3]×100

1.2.3.2 大葉苦丁茶多酚提取物對清除ABTS活性的測定 配制7 mmol/L ABTS溶液、140 mmol/過硫酸鉀溶液、ABTS反應液。參照蔡文國等[19]的方法,5 mL ABTS反應溶液+200 μL PLK溶液(濃度為20、40、60和80 μg/mL)記為A1,5 mL無水乙醇+200 μL樣液(濃度為20、40、60和80 μg/mL的PLK溶液)記為A2,5 mLABTS溶液+200 μL 80%甲醇溶液記為A0,混勻后室溫下避光反應6 min,吸取200 μL最終反應液于96孔板中用酶標儀在波長734 nm處測定吸光值。以VC為陽性對照,每個樣品重復3次,取平均值。按以下公式計算:

ABTS清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]×100

1.2.3.3 大葉苦丁茶多酚提取物對清除羥自由基的測定 配制9 mmol/L FeSO4溶液、9 mmol水楊酸乙醇溶液、8.8 mmol H2O2溶液,參照賈榮等[20]的方法,300 μL 80%甲醇+2.0 mL FeSO4+1.0 mL水楊酸乙醇溶液+1.0 mL H2O2混合溶液記為A0,300 μL樣液(濃度為20、40、60和80 μg/mL)+2.0 mL FeSO4+1.0 mL水楊酸乙醇溶液+1.0 mL H2O2混合溶液記為A1,300 μL樣液(濃度為20、40、60和80 μg/mL)+2.0 mL FeSO4+1.0 mL水楊酸乙醇溶液+1.0 mL 80%甲醇混合溶液記為A2,放置于37 ℃水浴鍋中加熱30 min后,吸取200 μL最終反應液于96孔板中在波長510 nm處測定吸光值。按以下公式計算:

羥自由基清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]×100

1.2.3.4 大葉苦丁茶多酚提取物對還原力的測定 配制1%鐵氰化鉀、10%三氯乙酸、0.1%三氯化鐵,采用鐵離子還原力測定法[21]。分別取200 μL不同濃度(20、40、60和80 μg/mL)的PLK溶液,加入0.2 mol/L搖勻后的PBS緩沖液2.5 mL,1% K3Fe(CN)6溶液2.5 mL,充分混勻后在50 ℃恒溫水浴鍋中反應20 min,使其快速冷卻,再加入體積分數10%三氯乙酸2.0 mL終止反應。取混合液2.5 mL,加入蒸餾水2.5 mL和0.1% FeCl30.5 mL,充分混勻,在室溫下靜置10 min,于700 nm處測吸光值。

1.2.4 動物實驗

1.2.4.1 小鼠分組實驗 將小鼠隨機分為正常組、模型組、水飛薊素組(100 mg/kg)、低劑量大葉苦丁茶(LPLK)組(50 mg/kg)、高劑量大葉苦丁茶(HPLK)組(100 mg/kg)5組。用適應飼養1周后的小鼠開始進行實驗,正常組和模型組小鼠每只每天灌胃0.2 mL生理鹽水;PLK高低劑量組的小鼠分別用相應濃度的PLK每只每天進行灌胃0.2 mL;水飛薊素組的小鼠每只每天按100 mg/kg劑量灌胃水飛薊素溶液0.2 mL,實驗持續進行14 d,所有小鼠均自由飲水,使用標準飼料喂養。第14 d對除正常組外所有小鼠腹腔注射四氯化碳化學誘導劑(CCl4∶花生油=1∶125,V/V),每只小鼠注射0.2 mL CCl4化學誘導溶液后對所有小鼠實施禁食,但允許自由飲水。禁食24 h后將5組小鼠進行眼球取血,斷頸處死,解剖取肝臟待用[5]。

1.2.4.2 小鼠肝指數 稱量小鼠肝臟重量,肝臟指數按公式進行計算:

肝指數(%)=(小鼠肝重量/小鼠體重)×100

1.2.4.3 小鼠血清指標的測定 血漿在4 ℃ 4000 r/min離心10 min分離上層獲得血清,并于-80 ℃保存待用。使用AST、ALT、TG、TC試劑盒分別測定小鼠血清相關水平。

1.2.4.4 小鼠肝組織病理學觀察 將肝右葉的1/2固定在10%福爾馬林中,用95%(v/v)乙醇脫水,再用二甲苯將肝組織中的乙醇替換出來,石蠟包埋,冷卻并切片,將嵌入的肝臟用HE染色發染色,并在光學顯微鏡下觀察[22]。

1.2.5 qPCR測定小鼠肝組織COX-2、iNOS、NF-κB、IκB-α、Cu/Zn-SOD、Mn-SOD、IL-1β、CAT、TNF-α的mRNA表達 將100 mg肝組織、1 mL Trizol和200 μL三氯甲烷用均質機均質;以14000 r/min在4 ℃條件下離心均質15 min,得到上清液;按上清液∶異丙醇=1∶1 (V/V)加入異丙醇,在4 ℃下放置15 min后,以4 ℃ 14000 r/min的條件離心20 min得到RNA。通過測定RNA在260和280 nm處的吸光度值,計算出RNA的濃度,再將RNA用去酶水稀釋為濃度1 μg/μL 的液體;用9 μL的oligo Primer DT 與1 μL稀釋后的RNA混合后放入PCR儀,以65 ℃ 5 min完成一個熱循環;再加入4 μL 5×Reaction Buffer,1 μL Ribolock RNase inhibitor,2 μL 100 mmol/L dNTP mix和1 μL RevertAid RT,混勻后以42 ℃ 60 min,70 ℃ 5 min的條件放于PCR儀生成cDNA。將1 μL cDNA,10 μL Master Mix,上下游引物各1 μL(表1)和7 μL ddH2O混勻后放入qPCR儀器,使用程序94 ℃ 30 s,40個循環,58 ℃ 30 s,72 ℃ 50 s,最終75 ℃ 10 min測定其Ct值[23]。引物序列見表1。

表1 本研究中的引物序列Table 1 Sequences of reverse transcription polymerase chain reaction primers used in this study

1.3 數據分析

所有實驗重復3次,用平行實驗對實驗結果進行平均化,實驗數據使用SPSS 22.0統計軟件進行分析,采用one-way ANOVA法分析在p=0.05水平上各組數據是否存在顯著差異。

2 結果與分析

2.1 大葉苦丁茶多酚含量測定

實驗測得大葉苦丁茶多酚的含量為4.99 mg/mL。有研究表明苦丁茶多酚含有多種具有生物活性作用的物質,包括綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B和異綠原酸C[24]。研究表明苦丁茶豐富的多酚成分具有較好的抗氧化效果,體外研究顯示苦丁茶的多酚含量較高,作為有效成分顯示出較好的抗氧化效果[25-26]。

2.2 大葉苦丁茶多酚提取物體外抗氧化

對大葉苦丁茶多酚提取物DPPH清除自由基、ABTS、羥自由基能力及對Fe3+還原能力進行的測定結果,如圖1所示。

圖1 大葉苦丁茶多酚提取物的體外抗氧化活性 Fig.1 The results of antioxidant activities and free radical scavenging abilities of PLK in vitro注:A:DPPH法測定對大葉苦丁茶多酚提取物的氧化效果;B:大葉苦丁茶多酚提取物對清除ABTS活性的測定; C:大葉苦丁茶多酚提取物對清除羥自由基的測定;D:大葉苦丁茶多酚提取物對Fe3+還原力的測定。

DPPH·是一種很穩定的自由基,通常被用來檢測抗氧化劑的抗氧化活性。圖1(A)結果顯示大葉苦丁茶多酚提取物清除自由基DPPH·的能力隨著濃度的增大而增強;濃度為40 μg/mL時,PLK提取物清除自由基DPPH·的能力明顯低于VC對照組,抗氧化物質清除DPPH·自由基的能力和其抗氧化活性成正比[27]。

在合適的氧化劑作用下,ABTS被氧化成ABTS+·,并且抗氧化物會抑制ABTS+·的產生[28]。由圖1(B)可知,大葉茶多酚的ABTS活性清除率最大值為19.16%,此時PLK濃度為80 μg/mL,PLK提取物的ABTS清除率隨濃度增大的變化幅度減小,且效果優于VC對照組。

羥自由基主要引起機體脂質過氧化破壞細胞,還與有機體中的糖類、氨基酸、核酸、有機酸等物質反應,造成細胞損傷,甚至會導致細胞死亡或突變[29]。從圖1(C)顯示結果可得,大葉苦丁茶多酚提取物的羥自由基清除率隨濃度增大呈上升趨勢,且增強幅度與VC對照組相似,但效果不如同等濃度的VC對照組。

化學物質清除自由基的能力與還原能力強弱成正比,故以抗氧化劑對三價鐵還原能力的強弱來反應其抗氧化活性的高低。圖1(D)結果顯示,隨PLK和VC濃度的增大,PLK提取物的還原力與VC對照組的還原力,呈逐步上升的形態,但與VC對照組相比,PLK提取物還原力增長幅度較小。

以上數據分析可以得出,不同濃度的PLK和VC都具有較明顯的清除自由基作用,且清除率隨藥物濃度的增加而逐漸增大,結果表明,PLK具有較強的抗氧化能力。

2.3 大葉苦丁茶多酚對CCl4致小鼠肝損傷效果

2.3.1 小鼠肝指數測定 肝臟重量和肝臟指數是評估肝臟損傷的重要指標,高肝指數是肝損傷的重要表現之一[30]。由表2結果顯示,模型組的肝重和肝指數在5組小鼠中為最高,模型組與正常組相比,肝臟重量、肝臟臟器指數均出現明顯升高(p<0.05),說明本研究造模成功。正常組的肝重和肝指數為5組中最低,水飛薊素組和PLK組的肝重和肝指數與模型組比均有不同程度的減低,且PLK組與模型組存在顯著性差異(p<0.05),高劑量PLK組的肝重和肝臟指數比低劑量PLK組的肝重和肝臟指數更接近水飛薊素組,且HPLK組的肝重與肝指數與水飛薊素組無明顯差異,此結果說明PLK能有效的降低CCl4給肝臟帶來的損傷。本研究結果表明,與肝損傷對照組小鼠相比,PLT能夠使肝損傷小鼠的肝指數下降,且效果接近于藥物水飛薊素。

表2 PLK對CCl4誘導肝損傷小鼠的體重、肝重和肝指數的影響(n=10)Table 2 Effects of PLK on body weight,liver weight and liver index in mice with CCl4-induced hepatic damage(n=10)

2.3.2 實驗小鼠肝組織病理學觀察 組織病理學切片是檢測肝損傷的一種重要技術,通過對小鼠肝組織切片的觀察分析,可進行肝損傷評價[31]。如圖2所示,從小鼠的肝臟H&E染色切片能觀察到,正常組小鼠肝細胞形態結構正常、完整且排列整齊有序;模型組小鼠肝組織呈現出大面積壞死細胞,炎癥細胞浸潤,細胞結構被破壞且排列不均勻;與模型組小鼠相比,PLK組和水飛薊素組均能在一定程度上減小CCl4引起的肝細胞壞死,且高濃度PLK效果更為明顯,說明高劑量PLK對肝損傷的保護效果較好,與藥物水飛薊素效果相近。

圖2 實驗小鼠肝組織病理學H&E切片觀察(200×)Fig.2 Pathological observation of hepatic tissues in experimental mice(200×)

2.3.3 實驗小鼠血清指標的測定 ALT和AST是兩種檢測肝損傷的標示性轉氨酶。肝細胞受損后,會導致AST和ALT等酶類物質釋放到血液中,不同的肝損傷程度,小鼠血清將檢測出不同的AST和ALT水平,因此,檢測血清中ALT、AST的活性能準確反映肝損傷的程度[27]。如表3所示,在四氯化碳致小鼠肝損傷后,模型組小鼠血清中AST、ALT、TG、和TC水平較正常組小鼠血清中各指標的含量均有顯著的上升(p<0.05)。PLK組小鼠血清中的AST、ALT、TG、和TC水平與模型組相比顯著降低(p<0.05),但高于水飛薊素組,且高劑量PLK組較低劑量PLK組個指標下調更為明顯。

表3 PLK對CCl4誘導肝損傷小鼠血清中AST、ALT、TG、和TC的水平含量影響Table 3 Effects of PLK on serum levels of AST,ALT,TG and TC in mice with CCl4-induced hepatic damage

CCl4引發的肝損傷可導致脂肪酸轉移至肝組織內,導致肝臟中TG含量增加,TC也是肝損傷引起的脂質過氧化的指標,肝損傷后的脂質過氧化引起TG和TC水平上升[32]。由此可見,PLK可以有效調控小鼠AST、ALT、TG和TC水平,減小機體受四氯化碳的影響。

2.4 大葉苦丁茶多酚對CCl4損傷的小鼠肝細胞轉錄水平的影響

2.4.1 實驗小鼠肝組織Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和IκB-α表達 四氯化碳導致肝氧化代謝中產生三氯甲基自由基,自由基攻擊脂質細胞膜,導致肝細胞發生脂質過氧化性的損傷,通過抑制肝組織的氧化和減少肝組織中的自由基,可以有效的控制組織損傷[33]。從圖3可以看出,Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和IκB-α在正常組肝組織中的表達水平顯著高于其他各實驗處理組(p<0.05)。模型組的Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和IκB-α表達量與其他四組相比較顯著降低,PLK可顯著緩解表達降低(p<0.05),且高濃度PLK效果優于低劑量組,其表達水平與水飛薊素治療組的表達水平相當。結果表明PLK能夠有效調節機體內的Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和IκB-α表達,從而發揮其對肝損傷的抑制作用。苦丁茶中豐富的多酚物質具有抗氧化效果,將有可能通過其抗氧化作用抑制四氯化碳對肝組織造成的損傷。

圖3 小鼠肝組織中Cu/Zn-SOD(A)、Mn-SOD(B)和IκB-α(C)的mRNA表達的定量分析Fig.3 Quantitative analysis of mRNA expression of Cu/Zn-SOD(A),Mn-SOD(B)and IκB-α(C)in liver of mice注:不同小寫字母代表差異性顯著,p<0.05,圖4～圖5同。

2.4.2 實驗小鼠肝組織COX-2、iNOS和CAT表達 如圖4所示,模型組小鼠肝組織中COX-2和iNOS表達與正常組小鼠相比有明顯的升高而CAT水平較正常組小鼠有顯著的下降(p<0.05)。PLK組小鼠肝組織中的COX-2和iNOS水平表達與模型組相比有明顯的降低(p<0.05);CAT水平與模型組相比有明顯的上升(p<0.05)。實驗結果表明PLK對肝組織的COX-2、iNOS和CAT表達有明顯的調控作用,能夠通過調控這些表達起到抑制肝損傷的作用。

圖4 小鼠肝組織中COX-2(A)、iNOS(B)和CAT(C)的mRNA表達的定量分析Fig.4 Quantitative analysis of mRNA expression of COX-2(A),iNOS(B)and CAT(C)in liver of mice

2.4.3 實驗小鼠肝組織TNF-α、NF-κB和IL-1β表達 如圖5,CCl4使TNF-α、NF-κB和IL-1β在模型組小鼠肝組織中具有最高表達量(p<0.05)。與模型組相比,水飛薊素和PLK均能降低CCl4引起的TNF-α、NF-κB和IL-1β表達,高劑量PLK組TNF-α、NF-κB和IL-1β表達顯著低于低劑量PLK組(p<0.05),但略高于水飛薊素組。因此,PLK可降低肝損傷小鼠的TNF-α、NF-κB和IL-1β表達(p<0.05),且作用類似于水飛薊素。PLK對肝組織的炎性表達TNF-α、NF-κB和IL-1β均有明顯的作用,從而可以看出PLK能夠調控四氯化碳引發的炎癥反應,從而減輕炎癥,抑制肝損傷。

圖5 各組小鼠肝組織中TNF-α(A)、NF-κB(B)和IL-1β(C)的mRNA表達的定量分析Fig.5 Quantitative analysis of TNF-α(A),NF-Κb(B)and IL-1β(C)mRNA expressions in liver of mice indifferent group

3 結論

研究結果表明大葉苦丁茶多酚提取物對四氯化碳導致的小鼠肝損傷具有較好的改良作用。PLK能下調肝損傷小鼠的肝指數;肝損傷小鼠血清中的 AST、ALT、TG、TC水平能被PLK有效降低;qPCR結果表明,PLK 可使肝損傷小鼠肝組織中Mn-SOD、Cu/Zn-SOD、IκB-α、CAT的 mRNA表達顯著上調,并下調COX-2、iNOS、TNF-α、NF-κB、IL-1β的 mRNA表達。因此,PLK對CCl4誘導的小鼠肝損傷有較好的改善和預防作用,且與藥物水飛薊素有相近效果,具有良好的開發利用潛質。