注射用牡荊素Beagle犬長期毒性試驗研究*

牛海軍，李曉亮，李光輝

（安徽省合肥七星醫(yī)藥科技有限公司，安徽 合肥 230088）

牡荊素（vitexin）是從薔薇科植物山楂葉中提取經純化而得的單一高純度（＞99%）化合物，加入適宜的輔料可制成凍干產品注射用牡荊素[1]。前期研究發(fā)現(xiàn)，牡荊素對缺氧復氧心肌細胞有明顯保護作用[2-8]，并可改善模型動物心臟血流動力學，降低心肌耗氧量，并增加心肌供血供氧[9-11]。本品常規(guī)以山楂葉制劑口服給藥，改為靜脈給藥中藥注射劑不僅保留了藥效，而且起效更快，在急危重癥的治療方面發(fā)揮著重要作用。由于近年來中藥注射劑不良事件時有發(fā)生，應更重視中藥注射劑的安全性。本研究中對注射用牡荊素進行了長期毒性試驗[12-15]，依據(jù)新藥審批長期毒性試驗要求，進一步研究牡荊素的用藥安全性。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物、儀器與試藥

動物：Beagle犬24只，普通級，4～6月齡，體質量5.0～8.0 kg，雌雄各半，由嘉興市嘉安實驗動物養(yǎng)殖有限公司供應，實驗動物使用許可證號為SYXK（浙）2010-0043，動物合格證號為0002293。按《犬的飼養(yǎng)SOP操作規(guī)程》進行飼養(yǎng)管理，飼養(yǎng)于不銹鋼犬籠內，每籠1只，溫度16～26℃，相對濕度40% ～70%，中央空調集中通風（每1 h通風8～10次），光照12 h，明暗交替。

儀器：ADVIA2120型自動血細胞分析儀（德國Bayer公司）；7020型全自動生化分析儀（日本日立公司）；CA-560型全自動血凝分析儀（日本Sysmex株式會社）；IMS-972型電解質分析儀（深圳希萊恒公司）；SP2006型心電圖解析系統(tǒng)（日本Softron公司）；H-800型尿液分析儀（長春迪瑞公司）；YZ6EI型檢眼鏡（蘇州醫(yī)療器械廠）；TCS-150型電子臺秤（梅特勒-托利多＜常州＞有限公司）；PL4001-L型電子分析天平（梅特勒-托利多＜上海＞有限公司）；ER-120A型電子分析天平（日本A／D公司）；RM2235型病理組織切片機、EG1160型病理組織包埋機、TP1050型病理組織脫水機、HI1210型病理組織攤片機、St5010型病理組織自動染色機（德國Leica公司）；E600型落射熒光生物顯微鏡（日本尼康公司）；CH-3型高級研究顯微鏡（日本Olympus公司）。

試藥：注射用牡荊素（合肥七星醫(yī)藥科技有限公司，批號為 20101012，規(guī)格為每瓶 30 mg，含量 97.1% ），臨用前用0.9%氯化鈉注射液配制成不同質量濃度、同等容量的溶液，供靜脈滴注用。

1.2 方法

將24只Beagle犬隨機分為牡荊素高劑量組（A1組，50 mg ／kg）、中劑量組（A2組，20 mg ／kg）、低劑量組（A3組，8 mg／kg）（均靜脈滴注給藥）和對照組（B組，靜脈滴注等體積0.9%氯化鈉注射液），各6只，雌雄各半，用藥3個月，每天觀察并記錄犬的外觀、行為活動、步態(tài)、精神、食欲、尿、大便、呼吸、瞳孔、皮毛，有無流涎、惡心、嘔吐，以及注射部位有無出血、水腫、感染等。記錄每天的攝食量，每周稱體質量、測體溫各1次。進行血液學、血液生化學檢查，心電圖、眼科檢查，尿液分析，并于給藥 1.5 個月（t3）、3 個月（停藥次日，t4）和恢復期結束（停藥1個月，t5）分別剖檢1／3犬（每劑量組2只，雌雄各半）。對給藥期間死亡犬及時進行系統(tǒng)尸體解剖及病理組織學檢查。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結果

一般反應：研究期間未見明顯毒副反應，也未引起動物死亡。

體質量：各犬體質量均隨研究時間的延長而增長，但除高劑量組在給藥3周和5周的平均體質量輕于相應時間的對照組外（P＜0.05），其他周各用藥組的平均體質量與相應時間的對照組相似（P＞0.05）。詳見圖1。

圖1 靜脈滴注注射用牡荊素對Beagle犬體質量的影響

體溫：除給藥4周高劑量組犬的平均體溫低于相應時間點的對照組（P＜0.05）外，其他周各給藥組犬平均體溫均與相應時間點的對照組相似（P＞0.05），且各犬的體溫均在正常體溫范圍（37.5～39.7℃）內。詳見圖2。

圖2 靜脈滴注注射用牡荊素對Beagle犬體溫的影響

圖3 Beagle犬注射用牡荊素毒性試驗病理切片圖（HE，×100）

攝食：研究期間各給藥組犬每周平均攝食量均與對照組相似（P＞0.05）。詳見表 1。

表1 注射用牡荊素對Beagle犬攝食量的影響（±s，g）

表1 注射用牡荊素對Beagle犬攝食量的影響（±s，g）

組別 給藥前給藥期停藥后2周1周1周2周3周4周5周6周7周8周9周10周396±5 398±5 396±5 395±5 11周396±5 398±5 395±6 394±8 12周395±6 397±6 394±7 395±6 1周2周3周4周A1組A2組A3組B組400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 395±5 397±4 397±2 397±2 397±4 397±5 397±2 397±3 396±4 397±5 396±3 397±3 395±5 398±4 395±4 396±4 392±5 399±3 394±5 397±4 391±5 399±3 393±6 396±4 394±6 399±3 396±5 397±5 395±5 399±1 395±4 397±4 394±7 398±4 396±5 396±5 396±1 398±3 397±4 398±3 397±0 399±2 398±3 399±2 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0 400±0

血液學指標：給藥對犬的血液學指標無明顯影響，且既無劑量反應關系，差異也無規(guī)律性，同時每只犬的測定值均在正常值范圍內。詳見表2。

血清生化學指標：給藥對犬的血清生化學指標無明顯影響，且既無劑量反應關系，差異也無規(guī)律性，同時各犬的測定值均在正常值范圍內。結果見表3。

心電圖：給藥前（t0），t3，t4，t5時檢查，均未發(fā)現(xiàn)異常心電圖。詳見表4。

尿：t0，t3，t4，t5時檢查，各給藥組犬尿的顏色、透明度、比重、pH、亞硝酸鹽、葡萄糖、維生素C、白細胞、隱血、膽紅素、尿膽原、酮體、微白蛋白均未見明顯異常，與對照組比較無明顯差異（P＞0.05）。

眼科：t0、t3、t4和 t5時檢查，給藥組犬眼結膜、角膜、瞳孔、晶狀體、玻璃體、視乳頭、視網膜（反射、血管、斑點）結構均正常，與對照組比較無明顯差異（P＞0.05）。

表2 注射用牡荊素對Beagle犬血液學指標的影響（±s，n=6）

表2 注射用牡荊素對Beagle犬血液學指標的影響（±s，n=6）

檢測時間W B C（×1 0 3／μ L） R B C（×1 0 6／μ L） H G B（g／d L）A 1組A 2組A 3組B組A 1組A 2組A 3組B組A 1組A 2組A 3組B組t 1 t 2 t 3 t 4 t 5 1 1.4 6 ±1.1 4 1 0.3 9 ±0.3 4 1 1.4 7 ±1.4 7 1 0.8 1 ±5.2 5 1 8.4 1 ±1.4 2 1 2.0 4 ±1.6 6 1 0.2 8 ±1.3 2 1 2.4 4 ±1.9 2 1 0.0 8 ±0.7 3 1 5.5 3 ±3.0 8 1 2.5 3 ±3.8 6 1 1.8 6 ±1.8 4 1 1.1 4 ±1.8 7 1 0.3 9 ±1.0 8 1 8.0 6 ±0.6 0 1 1.2 9 ±0.8 8 1 0.4 7 ±1.1 4 1 2.3 6 ±1.6 7 1 1.9 6 ±1.8 7 2 0.0 2 ±1.4 2 6.0 5 ±0.2 7 6.5 0 ±0.4 1 6.1 0 ±0.6 6 6.5 2 ±0.2 0 7.3 5 ±0.0 7*6.3 6 ±0.4 8 6.7 1 ±0.2 4**6.6 3 ±0.4 8 6.6 6 ±0.4 5 6.7 4 ±0.0 1 5.9 0 ±0.3 6 6.2 9 ±0.4 8 6.0 0 ±0.5 1 6.5 0 ±0.5 0 6.7 2 ±0.2 8 5.9 9 ±0.5 2 6.0 9 ±0.3 9 6.2 8 ±0.7 5 6.8 6 ±0.6 8 6.7 6 ±0.1 5 1 2 2±6 1 2 9±7 1 2 6±1 3 1 3 6±1 1 1 5 5±1*1 2 7±1 0 1 3 5±7*1 3 5±8 1 3 8±1 3 1 4 3±4 1 1 6±4 1 2 5±8 1 2 4±1 3 1 3 3±1 3 1 4 4±2 1 2 3±1 0 1 2 6±7 1 3 4±1 4 1 4 6±1 0 1 4 1±4檢測時間H C T（%）M C V（f L）M C H（p g）A 3組B組A 1組A 2組A 3組B組A 1組A 2組A 3組B組t 1 t 2 t 3 t 4 t 5 A 1組3 7.4 ±1.6 4 0.3 ±2.2 3 7.4 ±4.1 4 1.1 ±2.7 5 6.8 ±0.4**A 2組3 9.2 ±3.1 4 1.7 ±2.0 4 0.4 ±2.2 4 2.0 ±3.7 5 2.9 ±2.0 3 5.8 ±1.5 3 8.7 ±2.8 3 7.1 ±3.9 4 0.4 ±3.9 5 2.7 ±0.4 3 8.3 ±2.9 3 9.1 ±2.2 4 0.0 ±4.2 4 3.8 ±3.0 5 3.1 ±0.1 6 1.9 ±1.3*6 2.0 ±1.2*6 1.3 ±1.4*6 3.0 ±2.7 7 7.3 ±0.1 6 1.6 ±1.5*6 2.1 ±1.6*6 1.1 ±2.2*6 2.9 ±2.1 7 8.6 ±2.8 6 0.8 ±2.9*6 1.5 ±1.1**6 1.8 ±2.5 6 2.1 ±1.7 7 8.4 ±2.7 6 4.0 ±1.5 6 4.3 ±1.7 6 3.8 ±1.4 6 4.0 ±2.2 7 8.6 ±2.0 2 0.1 ±0.4 1 9.8 ±0.3**2 0.7 ±0.5 2 0.9 ±1.1 2 1.1 ±0.0 2 0.0 ±0.6 2 0.1 ±0.7 2 0.4 ±0.9 2 0.7 ±0.9 2 1.2 ±0.4 1 9.6 ±0.8*1 9.8 ±0.4**2 0.6 ±1.0 2 0.4 ±0.5 2 1.4 ±0.6 2 0.5 ±0.4 2 0.6 ±0.4 2 1.3 ±0.6 2 1.3 ±0.7 2 0.9 ±0.1檢測時間M C H C（g／d L） C H C M（g／d L）C H（p g）A 2組A 3組B組A 1組A 2組A 3組B組A 1組A 2組A 3組B組2 0.8 ±0.4 2 0.9 ±0.4 2 0.8 ±0.5 2 0.9 ±0.7 2 0.5 ±0.0檢測時間t 1 t 2 t 3 t 4 t 5 A 1組3 2 6±7 3 2 0±5 3 3 8±4 3 3 2±4 2 7 3±0 3 2 4±2 3 2 4±4 3 3 4±4 3 2 9±4 2 7 0±4 3 2 3±5 3 2 3±4 3 3 4±7 3 2 8±2*2 7 3±2 3 2 1±4 3 2 1±4 3 3 4±3 3 3 3±3 2 6 6±8 3 2 6±7 3 2 6±3 3 2 7±2 3 2 8±4 2 6 7±1 3 2 7±4 3 2 7±5 3 2 7±3 3 2 8±3 2 6 4±1 3 3 2±4 3 2 8±3 3 2 7±6 3 2 6±3 2 6 5±4 3 2 7±4 3 2 7±4 3 2 7±4 3 2 9±3 2 6 2±6 2 0.1 ±0.4 2 0.1 ±0.3**2 0.0 ±0.5*2 0.6 ±1.1 2 0.5 ±0.1 2 0.1 ±0.7 2 0.2 ±0.7 1 9.9 ±0.8 2 0.5 ±0.8 2 0.6 ±0.7 2 0.1 ±0.9 2 0.0 ±0.5**2 0.1 ±1.0 2 0.2 ±0.4 2 0.7 ±0.4 R D W（%）H D W（g／d L） P L T（×1 0 3／μ L）A 2組A 3組B組A 1組A 2組A 3組B組A 1組A 2組A 3組B組t 1 t 2 t 3 t 4 t 5 A 1組1 4.4 ±0.4*1 4.8 ±0.6 1 3.4 ±0.4 1 3.6±0.7 1 4.8 ±0.2 1 4.3 ±0.6 1 4.6 ±0.7 1 3.9 ±0.4 1 4.3±0.6 1 3.9 ±0.6 1 4.3 ±0.9 1 4.7 ±0.9 1 3.5 ±0.7 1 3.7±0.2 1 4.6 ±0.1 1 3.6 ±0.6 1 4.0 ±0.6 1 3.7 ±0.7 1 3.5±0.7 1 4.4 ±0.1 1 9.6 ±1.0 2 0.2 ±0.7 1 9.9 ±0.9 2 0.1±0.9 1 6.3 ±0.4 2 0.3 ±0.9 2 1.2 ±1.1 2 0.8 ±0.7 2 0.3±0.3 1 3.8 ±0.1*2 0.4 ±1.1 2 1.5 ±1.0 2 0.0 ±0.9 2 0.1 ±0.3 1 4.8 ±0.6 1 9.5 ±0.6 2 0.8 ±1.8 2 0.5 ±1.1 2 0.2 ±0.6 1 5.2 ±0.4 8 8±3 2 1 1 4±3 3 1 1 6±1 9 1 1 7±3 4 2 2 1±2 2 9 5±2 6 8 0±2 9 1 2 8±3 4 1 3 3±2 8 2 5 3±5 4 1 0 7±4 9 1 0 2±4 1 1 1 5±2 0 8 0±4 0 2 6 6±6 7 7 4±3 4 8 5±3 1 1 1 2±5 3 9 4±2 3 2 4 1±6檢測時間M P V（f L） N E U T（×1 0 3／μ L） L Y M P H（×1 0 3／μ L）A 2組A 3組B組A 1組A 2組A 3組B組A 1組A 2組A 3組B組5.1 ±1.2 4.4 ±1.0 5.4 ±1.1 4.7 ±1.3 1 0.3 ±1.4檢測時間t 1 t 2 t 3 t 4 t 5 A 1組1 2.3 ±2.2 1 0.6 ±1.1*1 6.5 ±3.0 1 2.2 ±1.6 1 0.4 ±0.1 1 1.0 ±0.9 1 0.7 ±1.0*1 5.5 ±1.5 1 0.2 ±2.3 1 0.4 ±0.2 1 1.3 ±0.8 1 1.8 ±1.4 1 4.2 ±0.9 1 4.7 ±5.7 1 0.2 ±0.1 1 1.7 ±1.6 1 2.1 ±0.8 1 5.4 ±2.5 1 3.3 ±1.6 1 0.0 ±0.1 4.9 ±1.4 4.1 ±0.7 5.0 ±1.3 6.4 ±4.5 7.2 ±0.6 6.0 ±1.4*5.0 ±1.3 6.1 ±1.7 5.5 ±0.6 6.4 ±1.3 5.0 ±1.9 5.0 ±1.9 5.3 ±1.2 5.5 ±0.9 8.9 ±2.4 4.5 ±0.8 4.6 ±0.9 5.6 ±0.9 6.0 ±0.8 7.3 ±0.0 4.9 ±0.7 5.1 ±0.4 5.2 ±0.5 3.3 ±0.7 9.1 ±0.6 4.8 ± 0.6 4.2 ± 0.6 5.3 ±1.0 3.8 ±0.6 7.1 ±1.1 5.7 ±1.7 5.6 ±1.2 4.7 ±0.7 3.9 ±0.5 7.1 ±1.5 M O N O（×1 0 3／μ L） E O S（×1 0 3／μ L） B A S O（×1 0 3／μ L）A 1組A 2組A 3組B組A 1組A 2組A 3組B組A 1組A 2組A 3組B組t 1 t 2 t 3 t 4 t 5 0.7 4 ±0.0 9 0.5 4 ±0.0 4 0.6 3 ±0.1 3 0.6 4 ±0.2 8 0.6 9 ±0.0 2 0.6 1 ±0.1 0 0.5 8 ±0.0 9 0.5 5 ±0.1 0 0.4 3 ±0.0 8 0.9 0 ±0.2 9 0.7 3 ±0.1 7 0.6 3 ±0.1 2 0.5 7 ±0.1 0 0.5 4 ±0.1 0 0.9 5 ±0.0 1 0.7 1 ±0.1 2 0.6 0 ±0.0 8 0.6 1 ±0.0 9 0.5 8 ±0.1 5 1.4 8 ±0.3 5 0.7 1 ±0.3 7 0.4 4 ±0.2 5 0.6 0 ±0.5 6 0.2 6 ±0.0 4 1.1 6 ±0.1 7 0.4 8 ±0.1 7 0.3 4 ±0.1 4 0.3 3 ±0.1 4 0.2 5 ±0.0 7 0.9 0 ±0.2 8 0.9 2 ±0.6 8 0.5 4 ±0.4 2 0.4 0 ±0.1 6 0.3 3 ±0.1 5 0.8 1 ±0.3 4 0.8 2 ±0.5 2 0.6 2 ±0.4 8 0.5 9 ±0.3 3 0.4 7 ±0.2 1 0.4 9 ±0.3 7 0.0 7 ±0.0 2 0.0 9 ±0.0 4 0.0 5 ±0.0 3 0.0 5 ±0.0 2 0.1 1 ±0.0 0 0.0 8 ± 0.0 2 0.0 8 ±0.0 2 0.0 7 ±0.0 2 0.0 5 ±0.0 1 0.0 8 ±0.0 1*0.0 9 ±0.0 2 0.0 8 ±0.0 2 0.0 7 ±0.0 2 0.0 6 ±0.0 2 0.0 8 ±0.0 0*0.0 8 ±0.0 3 0.0 8 ±0.0 2 0.0 7 ±0.0 1 0.0 9 ±0.0 5 0.1 4 ±0.0 1

臟器系數(shù)：t3，t4，t5時剖檢，給藥對犬臟器的質量及系數(shù)無明顯影響（P＞0.05）。詳見表 5。

大體觀察和病理組織學：t3，t4，t5時分別對犬進行常規(guī)大體觀察和病理組織學檢查。3期檢查僅個別犬出現(xiàn)與劑量無關的膀胱炎、腎髓質炎性細胞浸潤；同時，注射局部出現(xiàn)可逆并呈現(xiàn)一定劑量相關性的血管及其周圍組織病變，以程度不同的注射局部血管壁肉芽組織增生、炎性細胞浸潤、血管外結締組織輕度水腫為主，未見明顯血管壞死等嚴重刺激性病變，考慮為與受試物劑量

相關的反復靜脈滴注引起的物理性刺激，而非受試物的直接毒性損害作用。在本試驗劑量下，靜脈滴注注射用牡荊素3個月并停藥1個月對Beagle犬各臟器組織無實質性損傷作用。相關病理圖見圖3。

續(xù)表2 注射用牡荊素對Beagle犬血液學的影響（±s，n=6）

續(xù)表2 注射用牡荊素對Beagle犬血液學的影響（±s，n=6）

注：與 B 組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01；t1為給藥前 2周，t2為給藥前 1周，t3為給藥 1.5個月，t4為停藥次日，t5為恢復期結束；下表同。各檢測指標依次為白細胞計數(shù)、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白濃度、紅細胞比容、紅細胞平均體積、紅細胞平均血紅蛋白含量、紅細胞平均血紅蛋白濃度、平均紅細胞血紅蛋白濃度、血紅蛋白量、紅細胞體積分布寬度、紅細胞血紅蛋白分布寬度、血小板濃度、平均血小板體積、中性粒細胞濃度、淋巴細胞濃度、單核細胞濃度、嗜酸性粒細胞濃度、嗜堿性粒細胞濃度、大的不染色細胞濃度、網織紅細胞濃度、平均網織紅細胞體積、網織紅細胞內血紅蛋白濃度、網織紅細胞血紅蛋白量、凝血酶原時間。

檢測時間LUC（×103／μL） RETIC（×109／L） MCVr（fL）A1組A2組A3組B組A1組A3組B組A1組A2組A3組B組t1 t2 t3 t4 t5 0.09 ±0.03 0.09 ±0.02 0.07 ±0.02 0.12 ±0.03 0.19 ±0.01*0.07 ±0.01*0.07 ± 0.02 0.07 ± 0.01 0.07 ± 0.02 0.21 ± 0.08 0.09 ±0.02 0.08 ±0.01 0.08 ±0.02 0.09 ±0.03 0.20 ±0.01*0.10 ±0.03 0.10 ±0.03 0.09 ±0.02 0.13 ±0.07 0.33 ±0.04 108.9 ±31.8 133.7 ±17.8 108.8 ±60.1 82.7 ±30.7 43.6 ±1.8 A2組129.2 ±42.5 140.7 ±45.9 103.4 ±64.8 63.2 ±14.0 36.0 ±21.3 96.2 ±17.5 158.8 ±62.5 136.9 ±105.0 87.6 ±33.8 49.2 ±26.6 116.4 ±23.1 140.0 ±39.9 87.3 ±37.3 77.9 ±21.2 35.1 ±6.9 84.6 ±1.4 84.0 ±2.4 84.0 ±2.6**84.0 ±2.2 98.8 ±1.6 84.7 ±2.6 84.1 ±1.8 84.9 ±4.4*86.5 ±2.4 100.0 ±0.6 83.0 ±2.1 84.2 ±1.6 83.4 ±2.9**83.1 ±0.4*99.3 ±1.4 84.9 ±0.8 85.3 ±1.9 89.6 ±1.1 85.7 ±1.7 99.3 ±1.0檢測時間CHCMr（g／dL）CHr（pg）PT（s）A1組A2組A3組B組A1組A2組A3組B組A1組A2組A3組B組6.9 ±0.6 6.8 ±0.2 6.5 ±0.3 5.8 ±0.2 6.0 ±0.1 t1 t2 t3 t4 t5 292.0 ±3.0 293.0 ±4.0 298.0 ±10*298.0 ±4.0 257.0 ±3.0 291.0 ±4.0 292.0 ±5.0 287.0 ±12.0 295.0 ±3.0 259.0 ±2.0 295.0 ±4.0 291.0 ±8.0 298.0 ±22.0 300.0 ±2.0 260.0 ±1.0 293.0±3.0 293.0±4.0 284.0 ±6.0 294.0 ±5.0 253.0 ±6.0 24.6 ±0.5 24.5 ±0.6 24.9 ±0.5 24.9 ±0.7 25.3 ±0.1 24.5 ±0.7 24.4 ±0.8 24.2 ±1.8 25.4 ±0.8 25.7 ±0.0 24.3 ±0.6 24.3 ±0.3 24.7 ±1.5 24.9 ±0.1 25.7 ±0.1 24.8 ±0.3 24.8 ±0.6 25.4 ±0.8 25.1 ±0.7 25.1 ±0.4 6.9 ±0.3 7.3 ±0.5*6.5 ±0.3 6.0 ±0.3 6.2 ±0.1 7.0 ±0.3 7.3 ±0.7 6.5 ±0.4 5.7 ±0.1 6.0 ±0.1 7.3 ±0.4 6.9 ±0.4 6.8 ±0.4 5.9 ±0.2 6.1 ±0.1

表3 注射用牡荊素對Beagle犬血清生化學指標的影響（±s，n=6）

表3 注射用牡荊素對Beagle犬血清生化學指標的影響（±s，n=6）

檢測時間ALT[nmol／（s·L）] AST[nmol／（s·L）] ALP[nmol／（s·L）]A1組A2組A3組B組A1組A2組A3組B組A1組A2組A3組B組t1 t2 t3 t4 t5 401±35 429±69 1 936±1 494*855±567 489±103 387±86 405±81 602±117 710±202 445±86 373±41 403±49 527±100 751±246 534±62 374±61 387±60 490±109 557±164 579±213 482±35 453±71 609±70*497±99 427±16 503±67 412±67 542±77 555±70 653±47 519±71 479±57 555±96 583±85 501±40 507±56 432±48 527±45 566±72 481±60 2 998±281 2 936±269 5 128±2 634 2 212±170 1 782±445 3 344±520 3 106±340 2 765±526 1 941±194 2 083±10 3 137±996 3 060±796 2 682±649 2 917±762 2 414±387 3 007±615 2 879±475 2 765±699 2 706±1 313 1 957±229檢測時間Glu（mmol／L） TBil（μmol／L） TC（mmol／L）A1組A2組A3組B組A1組A2組A3組B組A1組A2組A3組B組t1 t2 t3 t4 t5 5.779 ±0.407 5.365 ±0.559 5.468 ±0.097 4.810±0.465 5.169 ±0.168 5.570 ±0.150 5.000 ±0.360 5.561 ±0.356 4.742±0.490 4.976 ±0.218 5.752 ±0.544 5.276 ±0.485 5.877 ±0.113 5.076±0.201 4.962 ±0.274 5.746 ±0.269 5.204 ±0.173 5.637 ±0.352 4.577±0.435 4.993 ±0.500 0.734 ±0.114 0.705 ±0.140**0.343 ±0.276 0.470±0.265 0.277 ±0.139 0.709 ±0.106 1.000 ±0.188 0.264 ±0.083 0.636±0.388*0.298 ±0.197 0.815 ±0.055 0.854 ±0.127 0.306 ±0.142 0.536±0.186*0.493 ±0.353 0.885 ±0.271 0.937 ±0.091 0.334 ±0.159 0.092±0.185 0.292 ±0.407 5.395 ±0.479 5.720 ±0.620 5.210 ±1.043 6.049±0.939 6.207 ±1.912 5.990 ±0.552 6.000 ±0.432 5.605 ±0.859 6.142±0.713 6.540 ±0.549 5.282 ±0.801 5.266 ±0.687 4.869 ±0.795 5.832±0.455 6.069 ±0.130*5.834 ±0.651 6.382 ±0.709 5.727 ±0.785 5.978±0.910 7.568 ±0.400檢測時間ALB（g／L）TP（g／L） BUN（mmol／L）A1組A2組A3組B組A1組A2組A3組B組A1組A2組A3組B組t1 t2 t3 t4 t5 23.86±0.94 24.96±1.05 27.87±1.74 31.46±2.67 32.61±3.13 24.33±0.82 25.00±0.96 29.13±1.91 30.30±5.01 31.55±0.70 23.51±2.08 24.92±1.34 28.98±2.09 31.11±2.39 30.66±2.08 24.09±1.45 25.05±1.35 29.74±1.19 29.95±1.14 34.65±4.89 49.59±1.44 51.54±2.06 54.49±2.94 60.41±2.40 67.91±0.32**53.88±1.27 56.00±1.78 56.58±1.70 60.75±2.69 66.98±0.62**53.81±3.78 56.10±3.77 59.79±3.48 61.12±3.57 65.91±4.36 53.02±4.69 54.81±4.72 58.73±4.15 61.37±6.11 77.58±1.21 2.399±0.525 2.968±0.588 1.933±0.339**2.322±0.156**3.175±1.265 2.741±0.313 3.000±0.449 2.444±0.422*3.030±0.611 2.546±0.066 2.455±0.254 3.658±0.461 2.133±0.444**2.812±0.355*3.419±0.728 2.926±0.645 3.577±0.719 3.387±0.816 3.911±0.589 2.853±1.265檢測時間Crea（μmol／L） γ-GT[nmol／（s·L）] CK[nmol／（s·L）]A1組A2組A3組B組A1組A2組A3組B組A1組A2組A3組B組t1 t2 t3 t4 t5 43.58 ±2.29 59.61 ±2.98 74.87 ±3.03**82.65 ±4.52 98.02 ±4.31 49.24 ±3.54 66.00 ±2.46 80.25 ±4.12 86.25 ±2.99 108.08 ±0.43 45.50 ± 4.36 64.22 ±5.26 74.58 ±11.36 85.24 ±3.64 104.73 ±6.03 46.46 ±5.52 66.24 ±7.07 84.76 ±4.16 86.25 ±5.22 107.16 ±3.45 54±22 51±23 126±96 43±30 53±55 56±21 60±13 62±13 25±18 41±58 60±7 59±15 65±5 29±43 39±55 70±23 51±14 60±4 27±21 74±11 5 042±637 4 359±1 819 4 593±1 550 2 954±626*2 720±687 5 684±2 269 4 077±2 260 4 961±1 686 3 887±531 4 130±1 305 5 120±897 4 737±801 4 233±742 3 697±340 3 787±640 5 595±1 363 4 267±1 251 4 763±986 4 431±958 2 725±332

續(xù)表3 注射用牡荊素對Beagle犬血清生化學指標的影響（±s，n=6）

續(xù)表3 注射用牡荊素對Beagle犬血清生化學指標的影響（±s，n=6）

注：各檢測指標依次為丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、堿性磷酸酶、血糖、總膽紅素、總膽固醇、白蛋白、總蛋白、尿素氮、肌酐、γ-谷氨酰轉肽酶、肌酸激酶、三酰甘油、鈉離子濃度、鉀離子濃度、氯離子濃度、總鈣濃度。

檢測時間TG（mmol／L） Na+（mmol／L） K+（mmol／L）A1組A2組0.586 ±0.086 0.571 ±0.086 0.650±0.221 0.494 ±0.050 0.469 ±0.001*A3組B組A1組A2組A3組B組A1組A2組A3組B組t1 t2 t3 t4 t5 0.545 ±0.043 0.582 ±0.046 0.502 ±0.121 0.483 ±0.143 0.518 ±0.134 0.550 ±0.089 0.566 ±0.078 0.489±0.102 0.512 ±0.057 0.531 ±0.009 0.536 ±0.079 0.551 ±0.094 0.451±0.047 0.531 ±0.113 0.598 ±0.040 143.5 ±0.6 143.9 ±0.5 145.9 ±0.6 145.8 ±0.1 145.0 ±0.0 144.5 ±0.9*144.7 ±0.8*145.7 ±0.7 146.4 ±0.8 145.3 ±0.6 143.5 ±1.0 143.3 ±0.3 145.5±0.9 145.3 ±0.5 144.6 ±0.6 143.4 ±0.4 143.7 ±0.4 144.7±2.8 145.1 ±0.9 145.5 ±0.3 4.74 ±0.10*4.89 ±0.19 4.57 ±0.18 4，74 ±0.03 4.26 ±0.05 4.59 ± 0.23 4.96 ± 0.18 4.63±0.10 4.29 ± 0.06 4.18 ± 0.21 4.58 ±0.14 5.16 ±0.21 4.64±0.15 4.26 ±0.18 4.40 ±0.19 4.59 ±0.09 5.02 ±0.19 4.71 ±0.19 4.65 ±0.50 4.41 ±0.19檢測時間Cl-（mmol／L）TCa（mmol／L）A1組A2組A3組B組A1組A2組A3組B t1 t2 t3 t4 t5 107.9 ±0.6 108.2 ±1.2 110.6 ±0.5 111.1 ±0.4**109.3 ±0.4 108.2 ±0.6 108.4 ±1.0 111.8 ±1.4 111.2 ±0.9**109.8 ±1.2 107.5 ±1.0 108.1 ±0.8 111.6 ±1.2 110.5 ±0.7*109.2 ±0.3 107.6 ±0.5 107.7±0.4 110.6 ±3.2 109.2 ±0.2 109.1±0.8 2.54 ±0.02 2.49 ±0.05 2.78 ±0.18 2.43 ±0.07 3.12±0.06 2.57 ±0.03 2.51 ±0.04 2.65 ±0.19 2.40 ±0.01 3.15±0.03 2.57 ±0.01 2.49 ±0.04 2.63 ±0.08 2.35 ±0.19 3.13±0.03 2.55 ±0.03 2.51±0.04 2.58 ±0.14 2.41 ±0.03 3.07±0.08

表4 注射用牡荊素對Beagle犬心電圖的影響（±s，n=6）

表4 注射用牡荊素對Beagle犬心電圖的影響（±s，n=6）

時間（s） 電壓（mV）組別 檢查時間心率（次／分） P-R間期（s） Q-T間期（s） Q-T比值 S-T段（mV）P波QRS波0.04 ± 0.01 0.04 ± 0.01 0.06 ± 0.01 0.06 ± 0.01 0.05 ± 0.01 0.05 ± 0.00 0.05 ± 0.01 0.06 ± 0.01 0.05 ± 0.01 0.05 ± 0.01 0.05 ± 0.01 0.06 ± 0.01 0.05 ± 0.00 0.04 ± 0.01 0.05 ± 0.00 0.05 ± 0.01 P波R波T波A1組A2組A3組B組t0 t3 t4 t5 t0 t3 t4 t5 t0 t3 t4 t5 t0 t3 t4 t5 135±13 131±16 110±19 109±20 131±5 130±5 112±15 115±17 142±14 144±13 112±19 110±28 152±34 158±36 121±24 117±18 0.10 ± 0.01 0.11 ±0.03 0.09 ±0.02 0.09 ±0.00 0.10 ± 0.02 0.10 ±0.01 0.10 ±0.01 0.12 ±0.01 0.11 ±0.01 0.11 ± 0.01 0.10 ±0.03 0.09 ±0.00 0.09 ±0.02 0.10 ±0.02 0.11 ± 0.02 0.11 ±0.01 0.20 ±0.03 0.20 ±0.03 0.24 ±0.05 0.22 ±0.01 0.18 ±0.00 0.19 ±0.01 0.22 ±0.03 0.25 ±0.05 0.19 ±0.01 0.19 ±0.02 0.20 ±0.02 0.21 ±0.04 0.19 ±0.02 0.18 ±0.02 0.22 ±0.05 0.21 ±0.00 0.30 ±0.05 0.29 ±0.05 0.33 ±0.06 0.30 ±0.01 0.27 ± 0.01 0.27 ±0.01 0.30 ±0.04 0.34 ±0.08 0.29 ± 0.02 0.29 ±0.03 0.28 ±0.02 0.28 ± 0.01 0.29 ±0.02 0.29 ± 0.03 0.32 ±0.05 0.29 ±0.03 0.06 ±0.03 0.03 ±0.04 0.00 ±0.07 0.06 ± 0.01 0.04 ±0.02 0.07 ±0.03-0.01 ± 0.08 0.09 ±0.01 0.06 ± 0.03 0.06 ±0.03 0.05 ±0.02 0.05 ± 0.04 0.03 ±0.05 0.04 ± 0.06 0.03 ±0.07 0.05 ±0.07 0.06 ± 0.01 0.05 ±0.01 0.04 ±0.01 0.04 ± 0.00 0.06 ±0.02 0.07 ± 0.01 0.06 ±0.01 0.05 ±0.01 0.05 ± 0.01 0.06 ±0.02 0.06 ±0.02 0.04 ±0.01 0.05 ± 0.01 0.06 ±0.01 0.07 ±0.01 0.06 ±0.01 0.24 ± 0.07 0.20 ± 0.04 0.18 ± 0.09 0.21 ± 0.09 0.22 ± 0.08 0.21 ± 0.06 0.22 ± 0.07 0.16 ± 0.07 0.20 ± 0.04 0.22 ± 0.03 0.26 ± 0.06 0.25 ± 0.01 0.26 ± 0.04 0.26 ± 0.05 0.28 ± 0.06 0.28 ± 0.02 1.78 ±0.15 1.74 ±0.22 1.73 ± 1.20 2.49 ±0.49 1.82 ±0.38 1.85 ±0.37 2.24 ±1.01 2.18 ± 1.84 1.95 ±0.33 2.00 ±0.36 1.33 ±0.82 1.81 ± 0.91 2.00 ±0.35 1.99 ±0.38 2.55 ± 0.30 2.69 ±0.47 0.44 ±0.15 0.41 ±0.19 0.19 ± 0.08 0.21 ±0.04 0.45 ±0.07 0.47 ±0.12 0.17 ± 0.33 0.03 ±0.27 0.33 ±0.06 0.40 ± 0.07 0.20 ±0.08 0.06 ± 0.34 0.36 ±0.26 0.35 ±0.24 0.33 ± 0.15 0.30 ±0.02

3 討論

近年，隨著對中藥注射劑研發(fā)力度的增加，其用藥安全性也被廣泛關注。已上市的中藥注射劑出現(xiàn)臨床不良反應的報道也逐年增多，為保證注射用牡荊素的臨床用藥安全，依據(jù)長期毒性實驗要求，需進一步研究牡荊素的用藥安全性，大劑量長時間重復給藥，檢測藥物可能對人體產生不良反應，判斷藥物對靶器官的毒性損傷，推測安全范圍，對臨床用藥具有重要指導意義。故設計長期毒性試驗周期，在注射用牡荊素50，20，8 mg／kg劑量下，連續(xù)給藥3個月，對照組靜脈滴注等體積0.9%氯化鈉注射液，并對部分受試動物停藥后連續(xù)觀察4周，觀察犬一般狀況、血液生化指標、大體解剖及病理學特征。結果顯示，不同劑量注射用牡荊素對各指標總體上無明顯影響，且在Beagle犬體內均呈線性方式代謝，暴露量隨給藥時間延長而有所減小，未產生明顯的毒副反應，中毒靶器官也未顯示，故其安全無毒劑量大于 50 mg ／（kg·d）。

綜上所述，在本試驗劑量條件下，Beagle犬連續(xù)3個月靜脈滴注注射用牡荊素較安全，未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副反應，安全無毒劑量大于 50 mg ／（kg·d）。

表5 注射用牡荊素對Beagle犬臟器的影響（±s，n=6）

表5 注射用牡荊素對Beagle犬臟器的影響（±s，n=6）

項目 時間A1組 A2組 A3組 B組項目 時間A1組 A2組 A3組 B組心臟 質量（g）系數(shù)肝臟 質量（g）系數(shù)脾臟 質量（g）系數(shù)肺臟 質量（g）系數(shù)腎臟 質量（g）系數(shù)腦 質量（g）系數(shù)t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 65.39 ±0.06 80.91 ±13.24 85.98 ±19.24 6.96 ±0.31 7.02 ±0.29 7.43 ±0.94 278.25±31.49 286.19 ±20.85 359.89 ±31.90 29.56±2.02 24.96 ±1.26 31.32 ±5.86 49.23±10.25 56.27 ±20.00 46.55±7.95 5.27 ±1.33 4.82 ±1.15 4.03±0.29 82.19 ±12.86 95.05 ±14.57 80.40±4.84 8.72 ±0.97 8.25 ±0.25 7.00 ±0.27 45.27 ±1.60 47.89 ±3.67 49.53 ±6.82 4.82 ±0.05 4.18 ±0.19 4.12 ±0.19 77.54 ±2.00 75.13 ±2.56 77.20 ±3.49 8.25 ±0.16 6.57 ±0.59 6.73±0.36 73.89 ±1.58 72.90±15.23 80.18 ±9.77 7.86 ±0.07 6.57 ±0.92 6.93 ±0.72 286.38 ±2.90 320.65 ±53.20 263.43 ±11.61 30.48 ±0.61 28.92 ±2.78 22.80 ±0.59 49.90 ±7.70 42.14 ±1.07 49.03 ±2.09 5.32 ±0.98 3.83 ±0.37 4.24 ±0.10 88.05 ±2.28 78.28±14.92 85.60 ±0.98 9.37 ±0.04 7.05±0.85 7.41 ±0.05 38.56±3.31 42.80 ±1.11 43.80 ±5.90 4.10±0.23 3.88 ±0.17 3.79 ±0.44 81.02±3.37 76.66 ±12.63 69.21 ±2.50 8.63±0.62 6.91 ±0.66 5.99 ±0.11 77.89 ±6.83 77.02 ±5.46 84.06 ±12.40 8.08 ±0.18 7.10 ±0.10 7.39±0.20 266.31 ±8.47 296.26 ±3.67 308.38 ±34.69 27.81 ±3.93 27.39 ±1.98 27.20 ±1.68 51.23 ±1.56 43.76 ±10.20 44.47 ±9.91 5.33 ±0.42 4.01 ±0.60 3.88 ±0.20 101.16 ±8.56 83.57 ±1.90 82.15 ±12.25 10.50 ±0.27 7.72 ±0.48 7.22 ±0.18 46.36 ±1.25 44.63 ±5.75 43.27 ±3.43 4.84 ±0.66 4.11 ±0.18 3.83 ±0.36 73.45 ±4.53 77.31 ±4.69 78.08 ±0.88 7.63 ±0.37 7.13 ±0.17 6.95 ±1.13 73.99±9.96 76.54 ±0.18 85.26 ±12.66 7.54±0.80 6.87 ±0.23 7.22 ±0.27 325.63 ±53.14 311.14 ±22.73 271.93 ±76.26 33.16 ±4.47 27.95 ±2.93 22.74 ±2.23 59.97 ±5.18 59.23 ±2.49 49.83 ±20.90 6.11±0.35 5.31 ±0.05 4.11 ±1.00 86.71±8.04 90.30 ±7.39 90.69 ±19.64 8.84±0.57 8.09 ±0.43 7.63 ±0.25 40.18 ±0.87 42.35 ±7.26 42.46±14.80 4.10 ±0.21 3.81 ±0.77 3.53±0.60 80.95 ±7.72 80.92 ±0.72 78.38±4.14 8.25 ±0.55 7.26 ±0.17 6.70 ±0.89胸腺 質量（g）系數(shù)腎上腺 質量（g）系數(shù)睪丸 質量（g）系數(shù)附睪 質量（g）系數(shù)子宮 質量（g）系數(shù)卵巢 質量（g）系數(shù)t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 t3 t4 t5 18.01 ±5.01 16.17 ±2.35 10.67 ±3.05 1.93 ±0.62 1.40 ±0.03 0.95 ±0.36 0.76 ±0.04 0.97 ±0.14 1.08 ±0.02 0.08 ±0.00 0.09 ±0.02 0.09 ±0.01 5.930 11.140 19.070 0.610 0.890 1.550 1.650 2.160 4.479 0.240 0.300 0.550 1.55 1.43 16.87 0.17 0.14 1.58 0.64 1.00 2.61 0.07 0.10 0.24 18.61 ±0.81 15.52±1.91 14.11 ±4.49 1.98 ±0.15 1.41 ±0.27 1.22 ±0.41 1.20 ±0.07 0.88 ±0.13 1.21 ±0.09 0.13 ±0.00 0.08 ±0.02 0.10 ±0.01 2.680 17.730 14.750 0.280 1.530 1.290 1.050 2.610 3.840 0.130 0.360 0.600 2.24 2.77 17.85 0.24 0.26 1.53 0.85 0.89 2.09 0.09 0.08 0.18 19.24 ±0.86 18.11 ±8.94 17.20 ±3.33 2.01 ±0.31 1.64 ±0.69 1.57±0.56 1.18 ±0.25 0.87 ±0.11 0.94±0.03 0.12 ±0.01 0.08 ±0.00 0.08±0.01 10.720 12.480 18.930 1.030 1.090 1.480 2.660 2.220 4.340 0.330 0.310 0.600 1.55 1.50 3.47 0.17 0.15 0.35 0.52 0.82 0.82 0.06 0.08 0.08 22.71±2.96 25.86 ±4.03 16.02 ±0.40 2.31 ±0.24 2.33 ±0.44 1.37 ±0.22 0.78 ±0.11 0.91 ±0.07 1.09 ±0.23 0.08 ±0.01 0.08 ±0.01 0.09 ±0.00 8.650 11.480 22.830 0.870 1.050 1.700 2.310 2.240 4.550 0.290 0.320 0.650 1.77 2.41 2.87 0.18 0.21 0.28 0.80 1.05 0.77 0.08 0.09 0.07