蟠桃丸化裁方對自發性高血壓大鼠主要安全性指標的影響

郭曼萍，施偉麗，趙俊男，徐鳳芹，叢偉紅，陳可冀

蟠桃丸是清代宮廷御醫為乾隆皇帝特制的保健養生秘方，由人參、天冬、麥冬、枸杞子、地黃、當歸、分心木等組成，20世紀80年代國醫大師陳可冀院士主持挖掘清代宮廷醫藥檔案時將其整理并用于大眾，成藥名為清宮壽桃丸。近代研究表明，蟠桃丸不僅有養生保健作用，在治療老年認知障礙、高血壓病、冠心病、糖尿病、脂代謝異常、慢性腎功能不全、前列腺增生等方面也有較好效果[1-6]。

中醫藥在臨床中取得療效的同時，其安全性也越來越引起關注。目前，臨床上常借助常規血液學分析、血液生化檢測、尿樣分析和病理學檢查等來判斷中藥的安全性[7]，血液相關檢測中的溶血相關指標、肝腎功能相關指標、膽堿酯酶是常用的安全性評價指標。蟠桃丸化裁方是蟠桃丸的精簡方，為陳可冀院士臨床上治療衰老、腎虛相關疾病的經驗方。根據臨床相關疾病的常見用藥時長，本實驗通過觀察自發性高血壓大鼠(spontaneous hypertensive rats，SHR)給予蟠桃丸化裁方11周后紅細胞、血紅蛋白、膽紅素、肝腎功能、膽堿酯酶、堿性磷酸酶等指標的改變，探討其安全性，以期為臨床應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要耗材及儀器 2 mL EDTA K3采血管，生產批號D160433W；5 mL血清促凝管(Z)，生產批號A16013WC，由西苑醫院提供；全自動血液分析儀(日本東亞SYSMEX株式會Sysmex XE-5000)、全自動生化分析儀(瑞士羅氏公司 Cobas8000)由西苑醫院檢驗科提供。

1.2 實驗動物 12周齡SPF級WKY大鼠12只，SPF級SHR 60只，雌雄各半，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司。SPF級動物房適應性飼養3 d后分為6組：對照組(WKY)、模型組(SHR)、厄貝沙坦+多奈哌齊組、多奈哌齊組、蟠桃丸化裁方低劑量組、蟠桃丸化裁方高劑量組，每組12只，雌雄各半。給予規律光照(晝夜各12 h)，自由飲食飲水，環境溫度(20±2)℃，相對濕度45%～70%。

1.3 藥物及給藥方法 厄貝沙坦片(安博維)，每片0.15 g，由賽諾菲(杭州)制藥有限公司提供，生產批號：J20130049；鹽酸多奈哌齊(安理申)，每片5 mg，由衛材(中國)藥業有限公司提供，生產批號：H20070181；蟠桃丸化裁方(組成：枸杞子、分心木等)，由中國中醫科學院西苑醫院制劑室提供。厄貝沙坦+多奈哌齊組按厄貝沙坦片15.50 mg/(kg·d)+鹽酸多奈哌齊0.52 mg/(kg·d)灌胃給藥，多奈哌齊組按鹽酸多奈哌齊0.52 mg/(kg·d)灌胃給藥，蟠桃丸化裁方低、高劑量組分別按蟠桃丸化裁方3.07 g/(kg·d)、6.14 g/(kg·d)灌胃給藥，模型組及正常對照組予等體積生理鹽水灌胃，給藥11周。

1.4 觀察指標

1.4.1 大鼠體重及一般情況觀察 各組大鼠每周測體重1次，觀察各組大鼠體重變化，每天給藥時觀察大鼠精神狀態、活動情況及毛色。

1.4.2 大鼠溶血相關指標檢測 實驗結束后腹主動脈采血，檢測血漿紅細胞數量、紅細胞比容、平均紅細胞體積、紅細胞分布寬度；血紅蛋白量、平均血紅蛋白含量、平均血紅蛋白濃度；血清直接、間接膽紅素及總膽紅素水平。

1.4.3 大鼠血清膽堿酯酶檢測 實驗結束后腹主動脈采血，檢測血清膽堿酯酶。

1.4.4 大鼠肝腎功能指標檢測 實驗結束后腹主動脈采血，檢測肝功能指標：天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、γ-谷氨酰轉移酶(γ-GT)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)；檢測腎功能指標：血肌酐、尿酸、尿素、尿素氮。

2 結 果

2.1 大鼠一般情況及體重觀察 對照組大鼠比較安靜，喜睡，膽小易驚，毛色發黃；模型組大鼠易受外界影響，活躍，毛色發白，給藥組與模型組比較未見明顯不同。分別統計雄性和雌性大鼠體重，發現雌鼠對照組體重較模型組顯著升高(P<0.01)，蟠桃丸化裁方高、低劑量組大鼠體重較模型組明顯升高(P<0.05或P<0.01)，詳見表1。雄鼠對照組體重與模型組比較差異無統計學意義(P>0.05)；蟠桃丸化裁方高、低劑量組大鼠體重較模型組升高(P<0.05或P<0.01)。詳見表2。

表1 蟠桃丸化裁方對SHR雌鼠體重的影響(±s) g

與對照組比較，1)P<0.01；與模型組比較，2)P<0.05，3)P<0.01

表2 蟠桃丸化裁方對SHR雄鼠體重的影響(±s) g

與模型組比較，1)P<0.05，2)P<0.01

2.2 蟠桃丸化裁方對溶血相關指標的影響 紅細胞數量、形態變化及膽紅素水平是間接反映溶血狀態的常用指標。各組間紅細胞計數、紅細胞比容、紅細胞平均比容、紅細胞分布寬度比較差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表3。與SHR模型組相比，蟠桃丸化裁方低劑量組平均血紅蛋白濃度明顯降低(P<0.05)，蟠桃丸化裁方高劑量組血紅蛋白、平均血紅蛋白濃度均明顯降低(P<0.05或P<0.01)，西藥組血紅蛋白相關指標差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表4。與SHR模型組相比，蟠桃丸化裁方低劑量組間接膽紅素、直接膽紅素水平明顯降低(P<0.05或P<0.01)，蟠桃丸化裁方高劑量組、西藥組直接膽紅素水平差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表5。

組別只數紅細胞計數(×1012/L)紅細胞比容(L/L)紅細胞平均體積(fL)紅細胞分布寬度(%)對照組129.34±0.140.44±0.0147.55±1.5217.17±0.43模型組129.32±0.490.42±0.0145.98±0.7816.99±0.65厄貝沙坦+多奈哌齊組129.10±0.630.41±0.0245.39±1.6216.91±0.84多奈哌齊組128.96±0.600.42±0.0146.47±1.6517.08±1.04蟠桃丸化裁方低劑量組129.10±0.510.42±0.0146.16±1.6216.78±0.67蟠桃丸化裁方高劑量組128.92±0.550.42±0.0246.12±1.7016.55±1.05

組別只數血紅蛋白(g/L)平均血紅蛋白含量(pg)平均血紅蛋白濃度(g/L)對照組12154.67±4.2716.55±0.46348.67±4.63模型組12149.42±6.7216.04±0.19349.00±4.05厄貝沙坦+多奈哌齊組12144.18±7.2415.85±0.54349.45±4.52多奈哌齊組12144.82±6.6816.17±0.41348.18±4.92蟠桃丸化裁方低劑量組12144.64±3.2015.93±0.75344.73±5.371)蟠桃丸化裁方高劑量組12141.64±6.732)15.90±0.43344.73±5.641)

與模型組比較，1)P<0.05，2)P<0.01

表5 蟠桃丸化裁方對大鼠膽紅素的影響(±s) μmol/L

與模型組比較，1)P<0.05，2)P<0.01

2.3 蟠桃丸化裁方對SHR血清膽堿酯酶水平的影響 與對照組比較，SHR模型組血清膽堿酯酶水平明顯升高(P<0.01)。與SHR模型組相比，多奈哌齊組及蟠桃丸化裁方高、低劑量組血清膽堿酯酶水平明顯升高(P<0.01)；厄貝沙坦+多奈哌齊組血清膽堿酯酶水平差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表6。

2.4 蟠桃丸化裁方對SHR 肝功能的影響 與WKY對照組比較，SHR模型組AST、γ-GT水平明顯升高(P<0.01)；與SHR模型組相比，各給藥組ALT、AST、γ-GT水平差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表7。

2.5 蟠桃丸化裁方對SHR腎功能的影響 與對照組相比，SHR模型組尿酸水平明顯升高(P<0.05)；與SHR模型組比較，各用藥組尿素、尿素氮、肌酐、尿酸水平差異無統計學意義(P>0.05)，肌酐、尿酸水平有下降趨勢。詳見表8。

表6 蟠桃丸化裁方對SHR血清膽堿酯酶的影響(±s)U/L

與對照組比較，1)P<0.01；與模型組比較，2)P<0.01

表7 蟠桃丸化裁方對SHR肝功能的影響(±s) U/L

與對照組比較，1)P<0.01

組別只數尿素(mmol/L)尿素氮(mg/dL)肌酐(μmol/L)尿酸(μmol/L)對照組126.61±1.2618.52±3.5226.63±5.0761.50±23.96模型組127.18±1.3720.10±3.8227.08±3.4597.08±21.011)厄貝沙坦+多奈哌齊組126.25±0.5317.50±1.4927.67±2.1589.42±14.27多奈哌齊組126.78±0.8018.97±2.2626.00±2.0095.08±20.27蟠桃丸化裁方低劑量組127.86±0.6322.00±1.7826.82±2.1489.45±19.53蟠桃丸化裁方高劑量組126.94±0.8919.44±2.5026.17±4.0493.58±17.13

與對照組比較，1)P<0.05

3 討 論

中醫藥在當今世界的醫療衛生保健事業中扮演著不可或缺的角色，但是中藥的安全性問題是客觀存在的，需要科學地進行評價。蟠桃丸有補腎生精、益元強壯的功效，在高血壓病、老年性癡呆等心腦血管疾病的治療中取得較好的療效，其精簡方——蟠桃丸化裁方是陳可冀院士的臨床經驗用方。研究表明，SHR可以作為篩選認知功能紊亂治療藥物的動物模型[8-11]。本實驗以SHR為高血壓合并認知障礙的動物模型，給藥11周，觀察了蟠桃丸化裁方對SHR紅細胞、血紅蛋白、血清膽紅素3個溶血指標的影響，同時檢測肝腎功能相關指標及血清膽堿酯酶。

紅細胞完整性的損害，定義為溶血。紅細胞功能障礙與心血管疾病的嚴重并發癥相關，如高血壓、出血、中風、心律失常和炎癥[12]。最近的實驗證據表明，紅細胞是具有額外功能的重要的組織間通信系統，紅細胞功能障礙與心血管疾病的一系列嚴重并發癥有關，如難以控制的高血壓[13]、出血并發癥[14]、室上性和室性心律失常以及炎癥反應[15]。血紅蛋白對紅細胞的功能至關重要，其在血管內溶血期間從細胞釋放到血漿中時，會產生一氧化氮的消耗、氧化應激和血管功能障礙[12]。血清膽紅素主要是由體內衰老的紅細胞發生裂解釋放出的血紅蛋白所產生，包括直接膽紅素和間接膽紅素兩種。紅細胞遭受較大破壞造成的溶血主要以間接膽紅素升高為主要特征[16-17]。肝臟受損時機體的總膽紅素及直接膽紅素濃度會出現明顯升高癥狀，常常能夠反映出較嚴重的肝細胞損害情況[18-20]。本實驗中各組間紅細胞計數、紅細胞比容、紅細胞平均體積、紅細胞分布寬度等差異無統計學意義。與SHR模型組相比，蟠桃丸化裁方低劑量組平均血紅蛋白濃度、間接膽紅素、直接膽紅素顯著降低，高劑量組血紅蛋白、平均血紅蛋白濃度均顯著降低，西藥組膽紅素、血紅蛋白等指標無明顯差異。提示服用蟠桃丸化裁方未導致明顯的溶血反應，血紅蛋白下降可能是蟠桃丸化裁方的藥效作用。

血清膽堿酯酶主要由肝細胞產生，是肝臟合成功能的靈敏指標。凡是能夠引起肝臟合成功能下降的疾病，均可導致血清膽堿酯酶活力降低，其下降幅度與功能呈正相關[21]。研究表明，許多疾病中血清膽堿酯酶活性均有不同程度的下降[22]，如腎功能不全[23]、阿爾茲海默病[24]、血管性癡呆[25]、心力衰竭[26]、膿毒血癥[27]。在危重癥病人中，血清膽堿酯酶水平對判斷危重癥病人病情嚴重程度及預后有一定的意義[28]，可作為安全性評價指標之一。本實驗中蟠桃丸化裁方組血清膽堿酯酶水平與SHR模型組比較顯著升高。提示服用蟠桃丸化裁方可上調血清膽堿酯酶水平。

另外，本實驗中SHR雌鼠體重明顯低于其對照品系WKY組，雄鼠體重與WKY對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)，而蟠桃丸化裁方高、低劑量組雌雄大鼠體重較SHR對照組均明顯升高，這可能與服用蟠桃丸化裁方降低了SHR的自發性活動水平有關[29]。藥物常見的不良反應是對肝腎功能的影響。本實驗中模型組AST、γ-GT、尿酸水平較對照組明顯升高，提示隨著血壓的升高，模型組肝腎功能出現損傷，而蟠桃丸化裁方組ALT、AST、γ-GT、尿素、尿素氮、肌酐、尿酸水平與模型組比較均無統計學差異，且肌酐、尿酸水平有下降趨勢，提示常規服用蟠桃丸化裁方不會加重SHR的肝腎損害。

本實驗數據提示，經過11周的蟠桃丸化裁方灌胃給藥，SHR的肝腎功能未見明顯異常，未發生明顯溶血反應，且血清膽堿酯酶水平上調，說明蟠桃丸化裁方具有一定的安全性。本實驗中使用蟠桃丸化裁方未發現明顯的不良反應事件，以上結果僅為蟠桃丸化裁方在高血壓合并認知障礙的臨床應用中提供參考。