通脈止渴膠囊薄層色譜鑒別

鄭榮先

通脈止渴膠囊是我院自制制劑，由葛根、天花粉、當歸、川芎等14 味中藥組成，具有益氣養陰、活血通絡功效。方中以葛根、黃芪、麥冬、黃精、天花粉益氣養陰，扶正固本；配以當歸、川芎、桃仁、紅花、地龍、蜈蚣等以活血通脈。葛根主要有效成分為葛根素，天花粉降血糖主要成分是天花粉凝集素蛋白[1]，當歸、川芎的主要有效成分為揮發油類，幾味藥物均具有有效的薄層色譜法指標控制成分及方法。為了更好地控制該制劑的質量，保證臨床用藥安全有效，采用薄層色譜法對通脈止渴膠囊中葛根、天花粉、當歸、川芎進行定性鑒別，與《中華人民共和國藥典》（2015 版）及有關文獻報道，對該制劑中4 味藥物質量進行控制，建立起更加科學、可行的多指標成分質量控制方法，通過實驗研究，用薄層層析法確定通脈止渴膠囊的質量標準，操作方法簡便，結果準確、可靠。

1 儀器與試藥

ZF-2 型三用紫外分析儀；PQ3120 超聲波清理器；102 型電熱恒溫干燥箱；328A 分析天平；硅膠G 板；葛根素對照品、天花粉、當歸、川芎對照藥材，葛根素對照品（110752-201313），川芎對照藥材（120918-200809）為中國藥品生物制品檢定所提供，天花粉對照藥材（121361-201603），當歸對照藥材（120927-201516）為中國食品藥品檢定研究院提供；分別缺葛根，天花粉，當歸、川芎陰性對照樣品；處方自制制劑供試品三批；其他試劑均為分析純，生產單位為天津市凱通化學試劑有限公司。

2 通脈止渴膠囊中部分藥物薄層色譜鑒別方法和結果

參照《中華人民共和國藥典》2015 版一部各味 中藥藥材的TLC 鑒別方法鑒別[2]，具體如下。

2.1 葛根的薄層色譜鑒別

供試品溶液的制備：取本品內容物20 g，研細，加乙酸乙酯30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加1 ml 甲醇使溶解，作為供試品溶液。點樣量：5 μl；對照品溶液的制備：取葛根素對照品，加甲醇制成每1 ml 含1 mg 的溶液，作為對照品溶液。點樣量：5 μl；陰性對照溶液的制備：取處方中除去葛根的其他藥味，按處方比例制成缺葛根的陰性對照樣品。取陰性對照樣品50 ml，同供試品溶液的制法，制成陰性對照溶液。點樣量：4 μl；展開劑：三氯甲烷-甲醇-水（7：2.5：0.25）為展開劑，展開，展距：上行展開8 cm；顯色：取出，晾干，置氨蒸氣中熏15 min；檢視：置紫外光燈（365 nm）下檢視。見圖1。

圖1 葛根的薄層色譜鑒別

2.2 天花粉的TLC 鑒別

供試品溶液的制備：取本品15 g，研細，加稀乙醇40 ml，超聲處理30 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。點樣量：4 μl；對照藥材溶液的制備：取天花粉對照藥材2 g，加稀乙醇20 ml，超聲處理30 min，濾過，取濾液作為對照藥材溶液。點樣量：2 μl；陰性對照溶液的制備：取處方中除去天花粉的其他藥味，按處方比例制成缺天花粉的陰性對照樣品。取陰性對照樣品50 ml，同供試品溶液的制法，制成陰性對照溶液。點樣量：4 μl；展開劑：正丁醇-無水乙醇-冰醋酸-水（8：2：2：3），展距：上行展開8 cm；顯色：取出，晾干，噴以茚三酮試液；檢視：在105 ℃加熱至斑點顯色，缺天花粉陰性對照藥材在與對照藥材和三批供試品色譜相應的位置上無相同顏色的熒光斑點顯示。見圖2。

圖2 天花粉的薄層色譜鑒別

2.3 當歸、川芎的TLC 鑒別

供試品溶液的制備：取本品15 g，研細，加乙酸乙酯30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 ml 使溶解，作為供試品溶液。點樣量：5 μl；對照藥材溶液的制備：取當歸、川芎對照藥材各1 g，加乙酸乙酯30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 ml 使溶解，作為對照藥材溶液。點樣量：5 μl；陰性對照溶液的制備：取處方中除去當歸、川芎的其他藥味，按處方比例制成缺當歸、川芎的陰性對照樣品。取陰性對照樣品30 ml，同供試品溶液的制法，制成陰性對照溶液。點樣量：5 μl；展開劑：環己烷-乙酸乙酯（9：1），展距：上行展開8 cm；顯色：取出，晾干；檢視：置紫外光燈（365 nm）下檢視。見圖3。

2.4 4味藥物TLC 鑒別結果

供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照在相應位置無斑點，表明陰性對照無干擾。比較不同廠家的薄層板及不同的溫濕度條件，結果色譜圖中均斑點清晰、分離效果較好。故列入該制劑質量標準控制。

3 薄層色譜法鑒別中需要注意問題

3.1 薄層色譜法在2015年版國家藥典委員會單獨納入四部通則色譜法項下薄層色譜法（0502），用于 鑒別、檢查、或含量測定[3]。操作中仍需要加強規范，樣品溶液制備、展開劑、點樣、展開（預飽和、溫濕度控制、Rf 值展距）、顯色、攝像與記錄及圖譜分析與評價等，每一個環節對薄層色譜鑒別均具有重要影響。

圖3 當歸、川芎的薄層色譜鑒別

3.2 醫院處方制劑共14 味中藥組成，成分復雜，待測定成分受其他因素干擾較大，易影響分離效果，影響定性定量的分析。幾組藥物溶液制備采取溶劑提取法，根據該中藥飲片含有各種有效成分在溶劑中的溶解性，分別選取對活性成分溶解度大，對其他成分溶解性小的溶劑而達到該成分的提取，進行薄層鑒別。

3.3 采用微升毛細管手動點樣，注意控制點樣量，點樣量大斑點分離度差，點樣量小斑點顯示清晰度不夠，根據情況選用圓點狀或窄細的條帶狀進行點樣。

3.4 按照《中華人民共和國藥典》，主要考慮溶劑的極性和溶劑的選擇性，控制基線至展開斑點中心的距離與基線至展開劑前沿的距離的比值（Rf）在0.2～0.8，達到最佳的分離效果。

3.5 選用的是煙臺市化學工業研究所生產的硅膠G板，根據展開的效果選用適當的展開方法。將點好樣的供試品、對照藥材、陰性對照藥材的薄層板放入預飽和完展開缸中，浸入展開劑的深度為距原點5 mm，密閉。均上行展開8 cm，取出薄層板，晾干，置紫外燈下（365 nm）檢測。

3.6 比較不同廠家的薄層板及不同的溫濕度條件，結果溫度控制在25 ℃，相對濕度70%時，色譜圖中均斑點清晰、分離效果較好。

3.7 處方中葛根薄層色譜展開后取出，晾干，置氨蒸氣中熏15 min，置紫外光燈（365 nm）下檢視熒光斑點。天花粉薄層色譜展開后取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105 ℃加熱至斑點顯色。當歸、川芎薄層色譜展開后取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視熒光斑點，

4 討論

以硅膠G 板作為吸附劑，分析速度快，在365 nm紫外燈下檢視，斑點熒光靈敏度高，持續時間長，便于觀察。溫度在室溫進行色譜分析，色譜效果較好，溫度過低，展開劑易分層。

各藥物選擇溶媒合理，超聲震蕩法，提取完全，效果好。對缺相應藥物陰性對照溶液，結果在相應位置無斑點，表明陰性對照無干擾。

通脈止渴膠囊以糖尿病患者為適用對象，在臨床實踐治療中以中醫藥理論為指導，糖尿病仍以消渴之“陰虛”為根本病機，治療應以益氣養陰，活血通脈為法。方中以葛根、黃芪、麥冬、黃精、天花粉益氣養陰，扶正固本；配以當歸、川芎、桃仁、紅花、地龍、蜈蚣等以活血通脈以治標，諸藥合用，共奏益氣養陰、活血通脈功效。薄層色譜鑒別中選取方中均具有有效治療成分藥材，建立起多指標成分控制制劑質量的薄層色譜鑒別方法。

葛根具有解肌退熱、生津止渴、透疹、升陽止瀉、通筋活絡、解酒毒功效，主要含葛根素，是其特有的有效成分，在心腦血管系統、糖尿病、腸道系統等組方配伍中應用廣泛。葛根素能降低血糖、血液黏度，具有降低改善脂肪細胞的胰島素抵抗，增強脂肪細胞對葡萄糖提取和利用的能力[4]，因此葛根素能控制血糖濃度，抑制糖蛋白基化的進程，能有效降低血糖，預防和治療糖尿病并發癥。該制劑中選用成分確定，專屬性強的中藥飲片，能有效控制質量。按照《中華人民共和國藥典》及有關文獻報道采用薄層色譜法對葛根進行鑒別，專屬性強，重現性好，選擇的展開劑分離效果顯著，斑點清晰，可作為該制劑的質量控制方法。

天花粉功效清熱瀉火，生津止渴，消腫排膿，文獻中報道，天花粉發揮其藥理活性的主要成分包括天花粉蛋白（Trichosanthin,TCS）、天花粉凝集素（Trichosanthes kirilowii lection,TKL）、天花粉多糖、瓜氨酸，此外還包括皂苷類和黃酮類成分等[5]；天花粉復方制劑有降血糖作用，降血糖活性化合物是植物凝集素類化合物，具有抗脂肪分解和及促進脂肪合成等胰島素樣作用[6]；天花粉中分離得到5 種降血糖有效成分，TrichosanA、B、C、D、E 具有降低正常小鼠的血糖作用[7]；天花粉為“消渴圣藥”，在治療糖尿病及終止妊娠方面具有極高的新藥開發利用價值[8]。

當歸有補血活血，調經止痛，潤腸通便等功效，當歸含有揮發油、有機酸、多糖和黃酮等成分，藥理作用廣泛，當歸“補血”對機體造血作用明顯，通過刺激與造血相關細胞、分子等對造血系統產生影響，達到“補血”作用?！盎钛睂ρh系統作用明顯，通過抑制血小板凝聚達到治療效果，對糖尿病、銀屑病等治療效果明顯[9]；川芎有活血行氣，祛風止痛的功效。川芎揮發油中含有苯酞、烯萜醇、脂肪酸類化合物。藁本內酯、丁基苯酞（3）、丁烯基酞內酯（4）等苯酞類化合物和α-蒎烯（15）、胡蘿卜烯醇（17）等烯萜、烯醇類化合物在川芎揮發油中含量相對較高且穩定，可作為川芎揮發油指紋圖譜的指標成分[10]。兩味藥物均含有揮發油類有效成分，可用水蒸氣蒸餾法提取，方法簡單易行，經濟實用。

4 味藥物均為方中重要藥物，治療作用明顯，成分確定，作為方劑質量控制品種，色譜識別度高，斑 點清晰，結果可靠，因此，可作為通脈止渴膠囊質量控制的依據。