膚陰清洗液的質量控制研究

陳武亮

膚陰清洗液是由我院自制的婦科清洗溶液，主要是根據傳統方劑處方進行添加、去除制成的中藥外用制劑。洗液制劑的組成主要借鑒清代名醫高秉鈞的《瘍科心得集》[1]、顧世澄的《瘍醫大全》[2]以及王清任的《醫林改錯》[3]。其中的苦參湯、塌癢湯以及蛇床子散精煉而成的。在現代藥理學研究中，塌癢湯由苦參、威靈仙以及蛇床子等中藥材組成，主要用于治療婦科中的濕熱下注、陰中作癢以及內外生瘡[4]，在現代醫療中可用于治療陰道滴蟲病。我院自制的膚陰清洗液主要用于清熱燥濕、祛風解毒、殺蟲止癢、收斂止痛。用于婦女陰道炎、陰癢癥、宮頸炎、性病防治，亦用于產褥期、人工流產及婦科手術后的止痛和抗感染，臨床的療效比較顯著，安全性好，不良反應的發生率小。本文采 用了薄層色譜法對制劑中的蛇床子、苦參、黃柏進行鑒定，以較好地掌握其制備方式及質量?，F報道如下。

1 方劑的組成及制備

1.1 方劑組成

蛇床子200 g、白蘚皮200 g、黃柏130 g、百部130 g、苦參130 g、大黃100 g、桉油5 ml、冰片2 g。

1.2 制備方法

將上述各個藥材取蛇床子、白蘚皮、黃柏、百部、苦參、大黃六味中藥材加8 倍量水進行浸泡4 h，武火煎煮至沸騰后，文火持續加熱2 h 后，將藥液過濾網進行過濾，重復上述操作煎提兩次，第二次沸騰時間為90 min，將2 次濾液合并濃縮至稠膏狀，放 冷，加入3 倍量乙醇進行醇沉，靜置過夜，過濾，取濾液回收乙醇至無乙醇味。加純化水至約800 ml，然后用適量乙醇溶解桉油、冰片和適量的防腐劑并慢慢加入上述溶液中，邊加邊攪拌，放涼，最后加純化水至1000 ml，過濾，分裝，即得。

2 儀器與試藥

2.1 儀器

美國梅特勒公司生產的電子天平（精密度為0.0001 g），上海精密科學儀器有限公司生產的精密pH 計，青島海洋化工廠股份有限公司生產的薄層色譜板（硅膠G 板、硅膠GF254 板）。

2.2 試藥

蛇床子素對照品（生產批號：12036-201512）、鹽酸小檗堿對照品（生產批號：12014-201510）、苦參堿對照品（生產批號：12062-201509）、蛇床子對照藥材（生產批號：130214-201504）、苦參對照藥材（生產批號：131019-201507）、黃柏對照藥材（生產批號：131114-201508）均購于中國藥品生物制品鑒定所；膚陰清洗液由我院制劑室制備提供，其余的鑒別試劑均為分析純。

3 質量標準

3.1 性狀

本品為棕黃色液體，氣味有強烈的桉油味道。

3.2 pH 值

液體的pH 值應為3.5～5.0。

3.3 鑒別

取本品20 ml 置于蒸發皿中，水浴鍋上60 ℃蒸干，殘渣加入乙醇溶液10.0 ml 進行溶解，濾過，濾液濃縮至4.0 ml 后作為供試品溶液，備用。另取蛇床子素對照品，精密稱定后，乙醇溶液進行溶液，至容量瓶中定容配制成每1.0 ml 含有1.0 mg 的溶液，作為對照品溶液，備用。按照薄層色譜法[5]，吸取供試品和對照品溶液各2.0 μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉黏合劑的硅膠G 薄層色譜板上，以苯-醋酸乙酯（30∶1）作為展開劑，標尺在1.2 cm 處進行刻度標記，將供試品溶液和對照品溶液點于刻度線，置于上述展開劑中，展開，至展開劑移動至上層刻度線后，取出，晾干，置于紫外燈下在365 nm 處進行檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相對應的位置上，具有相同的熒光斑點。見圖1。

圖1 薄層色譜對照圖

薄層色譜圖表明，將蛇床子素作為對照品，供試品與對照品色譜在相同的位置上具有相同顏色的熒光斑點，供試品與陰性對照品色譜在其他位置上會顯示不同的斑點。

3.4 相對密度測定

經制成的膚陰清洗液三個批次的相對密度分別為1.02、1.024、1.023，與《中華人民共和國藥典》[6]2015年版一部附錄中規定標準≥1.01 相符合，結果表明本溶液工藝的制定是可行的。

3.5 定性鑒別

3.5.1 苦參的薄層色譜鑒別

3.5.1.1 供試品溶液的配制 取膚陰清洗液20 ml，用氨水對pH 值進行調節，調節值在9.0～10.0，后置于分液漏斗中，用三氯甲烷35 ml 振搖提取，取三氯甲烷溶液蒸干，殘渣加入乙醇溶液2.0 ml，將殘渣溶解后密封后作為供試品，備用。

3.5.1.2 陰性樣品溶液的配制 取除了苦參外的剩余中藥材，按照制備工藝制成不含苦參的陰性樣品溶液，按照上述供試品溶液的制備方式配制成陰性樣品溶液，密封后備用。

3.5.1.3 對照品藥材溶液的配制 取苦參對照藥材0.2 g，加入乙醇溶液10 ml 冷浸后過夜，濾過，取濾液作為對照藥材溶液，密封后備用。

3.5.1.4 對照品溶液的配制 苦參堿對照品精密稱定后加入乙醇溶液制備成每1.0 ml 中含有1.0 mg 對照品的對照品溶液，密封后備用。

按照薄層色譜法《中華人民共和國藥典》2015年版一部附錄VI B 試驗方式步驟，微量加樣槍分別吸取上述配制的四種溶液5.0 μl，分別點于同一用羧甲基纖維素鈉作為黏合劑的硅膠G 薄層色譜板上，并以標尺在相應位置橫線作為起始和終止標記，以甲苯-丙酮-甲醇（8∶3∶1.5）作為展開劑，置于氨蒸汽中預飽和15 min，至展開劑移動至終止線后，將色譜板取出，晾干。以碘化鉍鉀試液噴散色譜板使之變色，供試品色譜中，在與對照藥材色譜以及對照品色譜相應的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點，陰性樣品溶液未有干擾。見圖2。

圖2 苦參薄層色譜圖

3.5.2 黃柏的薄層色譜鑒別

3.5.2.1 供試品溶液的配置 取膚陰清洗液20 ml，鹽酸溶液1.0 ml 加入混溶后置于分液漏斗中，采用三氯甲烷35 ml 振搖均勻后將溶液進行提取，取三氯甲烷溶液，置于水浴鍋上蒸干，殘渣置于蒸發皿中加入甲醇1.0 ml 溶解，密封后作為供試品溶液進行備用。

3.5.2.2 陰性樣品溶液的配制 取除了黃柏藥材外其他的方劑中的藥材，按照制備工藝制成缺少黃柏的陰性樣品，按照上述供試品溶液的制備方式制成陰性樣品溶液，密封后備用。

3.5.2.3 對照品藥材溶液的制備 取黃柏對照藥材0.1 g 精密稱定后加入甲醇溶液5.0 ml，加熱回流15 min后，將溶液濾過，取濾液作為對照藥材溶液，密封后備用。

3.5.2.4 對照品溶液的配制 取鹽酸小檗堿對照品精密稱定后，甲醇溶液進行溶解，并制備成每1.0 ml溶液甲醇溶液中含有0.5 mg 鹽酸小檗堿對照品的溶液，密封后作為對照品溶液，備用。

按照薄層色譜法《中華人民共和國藥典》2015年版一部附錄Ⅵ B 實驗，吸取3.5.2.1 項下的供試品溶液和3.5.2.2 項下的陰性樣品溶液各5.0 μl，3.5.2.3 和3.5.2.4 項下的對照藥材溶液以及對照品溶液各2.5 μl，分別點于同一用羧甲基纖維素鈉作為黏合劑的硅膠G 薄層色譜板上，在標記為橫線的地方作為展開的起始位置，并在色譜板的相對頂端以標尺進行終止線的標記。以正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶2）作為展開劑，展開至終止點處，取出，晾干。置于紫外光燈在365 nm 處檢查，供試品色譜中，在與對照藥材色譜以及對照品色譜相應的位置，會顯示相同顏色的熒光斑點，其中陰性樣品溶液并未見干擾。見圖3。

圖3 黃柏的薄層色譜圖

3.6 含量測定

3.6.1 色譜條件的確定 色譜柱采用 EcosilC18（250 mm×4.6 mm,2.5 μm），流動相為乙腈：0.2 mol/L磷酸二氫鉀（0.2 mol/L 硫酸二氫鉀中含有0.2%三乙胺，采用磷酸溶液將pH 值調為2.7）=8∶92，檢測波長為209 nm，柱溫為室溫，進樣量為15 μl，流速為1.0 ml/min。按照苦參堿計算理論塔板數應≥2500。

3.6.2 對照品溶液的制備 精密稱取苦參堿對照品5.0 mg，置于25 ml 的棕色容量瓶中，以流動相為溶解溶液，將苦參堿對照品溶液后定容至刻度，搖勻后，采用0.22 μm 微孔濾膜過濾，得到苦參堿對照品溶液，儲存備用。

3.6.3 供試品溶液的制備 移液管取膚陰清洗液10 ml置于分液漏斗中，采用氨試液將溶液的pH 值調節值9.0～10.0，加入氯仿進行提取，10 ml/次，共提取4 次，合并提取液，置于水浴鍋上蒸干后，殘渣用流動相進行溶液，定容至25 ml 容量瓶中，搖勻后即得供試品溶液。

3.6.4 苦參堿的含量測定 分別精密吸取3.6.2 和3.6.3 項下的供試品溶液以及對照品溶液，按照3.6.1項下的色譜條件進行測定，記錄色譜圖，按照外標法計算供試品中苦參堿的含量，取5 批次（20160112、20160221、20160523、20160721、20160830）的膚陰清洗液按照上述方法進行含量測定，在本品中苦參堿的含量均＞0.4 g/L。

表1 膚陰清洗液中苦參堿的含量(n=5)

3.7 微生物限度檢查

按照2015年版《中華人民共和國藥典》微生物限度檢查法對膚陰清洗液進行衛生學檢查，結果符合搽劑項下的規定。

3.8 穩定性試驗

取樣品溶液5 批次，經過室溫留樣12 個月進行觀察，結果在12 個月內樣品的性狀、檢查、鑒別、含量、穩定性等均無明顯的變化。

4 小結

祖國醫學內容博大精深，其中婦科癥狀陰癢癥主要病因在于肝、脾功能失常，肝經濕熱或者肝郁脾虛化火生濕，濕熱之邪氣隨經下注，蘊結陰器或者蟲擾陰部則發為陰癢[7-8]。膚陰清洗液主要由蛇床子、大黃、苦參、黃柏等中藥制成，其中蛇床子祛風除濕，黃柏、苦參清熱燥濕，白蘚皮清熱解毒止癢，百部獨擅殺蟲，而蛇床子中的蛇床子素具有顯著的抗滴蟲的效果，苦參藥材中含有的苦參堿、氧化苦參堿，黃柏中的有效成分鹽酸小檗堿，百部和白蘚皮中均含有多種生物堿類成分，有較強的體外抗菌的活性，可以抑制細菌、霉菌、滴蟲的生長[9-10]。本品中的諸藥合用，制成濃縮洗液，直接作用于病變的部位，比較容易吸收。

在本次制備洗液過程中，采取了較為傳統的水煎煮提取的方式，將各個藥材進行充分的浸泡，采用細致的純化處理，提高了洗液的質量。在本次研究中制定的膚陰清洗液的質量標準，首先采用了薄層色譜法對于處方中蛇床子中藥材，采用蛇床子素對照品、供試品溶液以及陰性對照品溶液進行鑒別，又采用黃柏和苦參的相應對照品、供試品和陰性對照品進行定性鑒別，并對其相對密度進行測定，以苦參堿含量作為對照進行含量測定，微生物檢查均符合《中華人民共和國藥典》中的規定。并通過多次實驗，確定可以有效的對膚陰清洗液的質量進行控制，表明了膚陰清洗液的制備工藝有效并可行，同時質量具有可控性。