一測多評法測定降脂寧顆粒中的３種有機酸類成分含量

舒柯 申璀 廖敏

【摘要】目的：建立以綠原酸為內參物，測定降脂寧顆粒中君藥山楂所含的3個有機酸類成分（新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸）含量的一測多評（QAMS）方法。方法：采用ThermoUltimate3000液相色譜儀，以WatersX-bridgeC18色譜柱，流動相乙腈-1%磷酸溶液梯度洗脫，檢測波長326nm，體積流量1.0mL/min，柱溫30℃進行測定。以綠原酸作為內參物，建立制劑中其他2種指標性成分的相對校正因子，從而計算各待測成分的量，并與外標法的測定結果進行比較，對該方法進行可行性驗證。結果：在各待測成分的線性范圍內，降脂寧顆粒中的綠原酸與新綠原酸、隱綠原酸2種有效成分的校正因子重現性良好，分別為1.07、0.99;采用一測多評法測定有機酸類成分含量與外標法的含量測定結果無顯著性差異。結論：以綠原酸為內參物，建立的一測多評結果準確可靠，可用于降脂寧顆粒多指標成分的質量控制。

【關鍵詞】一測多評;降脂寧顆粒;相對校正因子;新綠原酸;綠原酸;隱綠原酸

【中圖分類號】R284【文獻標志碼】A【文章編號】1007-8517（2019）8-0049-05

降脂寧顆粒最早收載于吉林省藥品標準（1986年版），原名“血脂寧沖劑”。處方由山楂（去核）、制何首烏、決明子、荷葉4味藥材組成，具有降血脂、軟化血管的作用。從國家食品藥品監督管理總局數據庫中查詢到，目前其執行標準共11份，尚未對方中君藥山楂進行含量控制，而山楂質量的優劣直接影響降脂寧顆粒的藥效。山楂的化學成分主要包括黃酮及黃酮苷類、有機酸類、黃烷類及其聚合物等，有機酸類是山楂健胃消食的有效成分[1-7]。研究選取山楂中的有機酸類成分新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸作為指標性成分進行含量測定。

復方中藥制劑中藥效的發揮是多組分共同作用的結果，其成分具有多樣性、復雜性特點。因此，中藥制劑較單味藥材更需要強調其多成分、多靶點特征。為了更好的控制降脂寧顆粒中山楂的含量，實驗采用多指標質量控制的“一測多評”方法首次對降脂寧顆粒山楂含量進行全面的控制，通過對一個對照品易得成分的測定，實現多個成分的同步監控，本文以綠原酸為內參物，采用高效液相色譜法測3個有機酸類成分含量，改善目前中檢院尚無新綠原酸、隱綠原酸等對照品供應情況，尤其是完善了現行質量標準中無君藥山楂含量控制問題[8-15]。

1儀器與材料

1.1儀器Ultimate3000液相色譜儀及配套工作站（PDA檢測器，賽默飛世爾科技有限公司）;色譜柱：依利特ODS2C18，（4.6mm×250mm，5.0μm）;AgilentZORBAXSBC18，（4.6mm×250mm，5.0μm）;WatersX-bridgeC18，（4.6mm×250mm，5.0μm）;百萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）;超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2材料新綠原酸（批號：MUST-15011413，成都曼斯特生物科技有限公司，含量：93.37%）、綠原酸（批號：110753-201415，中國食品藥品檢定研究院，含量：96.2%）、隱綠原酸（批號：MUST-15011413，成都曼斯特生物科技有限公司，含量：99.07%）;降脂寧顆粒（生產企業：A公司，批號：a-1，a-2，a-3，a-4，a-5，a-6，a-7，a-8，a-9，a-10）。色譜乙腈（美國TEDIA，LOT17080656）、甲醇（國藥集團化學試劑有限公司，10014118），超純水。

2方法與結果

2.1色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，0.1%磷酸為流動相B，按下表1規定進行梯度洗脫;流速為1.0mL/min;新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸檢測波長為326nm;理論塔板數按綠原酸峰計算應不低于10000。圖譜見圖1。

2.2混合對照品溶液的制備稱取新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸對照品適量，置量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每1mL分別含35μg、45μg、34μg溶液，搖勻，作為混合對照品儲備液。精密量上述對照品儲備液1mL，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品混合溶液。

2.3供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品，混勻，取適量，研細，取約3g，精密稱定，置具塞錐瓶中，精密加入50%甲醇100mL，稱定重量，超聲（功率250w，頻率100kHz）處理45min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4陰性樣品的制備取不含山楂藥材的樣品，按照降脂寧顆粒配方（刪除山楂藥材），模擬工藝制備陰性樣品，照供試品溶液制備項下方法制得陰性樣品溶液。

2.5方法考察

2.5.1線性關系考察精密吸取“2.2”項下對照品溶液，進樣量分別為2、3、5、10、15μL分別注入液相色譜儀，以峰面積A對質量數μg進行線性回歸計算，得到綠原酸的線性回歸方程為：y=32060x+69.71，r=0.9996，線性范圍0.0090μg～0.0672μg;隱綠原酸線性回歸方程為：y=2335x+94.32，r=0.9993，線性范圍0.0066μg～0.03867μg;新綠原酸線性回歸方程為：y=3455x+45.28，r=0.9991，線性范圍0.0077～0.0525μg;結果表明3種成分線性范圍內關系良好。

2.5.2精密度試驗精密量取“2.2”項下對照品溶液的制備項下的混合對照品溶液10μL，連續進樣6次，記錄色譜圖，其RSD值分別為新綠原酸1.7%、綠原酸0.6%、隱綠原酸1.5%，表明儀器精密度良好。

2.5.3重復性試驗取同一批（批號：a-1）的樣品，按“2.1”項下含量測定方法，重復測定6次，記錄色譜圖，以綠原酸為S峰，其余2個成分的實際保留時間均在以S峰與相對保留時間所計算的時間范圍內，故可通過校正因子計算出新綠原酸、隱綠原酸的含量，其RSD值分別為1.6%、1.0%、2.4%，表明方法重復性良好。結果見表2。