實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)胰島素及高糖對(duì)巨噬細(xì)胞ACAT-1表達(dá)的影響分析

夏露 藍(lán)秀萬（通訊作者）

（廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 廣西 南寧 530000）

據(jù)調(diào)查可知，近年來我國(guó)的糖尿病患者急劇增加，研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病的發(fā)病機(jī)制和人體內(nèi)的胰島素缺陷有一定的關(guān)系，人體內(nèi)的胰島素缺失會(huì)使得血液中的葡萄糖濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于機(jī)體的耐受點(diǎn)，從而使得患者出現(xiàn)蛋白質(zhì)和脂肪的代謝紊亂，而且還會(huì)使得患者的心血管、腎、眼睛以及神經(jīng)系統(tǒng)等受到不同程度的損傷[1]。糖尿病患者往往具有較高的胰島素血癥和較高的血糖，胰島素血癥會(huì)影響巨噬細(xì)胞ACAT-1，為了探索胰島素和高糖對(duì)巨噬細(xì)胞ACAT-1的影響，結(jié)果如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

實(shí)驗(yàn)中的胰島素、高糖都采購(gòu)于sigma公司，實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒選購(gòu)的是來自芬蘭的公司，DNA試劑盒來自Vgene，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)試劑盒來自日本，其余的都來自中國(guó)。

1.2 方法

胰島素和高糖共同作用于巨噬細(xì)胞ACAT-1分別為0小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)及48小時(shí)。第一步進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；第二步進(jìn)行DNA樣品制作；第三步進(jìn)行設(shè)立以及合成引物；第四步進(jìn)行制備標(biāo)準(zhǔn)品以及陽性對(duì)照品；第五步就是進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2.結(jié)果

2.1 在不同時(shí)間段里胰島素和高糖共同作用于巨噬細(xì)胞ACAT～1的表達(dá)量比較

胰島素和高糖共同作用于巨噬細(xì)胞ACAT-1不同的時(shí)間，12小時(shí)后的表達(dá)量要顯著高于0、6、24及48小時(shí)的表達(dá)量（P＜0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而48小時(shí)的表達(dá)量和0小時(shí)的表達(dá)量相比，無顯著差異（P＞0.05），見表。

表 在不同時(shí)間段巨噬細(xì)胞ACAT-1的表達(dá)量比較（±s）

表 在不同時(shí)間段巨噬細(xì)胞ACAT-1的表達(dá)量比較（±s）

不同時(shí)間段（h）表達(dá)量0 39.75±2.46 6 121.78±3.89 12384.53±11.86 24111.75±9.85 4840.76±2.88 P＜0.05

3.討論

ACAT對(duì)人體膽固醇的形成、運(yùn)輸、吸收以及儲(chǔ)存都有非常重要的關(guān)系，是人體不可缺少的一種酶[2]。ACAT可以分成ACAT-1和ACAT-2，巨噬細(xì)胞主要是ACAT。糖尿病患者往往具有高胰島素血癥，高胰島素血癥會(huì)影響ACAT-1這種酶的活性，從而使得膽固醇酯變化為泡沫，進(jìn)一步促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化[3]。

實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)是臨床上提出的一種新型的檢測(cè)方式，主要特征就是在PCR檢測(cè)中加入了熒光因子，然后利用熒光信號(hào)監(jiān)測(cè)產(chǎn)物的數(shù)量，最后定量分析根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的模板，從而提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確度[4]。實(shí)驗(yàn)中所有的操作過程中都應(yīng)在密封的封閉管中進(jìn)行，由于操作環(huán)境有所限制，就避免了很多的交叉感染，整個(gè)操作過程干凈整潔，不破壞原有的結(jié)果，進(jìn)一步提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。而且實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)和以往的PCR檢測(cè)操作更加簡(jiǎn)單方便，靈敏度更高，重復(fù)性更好，檢測(cè)迅速，更加衛(wèi)生[5]。因此，在臨床上實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)已經(jīng)逐漸取代以往的PCR檢測(cè)。

這次實(shí)驗(yàn)就討論了胰島素和高糖共同作用于巨噬細(xì)胞ACAT-1時(shí)，不同時(shí)間段的表達(dá)量，結(jié)果可知，胰島素和高糖共同作用于巨噬細(xì)胞ACAT-1不同的時(shí)間，12小時(shí)后的表達(dá)量要明顯高于0、6、24及48小時(shí)的表達(dá)量（P＜0.05）；而48小時(shí)的表達(dá)量和0小時(shí)的表達(dá)量相比，無顯著差異（P＞0.05）。這說明胰島素和高糖共同作用于巨噬細(xì)胞ACAT～1時(shí)在剛開始的表達(dá)量最低，然后逐漸上升，在12小時(shí)達(dá)到巔峰，之后又逐漸下降，在48小時(shí)的表達(dá)量已經(jīng)下降到同0小時(shí)的表達(dá)量。

綜上所述，胰島素和高糖共同作用于巨噬細(xì)胞ACAT-1將在12小時(shí)達(dá)到高峰，然后再逐漸下降，在48小時(shí)下降到0小時(shí)的水平。