德陽地區丙型肝炎患者基因型調查分析

王秀 徐志紅 文強 曹桂群

（德陽市人民醫院生殖遺傳科 四川 德陽 618000）

丙型肝炎病毒(HCV)感染是導致慢性肝臟疾病的的主要原因之一，全球HCV的感染率約為2.8%，約1.85億人感染HCV，每年因HCV感染導致的死亡病例約35萬[1-3]。由于丙型肝炎病毒復制所依賴的聚合酶缺乏校對功能，HCV 基因組序列容易發生變異，呈現高度的異質性。根據HCV 基因組核苷酸序列的差異，可將HCV 分為6 種基因型大約80 余種亞型[4-5]。不同HCV基因型感染者的臨床表現、肝病嚴重程度及慢性化病程進展均有差異，抗病毒治療的效果也不同，基因型檢測可為HCV患者個體化抗病毒治療方案提供依據[6]。為了解德陽地區丙型肝炎患者HCV基因型分布情況，對471例丙肝患者HCV基因型檢測結果及與HCV病毒載量相關性進行統計分析，現報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年1月－2016年12月在德陽市人民醫院門診及住院部就診的，471例檢測HCV～RNA水平＞1.0×104的IU/ml的同時進行HCV基因型檢測的丙肝患者為研究對象。其中男226例，女245例；年齡范圍為20歲至78歲。丙肝診斷參照2004年中華醫學會《丙型肝炎防治指南》診斷標準[7],患者此次就診前均未進行過抗病毒治療。

1.2 樣本采集和處理

空腹靜脈采血3ml，3000r/min離心10min；分離血清立即檢測或置于1.5ml。

經高溫高壓滅菌處理的EP管內，放置于～20%冰箱保存1周內檢測。

1.2 主要儀器和試劑:

丙肝病毒核酸定量檢測試劑盒購自凱杰生物（深圳）有限公司；HCV 基因分型檢測試劑盒購自泰普生物有限公司，均采用羅氏LightCycler480 II實時熒光定量PCR儀進行檢測，操作嚴格按照試劑說明書進行。

1.3 檢測方法

血清HCV-RNA定量檢測：樣本核酸提取純化采用二氧化硅吸附分類法，采用RT-PCR方法結合熒光探針擴增檢測技術，對血清標本進行HCV-RNA定量檢測。

HCV 基因分型：采用RT～PCR方法結合熒光探針擴增檢測技術，檢測HCV5種基因型（1b、2a、3a、3b、6a）。

1.4 統計學方法

數據采用SPSS20.0統計軟件進行統計學分析，計數資料采用率（%）表示，進行χ2檢驗，計量資料采用（±s）表示，進行t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2.結果

2.1 德陽地區丙型肝炎患者基因型分布情況：471例丙肝患者共檢出7種基因型，1b型檢出率高占92.36%（435/471）、其余依次為3b型占3.40%（16/471）、6a型占2.33%（11/471）、2a型占0.85%（4/471）、3a型占0.64%（3/471）、檢出兩例混合型（2a/3a、2a/3a各1例）各占0.%（1/471）；見表1。

表1 德陽地區丙型肝炎患者基因型構成情況

2.2 丙肝病毒基因型與病毒載量的相關性

由于1b 型占92.36%，為本地區主要基因型，因此采取對1b 型組和非1b 型組之間HCV～RNA載量進行比較，結果1b 類型的HCV～RNA載量平均值為6.03±1.26（log10 拷貝/ml）， 高于非1b 類型的平均值5.43±1.42（log10 拷貝/ml），t=2.718，P＜0.05。兩者病毒載量差異有統計學意義，1b 型患者HCV～RNA 載量高于非1b 型患者；見表2。

表2 1b型與非1b型血清病毒載量的比較

3.討論

本研究依據Simmonds命名法將HCV遺傳變異性分為6種基因型，每種基因型又分為若干亞型[8]。HCV基因型呈現地域性分布，不同地區HCV基因型構成存在一定的差異[9]。本調查結果顯示：德陽地區HCV基因型以1b型為主占比高（93.26%），其次是3b型占3.40%、6a型占2.33%、2a型少占0.85%、存在少量混合感染2a型合并3a、3b各1例。與林江[10]報道川南地區1b、3b 和6a為優勢基因型的現象一致，但構成比1b型高達93.26%占絕對優勢，高于全國平均水平；與毗鄰樂山地區以1b和2a為主不同[11]；文獻[12]報道的在西部和南部地區，基因1型比例低于全國平均比例，西部基因2型和3型比例高于全國平均比例，混合基因型少見(約2.1%)，多為基因1型混合2型，與德陽地區存在較顯著差異。綜上，德陽地區HCV基因分布表現出1b型優勢顯著，亞型種類豐富的突出特點。

HCV基因分型對丙肝個體化治療至關重要，達到持續病毒學應答(SVR)是治療HCV 感染的目的,也是最重要的治療目標。由于HCV不同基因型具有迥異的致病性和藥物敏感性，不同基因型感染的患者的病毒學應答率差距明顯，如2、3及6型患者較易獲得持續病毒學應答（SVR），而1和4型應答較差，屬于難治性丙型肝炎，其利巴韋林的用藥劑量和用藥時間有顯著差別，選擇的抗病毒治療藥物和療程也應不同[13]。由于德陽地區1b類型患者比例高，1b型導致的丙型肝炎在臨床上為難治類型，因此研究1b型與非1b型之間的病毒載量差異,通過獨立樣本t檢驗，比較1b型與非1b型患者血清HCV-RNA 載量，結果顯示1b型患者HCV-RNA載量高于非1b型患者,t=2.718，P＜0.05，兩者病毒載量差異有統計學意義。從患者血清病毒載量方面反映德陽地區1b類型的丙型肝炎病人的病情要比非1b 類型的嚴重，與臨床上1b型為難治型和易形成慢性肝炎的臨床特點相符[14]。

本次研究，通過了解德陽地區丙型肝炎患者HCV基因型分布情況和分析丙肝病毒基因型與病毒載量的相關性，顯示德陽地區丙肝防治形勢依然嚴峻，同時為德陽地區丙型肝炎患者個體化抗病毒治療方案提供依據。