四川省新篩實驗室G6PD和17-OHP室間質量評價分析

陳雪蓮 歐明才（通訊作者） 張鈺 胡琦 周婧瑤 楊麗涓 蘇星月

（四川省婦幼保健院 四川 成都 610045）

新生兒疾病篩查是一項提高人口健康素質的重要措施，同時新生兒疾病篩查的實驗室工作對國內醫學檢驗界來說也是一個全新的領域[1]。為保證新生兒篩查結果的準確性和可靠性，需要制定相關的技術規范和評價措施來對篩查的全過程進行嚴格的質量控制[2]。現將我室2014年-2018年G6PD和17-OHP項目的質評檢測結果總結如下。

1.資料與方法

1.1 樣本來源

所有質評樣本均由衛生部臨檢中心統一發放，2014年只發放2批次，后面每年都是發放3批次，每批樣本有5份未知濃度的濾紙干血斑，樣本全部密封裝于干燥塑料袋內于2℃～8℃冰箱保存[3-4]。

1.2 儀器和試劑

熒光分析儀（FLX-800型，美國Biotek公司）、微量振蕩器（FWZ-I型，廣州豐華公司）、全自動酶標洗板機（PW-960型，廣州匯松公司）、單孔手握式打孔機（No.97C3，上海瑞天文教用品有限公司）、12道可調移液器（百得30～300ml，北京sartoriust公司）、實驗檢測試劑（G6PD和17-OHP測定試劑盒，芬蘭Labsystems公司）。

1.3 實驗方法

按照衛生部臨檢中心的實驗要求，每年對收到的干血斑樣本進行G6PD和17-OHP濃度檢測，所有質評樣本和常規樣本同等對待并在同一批次檢測[5]。我室G6PD和17-OHP濃度測定均采用熒光分析法，操作步驟按照各自試劑盒說明書進行。實驗結果上報與普通的臨床上報不同，除了要上報定量檢測結果，還需根據自己實驗室的定性判斷標準，上報每份樣本的陰陽性結果。上報時間必須在規定的限期內，超出限期上報結果無效，衛生部臨檢中心將在1個月后反饋結果，并給予成績評分[5]。

1.4 室間質評判斷標準

①定量判斷：將質評樣本與常規樣本一起按常規操作測定，如當次標準曲線良好且室內質控合格，則認為定量結果可信。衛生部臨檢中心的定量結果允許范圍為靶值±30%，超出此范圍者判為未通過(失控)[6]。②定性判斷：根據實驗定量結果，參照自己實驗室G6PD和17-OHP濃度的判斷標準對每份質評樣本進行臨床評估。本實驗室G6PD濃度判定標準為≤2.8IU/gHb為陽性，＞2.8IU/gHb則為陰性；17-OHP濃度判定標準為≥30nmol/L為陽性，＜30nmol/L則為陰性；所有定性判斷結果與衛生部臨檢中心反饋結果進行比對，不符合者判斷為未通過(失控)[6]。

1.5 質評結果評分標準

某個項目的得分=該項目的可接受結果數/該項目總的測定樣本數*100%；某個項目的評分結果≥80%，則判定該項目室間質評合格；全部項目的得分=全部項目的可接受結果數/全部項目總的測定樣本數*100%；全部項目的評分結果≥80%，則該實驗室室間質評合格[3,7]。

2.結果

2.1 質評樣本偏倚分布

四川省新篩查實驗室近5年共接受衛生部臨檢中心分發的14個批次，共計70份質評樣本，G6PD和17-OHP濃度測定結果偏倚分布見圖1和圖2。G6PD測定結果偏倚分布范圍是-13.29%～66.67%，相對偏倚平均值為4.13%；17-OHP測定結果偏倚分布范圍是-10.18%～16.89%，相對偏倚平均值為1.14%。每年度的相對偏倚平均值見表1。

表1 2014-2018年度G6PD和17-OHP相對偏倚平均值

2.2 定量結果評分

70份G6PD質評樣本測定結果中68份通過，定量判斷符合率為97.14%(68/70)；70份17-OHP質評樣本測定結果中70份通過，定量判斷符合率為100%(70/70)，失控見表2。

表2 2份定量失控質評樣本結果

2.3 定性結果評分

70份G6PD質評樣本反饋結果中，陰性32份，陽性38份，定性判斷符合率為100%(70/70)；70份17-OHP質評樣本反饋結果中，陰性25份，陽性45份，定性判斷符合率為100%(70/70)。

2.4 總質評結果評分

70份質評樣本定量和定性判斷總評分見表3，所有項目每批及年度總評分結果均≥80%，獲得室間質評成績合格證書。

表3 質評樣本定量和定性結果評分

3.討論

3.1 室間質評結果分析

四川省新篩實驗室從2014年開始進行G6PD和17-OHP項目的檢測并參加全國室間質量評價。2014年-2018年，共接受衛生部臨檢中心分發的14批次共計70份質評樣本，G6PD相對偏倚平均值為4.13%，17-OHP相對偏倚平均值為1.14%。基于同樣的測定方法，我室G6PD和17-OHP的相對偏移平均值比其他實驗室小，說明實驗室的操作相對穩定，結果均一性較好[3,6]。70份質評樣本，所有項目每批及年度總評分結果均≥80%，表明我室的檢測能力合格，檢測結果是可信的。

3.2 質評樣本失控原因和在控經驗

2份G6PD測定結果定量判斷未通過，且結果都高于靶值的允許范圍，筆者分析造成失控的原因：①實驗采用的3mm的手握式打孔機，由于人為用力不均，且打孔片不夠鋒利，導致樣本周圍會有一些小碎屑的產生，這些小碎屑通過底物的洗脫和反應，導致濃度測定值升高，建議更換自動打孔器或者采用支架法。②微量移液器的使用不當，實驗中推進移液器按鈕過快，產生反沖和氣泡，影響結果的準確性[8]。③2016年第一次質控時間剛好處于實驗員輪崗更換階段，新的實驗員輪崗到此項目，有操作的不熟悉，導致凍干底物和稀釋液的配制，混勻不均，質控樣本結果偏高。對于G6PD項目，結果偏高，就意味著實驗中假陰性率的升高，漏診率的升高。目前我國新生兒篩查已經立法，由于工作的疏忽，特別是漏診將導致承擔法律責任，因此，新生兒篩查的實驗室工作來不得任何疏忽，要引起實驗室的密切注意[9]。17-OHP的定量和定性結果都通過，除了該項目負責人嚴謹的工作態度和精益求精的職業操守，還與實驗室配置的儀器密切相關，17-OHP項目洗板機、振蕩器、移液槍、加樣槽等，都采用專項專用，不與其他項目混用。

3.3 展望

新生兒疾病篩查質量是一個全球性的問題，據相關資料顯示，目前尚沒有一個篩查方法能夠確保漏診率為零[10]。為了保證實驗室的篩查質量，必須做好室內和室間質控，把漏診率降到最低，確保實驗室的篩查質量，使所有新生兒能夠得到及時準確的篩查，為提高人口健康素質的基本國策添磚加瓦[11]。