CIK細胞聯合化療治療非小細胞肺癌的療效及對外周血 T淋巴細胞和Treg細胞水平的影響

賀新，蘭飛，尤向輝

空軍軍醫大學（第四軍醫大學）唐都醫院腫瘤科，西安7100380

肺癌是一種惡性腫瘤，其發病率和病死率均居全世界惡性腫瘤的第1位，大約85%的原發性肺癌是非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）[1-2]。NSCLC發病隱匿，早期無特殊癥狀，確診時一般屬于中晚期，無法進行手術切除或局部放療。化療和分子靶向治療是晚期NSCLC的主要治療手段，但其治療效果仍不盡人意[3-4]。隨著腫瘤免疫學和分子生物學技術的不斷提高，細胞免疫治療逐漸應用于NSCLC的臨床治療中，主要通過體外擴增效應細胞，并回輸效應細胞，刺激機體的免疫應答，依賴效應細胞的高殺傷活性及自體的免疫系統共同抵御腫瘤細胞[5]。細胞因子誘導的殺傷（cytokine-induced killer，CIK）細胞是將不同來源的單個核細胞在體外用多種細胞因子誘導培養后獲得的一群異質性免疫細胞，具有增殖活性高、殺瘤活性強、殺瘤譜廣、對多重耐藥腫瘤細胞同樣敏感、殺瘤活性不受環孢素等免疫抑制劑的影響等優點[6]。本研究分析了CIK細胞聯合化療治療NSCLC的臨床療效及對外周血T淋巴細胞和調節性T細胞（regulatory T cell，Treg）水平的影響，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2016年1月至2017年12月空軍軍醫大學唐都醫院收治的90例NSCLC患者。納入標準：①經病理學檢查證實為NSCLC；②未接受過化療、手術治療或放療。排除標準：①合并中樞神經系統疾病；②合并自身免疫疾病；③合并慢性或急性疾病；④合并其他部位惡性腫瘤。依據隨機數字表法將患者分為對照組和觀察組，每組45例。對照組患者采用多西紫杉醇和順鉑化療，觀察組患者在對照組的基礎上給予CIK細胞免疫治療。對照組中，女20例，男25例；年齡42～81歲，平均（59.2±2.1）歲；TNM分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期12例，Ⅲ期20例；中心型肺癌33例，周圍型肺癌12例；鱗狀細胞癌25例，腺癌15例，其他5例。觀察組中，女19例，男26例；年齡 43～80歲，平均（58.9±2.1）歲；TNM分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期13例，Ⅲ期20例；中心型肺癌32例，周圍型肺癌13例；鱗狀細胞癌26例，腺癌14例，其他5例。兩組患者的性別、年齡、TNM分期等基線特征比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經醫院倫理委員會審批通過，所有患者均對本研究知情并簽署知情同意書。

1.2 治療方法

所有患者均接受多西紫杉醇和順鉑化療，每4周化療1次，用藥前24 h靜脈推注地塞米松5 mg，靜脈滴注西咪替丁0.6 g，以預防多西紫杉醇可能會導致的液體潴留綜合征，每隔12 h 1次，連續3天。觀察組患者接受CIK細胞聯合化療，患者于每個周期化療結束1天后進行CIK細胞回輸治療，每日1次。待血常規正常，收集患者的外周血單核細胞，進行體外培養擴增，然后回輸，持續5天，為1個周期的CIK免疫治療。1個療程包括1個周期化療和1個周期的CIK免疫治療。在進行治療的過程中全程由專職醫護人員參與，且在進行細胞回輸前半個小時，患者需服用非甾體類藥物30 mg，同時肌內注射非那根25 mg，從而預防可能出現的過敏反應。若患者出現其他不適，需對癥治療，若出現嚴重的不良反應，需終止治療。對照組患者僅采用多西紫杉醇和順鉑化療。治療2個療程后評價療效。

1.3 檢測方法

外周血T淋巴細胞檢測：取100 μl外周靜脈血，分別加入20 μl CD4、CD8、CD3抗體，室溫下避光孵育15 min，然后加入Immuno Prep Reagent System細胞裂解液，裂解10 min，1500 r/min離心5 min，棄上清，加入1.5 ml磷酸鹽緩沖液混勻，1500 r/min離心5 min，棄上清，然后上流式細胞儀進行檢測。

Treg細胞檢測：取 100 μl外周靜脈血，依次加入鼠抗人CD4-異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）單克隆抗體、鼠抗人CD25-FITC單克隆抗體，于4℃下避光放置30 min，然后加入紅細胞裂解液裂解樣品管中的紅細胞，最后采用流式細胞儀進行檢測。

1.4 觀察指標和評價標準

比較兩組患者的臨床療效及治療前后兩組患者的外周血T淋巴細胞水平（CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+水平及CD4+/CD8+）和Treg細胞水平（CD4+CD25+水平及CD4+CD25+/CD4+）。依據實體瘤療效評價標準（response evaluation criteria in solid tumor，RECIST）[7]將患者的臨床療效分為完全緩解（complete response，CR）、部分緩解（partial response，PR）、疾病穩定（stable disease，SD）和疾病進展（progressive disease，PD）。總有效率=（CR+PR）例數/總例數×100%。

1.5 統計學方法

采用SPSS 16.0軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組內及組間比較采用配對t檢驗和兩獨立樣本t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床療效的比較

觀察組患者的總有效率為37.8%（17/45），高于對照組的17.8%（8/45），差異有統計學意義（χ2=4.486，P＜0.05）。（表1）

表1 兩組患者的臨床療效

2.2 外周血 T淋巴細胞水平的比較

治療前，觀察組和對照組患者的外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+水平及 CD4+/CD8+比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。治療后，兩組患者的CD3+、CD3+CD4+水平及CD4+/CD8+均較本組治療前升高，且觀察組患者的CD3+、CD3+CD4+水平及CD4+/CD8+均高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表2）

表2 治療前后兩組患者外周血 T淋巴細胞水平的比較（±s）

表2 治療前后兩組患者外周血 T淋巴細胞水平的比較（±s）

注：a與本組治療前比較，P＜0.05；b與對照組治療后比較，P＜0.05

指標CD3+（%）CD3+CD4+（%）CD3+CD8+（%）CD4+/CD8+時間治療前治療后治療前治療后治療前治療后治療前治療后觀察組（n=45）53.56±7.33 71.42±9.39a b 31.04±6.94 45.29±8.10a b 25.96±7.38 25.21±7.61 1.16±0.35 1.82±0.43a b對照組（n=45）53.12±9.05 61.32±9.17a 30.92±8.12 35.93±7.71a 25.87±7.58 26.31±7.62 1.13±0.47 1.35±0.39a

2.3 外周血Treg細胞水平的比較

治療前，觀察組和對照組患者的外周血CD4+CD25+水平及CD4+CD25+/CD4+比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。治療后，兩組患者的CD4+CD25+水平及CD4+CD25+/CD4+均較本組治療前降低，且觀察組患者的CD4+CD25+/CD4+低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表3）

表3 治療前后兩組患者外周血Treg細胞水平的比較（±s）

表3 治療前后兩組患者外周血Treg細胞水平的比較（±s）

注：a與本組治療前比較，P＜0.05；b與對照組治療后比較，P＜0.05

指標CD4+CD25+（%）CD4+CD25+/CD4+時間治療前治療后治療前治療后觀察組（n=45）3.98±1.00 3.65±1.08a 13.12±2.58 8.63±1.79a b對照組（n=45）3.95±1.09 3.70±1.07a 13.08±2.59 11.08±1.78a

3 討論

生物免疫治療是一種逐漸被重視的新型治療模式，而細胞過繼性免疫治療也越來越受到人們的關注[8]。CIK細胞作為過繼性免疫治療的首選，不僅增殖速度較快，對腫瘤細胞具有較強的殺傷活性，而且腫瘤細胞的耐藥性對其殺死腫瘤細胞的效果無影響[9]。CIK細胞是由外周血單核細胞及多種細胞因子如γ-干擾素（interferon-γ，IFN-γ）、CD3抗體和白細胞介素-2（interleukin-2，IL-2）等誘導擴增而來。有研究發現，CIK細胞聯合化療藥物對NSCLC具有較好的治療效果，可增強患者的免疫功能[10-12]。本研究結果顯示，治療后觀察組患者的總有效率為37.8%，高于對照組的17.8%，差異有統計學意義（P＜0.05），提示CIK細胞免疫療法聯合化療治療NSCLC的療效優于單一化療。

T淋巴細胞在機體細胞免疫和抗腫瘤過程中具有重要的調控作用，其中CD3+T淋巴細胞屬于成熟的淋巴細胞，在免疫過程中活性最高[13]。CD4+T淋巴細胞是主要的輔助性T細胞，參與巨噬細胞、B淋巴細胞、細胞毒性T淋巴細胞和自然殺傷細胞的激活，發揮抗腫瘤作用。CD4+T淋巴細胞不僅能夠直接殺死腫瘤細胞，還可以通過其活化使機體對腫瘤的免疫應答具備一定的記憶功能，對再次進行抗腫瘤免疫具有重要作用[14]。CD8+T淋巴細胞又稱T抑制細胞或細胞毒性T淋巴細胞，主要通過抑制CD4+T淋巴細胞和B淋巴細胞的功能，抑制抗體的形成和細胞免疫應答，具有負向調節作用。CD8+T淋巴細胞越多，說明腫瘤細胞不斷增殖，可反映機體對腫瘤細胞的抵抗能力[15]。在T淋巴細胞亞群中，CD4+和CD8+T淋巴細胞發揮調節樞紐的作用，其數量和比值的變化可反映機體的免疫功能[16]。本研究結果表明，治療后，兩組患者的CD3+、CD3+CD4+水平及CD4+/CD8+均較本組治療前升高，且觀察組患者的CD3+、CD3+CD4+水平及CD4+/CD8+均高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），提示CIK細胞治療能夠彌補NSCLC患者因化療引起的免疫細胞數量下降。CD4+CD+25T細胞是具有獨特免疫調節功能的T細胞亞群，在維持自身免疫耐受中發揮重要作用，同時也阻止了機體對自體同源腫瘤細胞的免疫，在腫瘤發生發展以及預后轉歸過程中扮演著重要角色[17]。Treg細胞能夠抑制自身反應性T細胞的免疫反應，促進抑制性細胞因子的釋放，下調免疫共刺激分子和黏附分子的表達[18]。Treg細胞還能夠下調腫瘤局部產生的免疫反應，抑制機體對腫瘤細胞的免疫清除[19]。因此，Treg細胞數量增多說明腫瘤細胞在繼續增殖，其數量與腫瘤的預后呈負相關。本研究結果顯示，治療后兩組患者的CD4+CD25+水平及CD4+CD25+/CD4+均較治療前降低，且觀察組患者的CD4+CD25+/CD4+低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），提示CIK細胞能夠減輕NSCLC患者因化療導致的免疫功能損傷。

綜上所述，CIK細胞聯合化療可提高NSCLC的治療效果，改善患者的免疫功能，為NSCLC的治療提供新的方案。