浸潤性乳腺癌組織中RRNNAA結合基序蛋白 33的表達水平及意義

郭俊杰，李鎖嚴，董麗艷，于偉杰，劉翠萍，韓明玥#

赤峰學院附屬醫(yī)院1乳腺外科，2病理科，內蒙古 赤峰 0240000

浸潤性乳腺癌是威脅女性健康的一種惡性腫瘤，其發(fā)病率較高，據統計中國浸潤性乳腺癌的發(fā)病率低于歐美國家，發(fā)病年齡小于歐美國家，但病死率呈逐年增加趨勢[1-2]。隨著診斷和治療技術的不斷發(fā)展，浸潤性乳腺癌患者的生存率有所提升，但情況仍不容樂觀。RNA結合基序蛋白3（RNA binding motif protein 3，RBM3）是一種冷休克蛋白，可以通過調節(jié)DNA的完整性和DNA修復參與細胞凋亡，且在多種腫瘤組織中表達上調[3-4]。相關研究證實，RBM3在卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌和結腸癌等多種腫瘤中高表達，且與患者預后良好密切相關[5-8]。目前，關于RBM3在浸潤性乳腺癌中的作用機制尚未闡明，而且其與浸潤性乳腺癌患者預后的關系也未明確。因此，本研究對RBM3與浸潤性乳腺癌患者臨床特征和預后的關系進行探討，以期為浸潤性乳腺癌的預后評估提供幫助，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年2月至2016年8月赤峰學院附屬醫(yī)院收治的浸潤性乳腺癌患者。納入標準：①經病理證實為浸潤性乳腺癌；②接受手術治療，并留有完整的腫瘤組織和對應癌旁組織；③年齡為18～65歲；④女性。排除標準：①曾接受放療、化療等治療；②合并其他部位腫瘤；③隨訪時間短于3個月。根據納入和排除標準，本研究共納入136例浸潤性乳腺癌患者。其中，年齡≤50歲87例，年齡＞50歲的49例；絕經前87例，絕經后49例；腫瘤直徑＜2 cm 54例，腫瘤直徑為2～5 cm 51例，腫瘤直徑＞5 cm 31例；浸潤性導管癌117例，浸潤性小葉癌10例，黏液腺癌5例，伴有化生的癌4例；淋巴結轉移數目為1～3個46例，淋巴結轉移數目＞3個35例，無淋巴結轉移55例。收集患者的乳腺癌組織和癌旁組織。

1.2 資料收集

收集患者的病理診斷結果、TNM分期、組織學分期、月經狀況、腫瘤直徑等資料。

1.3 實時熒光定量聚合酶鏈反應法檢測RBM 3 mRNA在浸潤性乳腺癌組織中的表達

無菌環(huán)境下將乳腺癌組織和癌旁組織剪碎放入液氮中研磨，離心，提取上層清液。采用總RNA提取試劑盒[賽默飛世爾科技（中國）有限公司]提取總RNA，然后采用反轉錄試劑盒逆轉錄為cDNA，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應法進行基因擴增，95℃預變性30 s，60℃變性20 s，72℃退火20 s，循環(huán)40次。以β-action為內參，采用2-ΔΔCt法計算RBM3mRNA的相對表達量。

1.4 預后隨訪

采用復診及電話隨訪等方式對所有患者進行隨訪，隨訪截止日期為2019年1月30日，記錄浸潤性乳腺癌患者的復發(fā)、轉移及死亡等情況。

1.5 統計學分析

采用SPSS 23.0軟件進行數據分析。服從正態(tài)分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用配對樣本t檢驗。計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評價RBM3mRNA對浸潤性乳腺癌患者預后的診斷價值。采用Kaplan-Meier法和Cox回歸分析對浸潤性乳腺癌患者無瘤生存預后的影響因素進行分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 RBM 3 mRNA相對表達量的比較

浸潤性乳腺癌組織中RBM3mRNA的相對表達量為（3.64±0.83），明顯高于癌旁組織中的（1.15±0.36），差異有統計學意義（t=60.514，P＜0.01）。

2.2 RBM 3 mRNA表達與浸潤性乳腺癌患者臨床特征的關系

以浸潤性乳腺癌患者乳腺癌組織中RBM3mRNA相對表達量的平均值（3.64）為界，將患者分為RBM3mRNA高表達組（RBM3mRNA＞3.64）61例和RBM3mRNA低表達組（RBM3 mRNA≤3.64）75例。RBM3mRNA高表達組乳腺癌患者的TNM分期、組織學分級、淋巴結轉移數目、ER表達情況、PR表達情況、HER2表達情況與RBM3mRNA低表達組患者比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）；RBM3mRNA高表達組和RBM3mRNA低表達組患者的年齡、腫瘤直徑比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表1）

表1 RBM 3 mRNA高表達組和RBM 3 mRNA低表達組乳腺癌患者臨床特征的比較

2.3 預后情況的比較

截至隨訪結束，患者的隨訪時間為4～60個月，無瘤生存率為31.62%（43/136）。RBM3mRNA高表達組浸潤性乳腺癌患者的中位無瘤生存時間為45個月（95%CI：26～58），RBM3mRNA低表達組浸潤性乳腺癌患者的中位無瘤生存時間為10個月（95%CI：9～25）。RBM3mRNA高表達組浸潤性乳腺癌患者的無瘤生存情況優(yōu)于RBM3mRNA低表達組乳腺癌患者，差異有統計學意義（χ2=8.616，P=0.003）。（圖1）

圖1 RBM 3 mRNA高表達組（ n=61）和RBM 3 mRNA低表達組（ n=75）浸潤性乳腺癌患者的無瘤生存曲線

2.4 RBM 3 mRNA診斷浸潤性乳腺癌患者預后的價值

截至隨訪結束，RBM3mRNA診斷浸潤性乳腺癌患者4～60個月無瘤生存預后的AUC為0.822（95%CI：0.747～0.882），最大約登指數為 0.572，其所對應的最佳截斷點、靈敏度、特異度分別為4.29、96.77%和60.47%。（圖2）

圖2 RBM 3 mRNA診斷浸潤性乳腺癌患者預后的ROC曲線

2.5 浸潤性乳腺癌患者預后影響因素的因素分析

將可能與浸潤性乳腺癌患者無瘤生存時間有關的因素納入Cox單因素分析，結果顯示：TNM分期、組織學分級、腫瘤直徑、淋巴結轉移、ER表達情況、PR表達情況和RBM3mRNA表達情況為浸潤性乳腺癌患者無瘤生存時間的影響因素。進一步將TNM分期、組織學分級、腫瘤直徑、淋巴結轉移、ER表達情況、PR表達情況和RBM3mRNA表達情況納入Cox多因素分析，結果顯示：TNM分期、腫瘤直徑、淋巴結轉移和RBM3mRNA表達情況是浸潤性乳腺癌患者無瘤生存時間的獨立影響因素（P＜0.05）。（表2）

表2 浸潤性乳腺癌患者無瘤生存時間影響因素的因素分析

3 討論

RBM3是一種冷休克蛋白，然而關于其作用機制的研究鮮有報道[9]。有研究顯示，RBM3可能參與DNA的完整性和DNA修復過程，且在其中發(fā)揮重要作用[10]。Kang等[11]研究表明，RBM3在低分化細胞中表達水平較低，且與Ki-67的表達有關。Ki-67是公認的細胞增殖標志物，因此，RBM3可能與細胞增殖有關。體外研究證實，RBM3參與細胞凋亡和腫瘤細胞增殖過程[12-13]。此外，在缺氧條件下，RBM3參與血管內皮生長因子調節(jié)和血管生成[14]。RBM3在正常組織中表達水平較低，但在多數腫瘤組織中高表達[15-17]。已有研究發(fā)現，RBM3表達上調與卵巢癌[18]、前列腺癌[16]、膀胱癌[17]和結直腸癌[19]患者的預后有關。但關于RBM3在乳腺癌組織中的表達及其與患者預后的關系尚未見報道。

本研究通過實時熒光定量聚合酶鏈反應法檢測浸潤性乳腺癌患者乳腺癌組織和癌旁組織中RBM3mRNA的表達水平，結果發(fā)現浸潤性乳腺癌組織中RBM3mRNA的相對表達量明顯高于癌旁組織（P＜0.01），表明RBM3mRNA與浸潤性乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關。本研究對RBM3mRNA與浸潤性乳腺癌患者臨床特征的關系進行分析，發(fā)現RBM3mRNA表達可能與浸潤性乳腺癌患者的TNM分期、組織學分級、淋巴結轉移數目、ER、PR和HER2有關，但與患者的年齡和腫瘤直徑無關，進一步驗證了RBM3mRNA參與浸潤性乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。本研究通過分析RBM3mRNA與浸潤性乳腺癌患者無瘤生存的關系，發(fā)現RBM3mRNA高表達組浸潤性乳腺癌患者的無瘤生存情況優(yōu)于RBM3mRNA低表達組，提示RBM3mRNA表達水平可能與浸潤性乳腺癌患者的預后有關。為此，本研究采用Cox單因素及多因素分析RBM3mRNA與浸潤性乳腺癌患者預后的關系，發(fā)現TNM分期、腫瘤直徑、淋巴結轉移和RBM3mRNA表達情況是浸潤性乳腺癌患者無瘤生存時間的獨立影響因素，與劉堯等[20]結果一致。RBM3mRNA高表達的浸潤性乳腺癌患者預后較好，不僅為浸潤性乳腺癌的預后評估提供了參考，同時，也為靶向藥物研制提供了方向。

本研究仍存在以下不足之處：①樣本量偏小，結論說服力有限；②單中心研究；③僅探討了RBM3mRNA在浸潤性乳腺癌組織中的表達。下一步將進行大樣本、多中心研究，檢測乳腺癌患者血清中RBM3mRNA的表達水平，以驗證其是否與乳腺癌組織中RBM3mRNA同樣具有評估患者預后的價值。

綜上所述，高表達RBM3mRNA的浸潤性乳腺癌患者的預后較好，檢測浸潤性乳腺癌患者組織中RBM3mRNA相對表達量，可以評估患者預后。