梅花豬豬肺炎支原體母源抗體對疫苗免疫抗體影響的研究

胡鴻惠，南文金，黃健強(qiáng)，吳靜波 ，彭國良 ，鐘 瀾,2

（1.韶關(guān)學(xué)院 粵北生豬生產(chǎn)及疫病防控協(xié)同創(chuàng)新發(fā)展中心，廣東 韶關(guān)512005；2.韶關(guān)市畜牧研究所，廣東 韶關(guān) 512026）

梅花豬是我國地方種豬“基因庫”中的寶貴品種資源，是培育優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)“專門化品系”和高檔特色品牌豬肉的良好素材.資料記載梅花豬原產(chǎn)于廣東省樂昌市，以樂昌梅花鎮(zhèn)命名，分布于韶關(guān)各縣市區(qū)、湖南宜章以及廣東的英德、清遠(yuǎn)、佛崗等縣市，具有繁殖力高、母性好、肉質(zhì)優(yōu)良、適應(yīng)性強(qiáng)、抗病性好等獨(dú)特的品質(zhì)［1］.豬呼吸系統(tǒng)疾病，是地方豬種的常見疾病，以豬支原體肺炎和豬傳染性胸膜肺炎較為常見.豬支原體肺炎，又稱“喘氣病”，一年四季、任何年齡段的豬均可感染，全球陽性率約在70%～80%之間，發(fā)病率在40%以上，哺乳仔豬和保育豬的感染率、發(fā)病率、病死率較高［2-3］.大多數(shù)情況下，豬感染支原體后會破壞呼吸道纖毛，引起免疫抑制，且容易繼發(fā)其他病原感染，從而帶來非常嚴(yán)重的損失.有研究表明豬肺炎支原體母源抗體在體內(nèi)的持續(xù)時間較長，會干擾疫苗的免疫效力［4］.本研究對梅花豬保種豬場進(jìn)行豬肺炎支原體抗體檢測，通過監(jiān)測抗體水平的變化規(guī)律，研究母源抗體對疫苗免疫的影響，為合理制定該保種場的免疫方案提供數(shù)據(jù)支撐，為同類地方豬場的科學(xué)養(yǎng)殖和免疫提供借鑒.

1 材料

7、14、28、35、42、56、70、86 日齡梅花豬血清樣品，采自韶關(guān)某梅花豬保種豬場.

豬支原體肺炎滅活疫苗，購自碩騰動物保健品有限公司.豬肺炎支原體抗體檢測試劑盒，購自美國IDEXX公司.

全波長酶標(biāo)儀（型號為MULiskan Go）、臺式冷凍離心機(jī)（型號為Fresc017），購自美國Thermo公司；單道及多道移液器，購自德國Brand公司；恒溫培養(yǎng)箱（型號為303A-4），購自上海申安醫(yī)療器械廠.

2 方法

2.1 免疫

選擇分娩時間相差1 d的4窩仔豬進(jìn)行母源抗體監(jiān)測，每窩仔豬隨機(jī)選擇4頭仔豬，7日齡肌肉注射豬支原體肺炎滅活疫苗，每頭2 mL.

2.2 采樣

分別于出生 7（首免前）、14、28、35、42、56、70、86 日齡前腔靜脈采血 3～5 mL，4℃冰箱靜置過夜，待血液凝固析出血清后，8 000 rpm離心5 min，移取血清置于1.5 mL滅菌EP管中，-80℃保存.

2.3 檢測

按照美國IDEXX公司試劑盒使用說明書進(jìn)行血清樣品的檢測.檢測前將樣品、試劑盒恢復(fù)至室溫，試劑盒反應(yīng)置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行.

2.4 結(jié)果判定

豬肺炎支原體抗體檢測試劑盒：S/P＜0.30，為陰性；0.30≤S/P≤0.40，為可疑；S/P＞0.40為陽性.S/P=(陽性樣品A650值-陰性對照平均A650值)/（陽性對照平均A650值-陰性對照平均A650值）

3 結(jié)果

3.1 豬肺炎支原體抗體檢測結(jié)果

檢測結(jié)果表明，出生7 d和14 d仔豬的豬肺炎支原體抗體合格率均為100%，出生21～35 d抗體水平逐漸下降，28 d時抗體合格率為68.75%，但下降幅度增大，至35 d下降到最低水平，僅25%的抗體合格率，詳見表1.

表1 抗體檢測結(jié)果

3.2 豬肺炎支原體抗體變化規(guī)律

豬支原體肺炎疫苗免疫的仔豬母源抗體效價變化規(guī)律顯示，該場梅花豬仔豬母源抗體在出生時抗體水平較高，并隨日齡逐漸下降，但不同豬群出生時的母源抗體S/P值差距顯著.受測試的4窩仔豬，有3窩均在35日齡達(dá)到抗體水平的最低值，有1窩整體水平持續(xù)下降，但在35日齡時也出現(xiàn)一個低峰后升高，見圖1.

4 討論

圖1 抗體變化規(guī)律

豬支原體肺炎可以通過氣溶膠進(jìn)行傳播，并很容易繼發(fā)感染其他呼吸道的疫病，患有支原體肺炎的豬容易與其他病毒或細(xì)菌發(fā)生混合感染，增加豬群的死亡率，患病豬出現(xiàn)生長發(fā)育不良，料肉比增大，飼料轉(zhuǎn)化率降低，造成生產(chǎn)率和生長速度大大下降［4］.在實(shí)際生產(chǎn)中，豬支原體肺炎多呈區(qū)域性流行，很多豬場從保育階段開始呼吸道疾病相對嚴(yán)重，而注射過呼吸道相關(guān)疾病疫苗的豬場，呼吸道癥狀則多發(fā)生于中大豬.國內(nèi)有不少學(xué)者開展過豬支原體肺炎的區(qū)域流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果表明不同地區(qū)豬群抗體陽性率存在一定差異，多處于45.78%～62.5%之間，趙衛(wèi)永等［5］調(diào)查表明山東蓬萊地區(qū)豬肺炎支原體抗體陽性率為56.48%，師麗敏等調(diào)查海口市及周邊地區(qū)育肥豬豬支原體肺炎感染率在93.3%以上，哺乳仔豬和幼齡豬的發(fā)病率最高，育肥豬和種豬、后備豬多呈隱性感染，不表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，但可檢測到血清陽性.同時，也有研究表明該病抗體陽性率不僅與地理環(huán)境有關(guān)，與豬的品種也存在一定的關(guān)系，嵇辛勤等［6］調(diào)查某地方豬種香豬的豬肺炎支原體抗體陽性率為41.67%，而本場雜交豬的陽性率為28.57%.

基于豬支原體肺炎的感染率較高，且在地方豬種中發(fā)病率相對較高，本研究旨在研究仔豬母源抗體的變化規(guī)律，及疫苗免疫對母源抗體的影響，以求用數(shù)據(jù)指導(dǎo)疫苗免疫和豬場疾病防控.本研究中檢測的大部分梅花豬7日齡未免疫前抗體陽性率為100%；28日齡抗體合格率為68.75%；35日齡時抗體合格率僅25%，這與母源抗體隨日齡增加而下降相關(guān)，而免疫抗體產(chǎn)生量不足.同時，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，受檢的四窩豬群7日齡母源抗體S/P值相差較大，大部分豬只在35日齡達(dá)到抗體水平的最低值，母源抗體水平影響豬群的疫苗免疫效果.其中母源抗體最高的一窩，其母源抗體整體下降速度高于其他三窩，母源抗體越高的豬只疫苗免疫效果越差，可能與首次免疫的時間選擇不合理相關(guān)，也可能是個體差異，還需要進(jìn)一步研究證實(shí).此外，本研究與師麗敏等［7］報道豬肺炎支原體抗體在40日齡段達(dá)到最低有所不同，這可能跟豬的品種、養(yǎng)殖地域、養(yǎng)殖狀況等因素相關(guān).

雖然豬肺炎支原體的免疫保護(hù)效果與體液免疫、細(xì)胞免疫之間的相關(guān)性并沒有研究清楚，其免疫保護(hù)機(jī)制也仍在研究中.但免疫接種依舊是豬場預(yù)防豬支原體肺炎的重要措施之一，通過母源抗體消長規(guī)律選擇最佳免疫接種時間，可以發(fā)揮豬支原體肺炎疫苗免疫的最大效果，提高豬場疫病防控能力，大幅度地降低豬群疾病的發(fā)病率和死亡率［8-9］.

近年來，研究發(fā)現(xiàn)梅花豬特有的品種優(yōu)勢正在退化、特別是繁殖和生長性能方面，這與養(yǎng)殖環(huán)境、疾病控制和品種選育有著一定的相關(guān)性，而豬場呼吸道疾病的控制對高效生產(chǎn)舉足輕重.因此，在梅花豬品種資源保護(hù)和開發(fā)利用的歷程中，更需要科學(xué)、合理的實(shí)施疫苗免疫，同時也考慮結(jié)合整批斷奶和部分清群控制技術(shù)進(jìn)行豬群的呼吸道疾病控制.

5 結(jié)論

本研究中，豬支原體肺炎疫苗免疫后，大部分梅花豬在35日齡時抗體達(dá)到最低值，而母源抗體越高對疫苗免疫影響越大.