紫外分光光度法測定蒙藥材多葉棘豆中總黃酮含量

明 明，武 爽，楊立國，2，代那音臺，2，蘇都那布其，扎拉嘎白乙拉，2*

(1.內蒙古蒙醫藥工程技術研究院，內蒙古 通遼 028000；2.內蒙古民族大學 蒙醫藥學院，內蒙古 通遼 028000；3.庫倫旗蒙醫醫院，內蒙古 通遼 028000)

棘豆止咳散為內蒙古通遼市庫倫旗蒙醫醫院的醫院制劑，是由甘草、川貝母、多葉棘豆、石膏等4味藥組成，對于多種咳嗽均具有明顯療效，且價格低廉，無毒副作用，老人和兒童均可使用[1]。多葉棘豆作為其中一味重要組成藥物，為豆科植物多葉棘豆Oxytropismyriophylla的干燥全草[2]，但由于此藥材受產地、氣候等條件影響，不同批次藥材所含化學成分差異較大。為了有效控制各批次多葉棘豆藥材的質量，考慮到多葉棘豆中主要化學成分為黃酮類[3-10]，本研究利用紫外分光光度法對其總黃酮含量進行測定，并進行方法學考察，報道如下。

1 儀器與材料

FW-177高速萬能粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)；752-PC紫外可見分光光度計；HW-526數顯恒溫水浴鍋(上海恒科學儀器有限公司)；BS224 S分析天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司)；亞硝酸鈉(天津市永大化學有限公司)；硝酸鋁(天津市大茂化學試劑廠)；氫氧化鈉(天津市大茂化學試劑廠)；95%乙醇(天津市永大化學有限公司)；其他試劑均為分析純。實驗用多葉棘豆藥材由赤峰榮興堂藥業有限責任公司蒙中藥飲片廠提供(批號：1710013)；蘆丁對照品購于上海詩丹德標準技術股份有限公司(批號：5718)。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液的制備

取粉碎過40目篩的多葉棘豆藥材粉末約5 g，共6份，各加入50 mL 65%乙醇浸泡，稱定重量，隨后加熱回流2 h，取下放冷，再次稱定重量，用65%乙醇補足減失的重量，過濾，殘渣加50 mL 65%乙醇，再次稱定重量，繼續加熱回流2 h，取下放冷，稱定重量，用65%乙醇補足減失的重量，過濾。合并兩次濾液，搖勻即得供試品溶液。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱定10.08 mg蘆丁對照品，置于50 mL量瓶中，加入65%乙醇溶解，并稀釋至刻度，配置成0.2 mg/mL標準品，冷藏備用[11]。

2.3 標準曲線的繪制

從不同濃度(0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL、0.08 mg/mL、0.1 mg/mL、0.12 mg/mL)配制的標準品溶液中精密量取1 mL，分別置于10 mL量瓶中，加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，靜置6 min后，再加入10%硝酸鋁0.3 mL，靜置6 min，最后加入4%氫氧化鈉試液4 mL，加入65%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min。采用紫外分光光度法，以65%乙醇為參照，在510 nm處測得吸光度，以標準溶液濃度(X)為橫坐標，吸光度(Y)為縱坐標，繪制標準曲線。得回歸方程：Y=11.49X+0.0179，r=0.9995。結果表明，蘆丁對照品在0.01～0.08 mg/mL范圍內線性關系良好，如圖1所示。

圖1 蘆丁標準曲線

2.4 方法學考察

2.4.1 精密度試驗 精確吸取上述供述品溶液1 mL，參照“2.3”項的制備方法顯色及測定吸光度，連續測定6次，RSD為0.36%，結果表明，此方法精密度良好。

2.4.2 穩定性試驗 在室溫條件下，精確吸取上述供試品溶液1 mL，并參照“2.3”項的制備方法顯色后，放置0、5、10、15、20、25 min時測定其吸光度，計算RSD為2.29%。結果表明供試品溶液在25 min內穩定性良好。

2.4.3 重復性試驗 取同一批多葉棘豆藥材，按照供試品溶液的制備方法制得6份供試品溶液，各取1 mL，并參照“2.3”項的制備方法顯色及測定吸光度，計算所得總黃酮的平均含量為0.332 mg/g，RSD為2.54%。表明此方法重復性良好，見表1。

表1 重復性實驗結果

2.4.4 加樣回收率試驗 精確吸取已知含量的多葉棘豆供試品溶液0.5 mL，共6份，分別添加0.2 mg/mL的蘆丁標準品溶液0.5 mL，并參照“2.3”項的制備方法顯色及測定吸光度，并計算回收率。平均回收率為94.66%，RSD為2.46%。說明此方法具有良好的回收率，見表2。

表2 加樣回收率實驗結果

2.5 多葉棘豆總黃酮含量測定

分別稱取5.000 8 g、 4.999 1 g、 5.001 2 g、 4.999 6 g、5.000 9 g、5.001 7 g，共6份多葉棘豆樣品，按照前述方法測定多葉棘豆中總黃酮含量。實驗結果表明，多葉棘豆供試品溶液6次測定的總黃酮平均含量為0.332 8 mg/g。見表3。

表3 樣品含量測定結果

3 討論

目前，內蒙古蒙藥材標準中并未對多葉棘豆總黃酮含量的測定方法進行收錄，本研究建立了多葉棘豆總黃酮含量的測定方法，可用于多葉棘豆藥材質量控制。

本研究對同一批次產自內蒙古地區的多葉棘豆進行了實驗研究，結果表明多葉棘豆中總黃酮平均含量為0.332 8 mg/g。在方法學考察中，加樣回收率的平均回收率為94.66%，RSD為2.46%，重復性RSD為2.54%。綜上所述，紫外分光光度法在多葉棘豆總黃酮含量測定中結果穩定，重現性好，可以用于棘豆止咳散中多葉棘豆的質量控制。