鼻安納米乳凝膠制備及其主要成分含量測定

王 適，何 群

(1.湖南中醫藥大學第二附屬醫院，湖南 長沙 410005；2.湖南中醫藥大學，湖南 長沙 410208)

鼻安納米乳即型凝膠以薄荷腦、丁香酚為主要藥效成分，具有清涼消炎的功效，可用于治療鼻炎。鼻炎是五官科常見病、多發病。目前，治療鼻炎的鼻腔制劑主要有滴鼻劑、噴霧劑、氣霧劑等[1]。液體劑型滴入鼻腔后能夠透過鼻黏膜吸收入血運轉至全身，生物利用度較低，靶向性較差，導致療效降低。半固體劑型涂展性較差，分散不均勻，容易堵塞鼻腔通道。固體劑型(干粉劑)使患者打噴嚏、鼻溢和鼻塞的局部副作用明顯。

即型凝膠兼備溶液劑與凝膠劑的優點，使用方便，并具有良好的組織相容性和生物黏附性，與用藥部位，特別是黏膜組織親和力強，滯留時間長，控制釋藥性能良好。鼻用即型凝膠具有使用方便、給藥劑量準確、與鼻腔黏膜粘附力強的優點。

本文對鼻安納米乳型即型凝膠制劑的制備方法進行研究，并對其主要成分進行含量測定，為其工業化生產提供參考依據。

1 試藥與儀器

1.1 藥材與試劑

薄荷腦(純度99%，吉安市中香天然植物有限公司)；丁香酚(純度99%，吉安市中香天然植物有限公司)；肉豆蔻酸異丙酯(國藥集團化學試劑有限公司)；1,2-丙二醇(天津市恒興化學試劑制造有限公司)；薄荷腦對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號120508-201706)；丁香酚對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110831-201603)；聚氧乙烯氫化蓖麻油(BASF公司)；泊洛沙姆407(BASF公司)；水為蒸餾水，水楊酸甲酯、硫酸鈉、無水乙醇均為分析純。

1.2 儀器

AR124CN型電子分析天平(奧豪斯儀器上海有限公司)；SP-6890型氣相色譜儀(山東魯南瑞虹儀器有限公司)。

2 方法與結果

2.1 鼻安納米乳處方優化

2.1.1 油相的確定 肉豆蔻酸異丙酯(IPM)為納米乳常用油相，因其界面張力低、分散性好、黏滯度較小，因此較易制成納米乳。據報道[2]，采用IPM制成的納米乳穩定性好，易于分布到活性表皮層，增加藥物的滲透性，可以作為納米乳的基礎油相[3]。本實驗將薄荷腦、丁香酚溶于IPM為混合油相。

2.1.2 乳化劑與助乳化劑的確定[4-6]納米乳常用的乳化劑有聚氧乙烯氫化蓖麻油(RH-40)、蓖麻油聚氧乙烯(EL-40)、吐溫-80(Tween 80)等，常用的助乳化劑有無水乙醇、1,2-丙二醇、1,3-丁二醇等。由于前期試驗中選用RH-40和1,2-丙二醇取得較好的乳化效果，制備的納米乳呈淡藍色、澄清透明，光照后有丁達爾現象，離心(3 000 r·min-1，30 min)后穩定，故選用RH-40作為乳化劑，選用1,2-丙二醇作為助乳化劑。

2.1.3 偽三元相優化乳化劑與助乳化劑的質量比(Km值)[7]以RH-40∶1,2-丙二醇的比例分別為2∶1、3∶1、4∶1時繪制偽三元相圖，篩選出最佳Km，結果見圖1。可見Km值為3∶1時，納米乳區域最大，故選擇乳化劑與助乳化劑的比例為3∶1。

圖1 不同Km值偽三元相圖

2.1.4 正交設計試驗法優化納米乳處方組成 影響納米乳制備工藝條件及成品成型性、穩定性較大的3個因素油相、乳化劑及助乳化劑的用量,每個因素取3個水平(3種用量)。見表1。

L9(34)正交設計試驗安排及等級一致性檢驗結果見表2。

表1 因素水平設計 (g)

表2 鼻安納米乳處方篩選正交設計安排及結果分析

觀察納米乳外觀色澤性狀、離心穩定性(3 000 rpm，30 min)，于25 ℃條件下快速攪拌乳化考察成乳時間，觀察澄明度，并對以上4項指標系憑感官感覺打分，由20人參加評價，由好至差按等級排列，排成1～9個等級，20人平均分見表2。

2.1.5 鼻安納米乳制備 稱取處方量丁香酚、薄荷腦置于燒杯中，加入IPM充分溶解成7.5 g的混合油相，在攪拌狀態下加入RH-40 18 g、1,2-丙二醇6 g，25 ℃恒溫磁力攪拌狀態中緩慢滴入常溫蒸餾水。開始時體系黏度較小，隨著蒸餾水量的增加，體系變黏稠，繼續滴加并不斷攪拌，至體系澄明，即得鼻安納米乳。

2.2 鼻安納米乳凝膠制備

2.2.1 即型凝膠劑基質篩選[8-9]由于該制劑為鼻腔給藥，故應選用能與鼻液混合分散良好的水溶性基質。泊洛沙姆(Poloxamer)為最常用的水溶性聚合物，其中泊洛沙姆407具有低溫時為液體、溫度升高時轉變成凝膠的反向熱膠凝特性。以泊洛沙姆407為基質制成的溫度敏感凝膠以涂抹形式給藥，與鼻腔接觸后立刻轉變成凝膠，能夠延長藥物在鼻腔膜滯留時間，提高藥物生物利用度。故鼻安納米乳凝膠以泊洛沙姆407為基質。

2.2.2 鼻安納米乳凝膠基質制備 采用冷法配制，稱取35 g泊洛沙姆407于4 ℃下加入100 mL冰水攪拌分散后，靜置溶解制備成泊洛沙姆凝膠基質，凝膠基質于冰箱中冷藏保存備用。

2.2.3 鼻安納米乳即型凝膠制備 將“2.1.5”項下制備的鼻安納米乳于4 ℃下加入冷藏保存的泊洛沙姆407凝膠基質攪拌均勻，即制備得薄荷腦、丁香酚濃度標示量分別為0.789 mg·mL-1和0.195 mg·mL-1的鼻安納米乳即型凝膠。

2.3 鼻安納米乳即型凝膠含量測定

2.3.1 GC色譜條件[10]色譜柱：DB-WAX；柱溫程序升溫，140 ℃保留15 min，再以15 ℃·min-1升至230 ℃；以氫火焰離子化器為檢測器，溫度250 ℃；柱流量：1 mL·min-1；進樣口溫度：200 ℃；載氣為氮氣，進樣量為1 μL；尾吹30.0 mL·min-1。

2.3.2 內標液制備 稱取水楊酸甲酯約0.2 g，精密稱定，置于100 mL容量瓶中，加無水乙醇定容，制成濃度為 2.268 mg·mL-1的內標溶液。

2.3.3 對照品溶液制備 稱取薄荷腦對照品約0.1 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加無水乙醇定容，制成1.04 mg·mL-1的薄荷腦對照品溶液。同法取丁香酚對照品約0.025 g，精密稱定，置于100 mL容量瓶中，加無水乙醇定容，制成0.256 mg·mL-1的丁香酚對照品溶液。

2.3.4 混合對照品溶液制備 精密移取薄荷腦對照品溶液及丁香酚對照品溶液各1 mL，置于10 mL容量瓶中，加入上述內標液1 mL，加無水乙醇定容。

2.3.5 供試品溶液制備 精密量取鼻安納米乳即型凝膠10 mL，置于50 mL圓底燒瓶中，加入0.25 g·mL-1硫酸鈉10 mL，連接揮發油提取器和回流冷凝管，加熱回流1 h，放冷后回收油層，漏斗過濾后置于50 mL容量瓶中，精密加入內標液5mL，加無水乙醇定容[11]。

2.3.6 陰性對照品溶液制備 按照鼻安納米乳即型凝膠制備方法分別制備不含丁香酚和薄荷腦的陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。

2.3.7 線性關系考察 精密吸取薄荷腦、丁香酚對照品溶液0.5、1、2、2.5、4、5 mL，置于10 mL容量瓶中，并分別加入內標液2 mL，加無水乙醇稀釋至刻度，各取1 μL進樣。以薄荷腦與內標物峰面積比為縱坐標、薄荷腦質量濃度為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程：Y=1.845 3X+0.034 3，r2=0.999 9，表明薄荷腦在0.052～0.52 mg·mL-1濃度范圍內與其峰面積積分線性關系良好。同理，以丁香酚與內標物峰面積比為縱坐標，丁香酚質量濃度為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程：Y=1.645 2X-0.158 2，r2=0.999 8，表明丁香酚在0.012 8～0.128 mg·mL-1濃度范圍內與其峰面積積分線性關系良好。

2.3.8 專屬性試驗 分別精密量取薄荷腦、丁香酚混合對照品溶液，供試品溶液，陰性溶液各1 μL，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜，見圖2。根據圖譜可知，供試品與對照品峰在相應位置均有色譜峰，陰性樣品無干擾，說明此法測定鼻安納米乳即型凝膠中的薄荷腦和丁香酚含量符合定量分析要求。

2.3.9 精密度試驗 分別取薄荷腦、丁香酚對照品溶液1 μL，重復進樣6次，測得薄荷腦和丁香酚的峰面積與內標峰面積之比的RSD分別為3.451%和2.847%。

2.3.10 重復性試驗 取同一批號鼻安納米乳即型凝膠6份按供試品溶液的制備方法制備溶液，測定含量。6份樣品的平均含量RSD分別為薄荷腦3.65%、4.13%。

a.薄荷腦；b.丁香酚；c.水楊酸甲酯(內標)

2.3.11 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別于放置0、6、12、24、36、48 h進樣測定含量，薄荷腦平均含量RSD為2.67%，丁香酚平均含量RSD為3.45%，表明48 h內薄荷腦和丁香酚穩定性良好。

2.3.12 回收率試驗 精密移取同一批號鼻安納米乳即型凝膠10 mL，共6份，分別加入濃度為1.04 mg·mL-1薄荷腦對照品溶液5 mL、濃度為0.256 mg·mL-1丁香酚對照品溶液10 mL，按供試品溶液制備方法制備供試品，按照“2.3.1”項下方法進行含量測定，結果薄荷腦加樣回收率平均值為98.5%，RSD=2.561%(n=6)，丁香酚加樣回收率平均值為97.7%，RSD=3.694%(n=6)，表明本方法符合定量分析要求。

2.3.13 樣品含量測定 取3批鼻安納米乳即型凝膠樣品，按照“2.3.5”項下方法制備供試品，按氣相色譜條件測定含量(標示含量%)，3批樣品平均含量分別為99.7%、99.2%、98.9%。

3 討論

薄荷腦、丁香酚是有效成分，可作為評價鼻安納米乳即型凝膠的質量檢測指標。本實驗曾采用納米乳超聲破乳法，由于檢測成分易揮發，回收率結果不理想，故采用硫酸鈉法破乳。凝膠基質泊洛沙姆407具有高度溫敏性，必須考慮不同溫度條件下的差異性，包括季節性和地域性，溫度的變化會使藥物在儲存過程中的狀態存在較大差異。

到目前為止尚未查閱到鼻炎制劑中有類似本研究中納米乳型即型凝膠的相關報道，本納米乳型即型凝膠劑型為國內首創。