不同部位與處理對(duì)三葉青茶總黃酮含量的影響

洪春桃，沈登鋒，魏斌，章建紅

(寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院 林業(yè)研究所，浙江 寧波 315040)

三葉青(Tetrastigmahemsleyanum)，中文學(xué)名為三葉崖爬藤，又名蛇附子、石抱子、金線吊葫蘆、三葉對(duì)、小扁藤、三葉扁藤、攔山虎、雷膽子等，藥名為三葉青，是葡萄科崖爬藤屬多年生蔓生藤本植物，為中國(guó)特有珍稀藥用植物[1-2]。藥理試驗(yàn)表明，三葉青具有抗腫瘤、抗炎、解熱鎮(zhèn)痛、抗病毒、保肝和免疫調(diào)節(jié)等多種藥理作用[3-6]，且長(zhǎng)期應(yīng)用未見毒副作用，是西藥無法代替的“植物抗生素”。現(xiàn)代化學(xué)分離、分析研究發(fā)現(xiàn)，其主要化學(xué)成分為黃酮及其苷類化合物，臨床上已逐步用于肝癌、肺癌、白血病和艾滋病等疾病的治療[3-4]。隨著人們健康意識(shí)的增強(qiáng)，以傳統(tǒng)中草藥為主要成分的保健茶已成為市場(chǎng)的新亮點(diǎn)。三葉青主要利用部位是塊根，但它的莖葉同樣具有相應(yīng)的功能[7-9]，將三葉青莖葉制成茶葉，既可以消除感冒等病癥又可以提高免疫力，是未來保健茶中的佼佼者。茶優(yōu)良品質(zhì)的形成主要取決于鮮葉質(zhì)量和加工工藝，因此，選擇適宜的制茶工藝對(duì)三葉青茶生產(chǎn)具有重要意義。本研究采用正交試驗(yàn)比較了不同加工處理對(duì)三葉青茶總黃酮含量的影響，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果歸納總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 材料

三葉青嫩葉、老葉和幼嫩莖段采自寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院橫溪鎮(zhèn)大岙村的三葉青基地(寧波，浙江)，采摘時(shí)間為2018年3月中旬。試劑：蘆丁對(duì)照品(批號(hào)：20200423，購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司)，氫氧化鈉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，95%乙醇(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，三氯化鋁(阿拉丁)等。所有試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)，恒溫水浴鍋(上海慧泰儀器制造有限公司)，超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)，酶標(biāo)儀(Thermo Fisher Scientific，USA)，高速冷凍離心機(jī)(Thermo Fisher Scientific，USA)等。

1.3 處理設(shè)計(jì)

1.3.1 三葉青不同加工處理正交試驗(yàn)方法

試驗(yàn)采用3因素3水平的正交試驗(yàn)，對(duì)制茶的殺青方式(A)、干燥方式(B)、取材部位(C)進(jìn)行對(duì)比探討[10-11]，并測(cè)定試驗(yàn)組的總黃酮含量，作為篩選較佳制茶加工條件的依據(jù)。殺青方式：1，鍋炒；2，微波；3，蒸汽[11]。干燥方式：1，鍋炒干燥；2，冷凍干燥；3，烘箱干燥。取材部位：1，嫩葉；2，老葉；3，嫩莖段，其中嫩葉采用每個(gè)枝條頂端的前6輪葉子，老葉為6輪以下的葉子，嫩莖段為頂端的前5段。殺青方式：鍋炒殺青按傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)，高溫，2 min；微波殺青：800 W，0.5～1.0 min；蒸汽殺青：100 ℃，1 min。干燥方式：炒干，30～60 min；冷凍干燥，-60 ℃，12～24 h；烘干，60 ℃，8 h。具體處理組別見表1。

1.3.2 三葉青不同制茶加工樣品的制備

采集樣品后先進(jìn)行挑選，將嫩葉和嫩莖段分開，再進(jìn)行清水漂洗、濾水、攤晾，待沒有水跡后進(jìn)行稱量、分組、制備。將稱量好的嫩葉、老葉和嫩莖段分別按照表1處理方式進(jìn)行試驗(yàn)，并將干燥處理后的樣品密封包裝，置于干燥器中保存用于總黃酮含量測(cè)定。

1.3.3 總黃酮含量測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5.00 mg，加適量70%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，加70%乙醇定容至刻度。將蘆丁配成200.0 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入5% NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min，加10% AlCl3溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min，再加4% NaOH溶液4.0 mL，用70%乙醇定容至刻度，搖勻放置15 min，于500 nm處測(cè)定吸光度[11-12]。所得數(shù)據(jù)經(jīng)回歸處理得到蘆丁濃度與吸光度間的線性關(guān)系：y=0.005 7x-0.033 6，R2=0.9973，y為蘆丁濃度，x為樣品吸光度。

三葉青茶總黃酮含量測(cè)定：將不同組別樣品碾碎，分別放入研缽中研磨呈粉末，粉碎過100目篩，可得到三葉青茶粉，準(zhǔn)確稱取各組三葉青茶粉0.1 g，按1 g∶25 mL料液比加入70%乙醇溶液，超聲提取2次，每次超聲溫度為60 ℃，時(shí)間為25 min，合并提取液，離心，取上清液測(cè)定總黃酮含量。取0.1 mL樣品溶液，根據(jù)本文標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定方法測(cè)定其在500 nm處的吸光度，計(jì)算黃酮得率。將各組數(shù)據(jù)輸入SPSS 18.0軟件進(jìn)行方差分析。

總黃酮得率計(jì)算公式：100CV1V2÷m÷V3。

式中：C表示測(cè)定液的總黃酮質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)(mg·mL-1)；V1表示測(cè)定液的定容體積(mL)；V2表示提取液的定容體積(mL)；m表示樣品質(zhì)量(g)；V3表示測(cè)定時(shí)量取的體積(mL)[12]。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 正交試驗(yàn)結(jié)果

通過L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，比較了不同加工處理對(duì)不同部位三葉青茶樣品總黃酮含量的影響，結(jié)果如表1所示。以幼嫩莖段為材料，采用鍋炒的殺青方式，烘干的干燥方法獲得總黃酮含量最高，為7.81%。通過正交試驗(yàn)主體間效應(yīng)檢驗(yàn)分析可知，不同制茶工藝條件下，材料部位和干燥方式對(duì)總黃酮含量有顯著差異(分別為P=0和P=0.004)，而殺青方式對(duì)總黃酮含量無顯著性影響(P=0.061)，根據(jù)F值大小判斷影響總黃酮含量的因素順序?yàn)椴牧喜课?4 263.255)>干燥方式(231.618)>殺青方式(15.369)。

表1 三葉青不同制茶工藝處理組合的總黃酮含量

2.2 不同殺青方式對(duì)三葉青茶總黃酮含量的影響

根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，將不同殺青方式下三葉青茶總黃酮含量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析可知，鍋炒、微波和蒸汽殺青方式下總黃酮含量分別為5.81%、5.86%和5.69%。采用LSD多重比較分析得出，鍋炒的殺青方式與微波和蒸汽殺青方式之間沒有顯著差異(P>0.05)，而微波殺青和蒸汽殺青方式之間存在顯著差異。

2.3 不同干燥方式對(duì)三葉青茶總黃酮含量的影響

根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，將不同干燥方式下三葉青茶總黃酮含量統(tǒng)計(jì)分析可知，炒干、凍干和烘干3種干燥方式下總黃酮含量分別為5.77%、5.38%和6.11%。采用LSD多重比較分析得出，3種干燥方式之間三葉青茶總黃酮含量均存在顯著差異。

2.4 不同材料部位對(duì)三葉青茶總黃酮含量的影響

根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，將不同材料部位的三葉青茶總黃酮含量統(tǒng)計(jì)分析可知，嫩葉、老葉和嫩莖段的總黃酮含量分別為5.30%、4.46%和7.51%。LSD多重比較分析表明，3種材料部位的三葉青茶總黃酮含量均存在顯著差異。

3 小結(jié)

三葉青作為新入選的“浙八味”[13]，藥用價(jià)值不可小覷，具有“天然抗生素”的美譽(yù)，而其入藥部位主要是塊根[1,3-4,6-8]，對(duì)莖葉的研究利用相對(duì)較少。本研究通過對(duì)三葉青莖葉制茶工藝條件的探索，提高了三葉青莖葉的利用率，也增加了三葉青全株入藥的科學(xué)依據(jù)。三葉青莖葉制茶時(shí)，采用幼嫩莖段作為制茶部位，獲得的三葉青茶總黃酮含量較高，這與前人研究結(jié)果一致[14]。用蒸汽法殺青方式所測(cè)得的各組總黃酮含量均較低，可能是由于蒸汽殺青高溫高濕，迅速破壞了三葉青莖葉中的總黃酮，導(dǎo)致有效成分降低，因而不宜采用蒸汽法殺青。根據(jù)總黃酮得率越大越好，且考慮成本等因素，篩選的三葉青制茶的加工處理工藝為選擇嫩莖段，鍋炒殺青，烘干。